一种新的血管生成抑制因子—TSF的设计及表达

目的 选择 PF4和 TSP1的高活性片段设计融合基因— TSF,在大肠肝菌表达 ,细胞水平上检测表达产物的生物学活性。方法 PF4的 C—末端 13肽和 TSP1的 4 2 9～ 4 5 9片断 31肽通过 Gly-Pro- Gly肽桥设计为融合蛋白— TSF。采用 p GEX- 2 T载体在 E.coli JM10 9中表达 TSF蛋白。采用 MTT方法测定 TSF及其相关物 GST- TSF、PF4 (5 8- 70 )、TSP1(42 9～ 4 5 9)等对血管内皮细胞、平滑肌细胞、QGY772 1人肝癌细胞、HL F人肺成纤维细胞等生长的抑制效应。结果 合成的 TSF融合基因 ,克隆到p GEX- 2 T载体 ,转化 E.coli JM10 9,获得了 TSF蛋白的高效表达。建立了 TSF蛋白的纯化复性方法 ,获得了 GST- TSF融合蛋白及 TSF蛋白。TSF、GST- TSF、PF4 (5 8～ 70 )和 TSP1(42 9～ 4 5 9)均特异抑制血管内皮细胞的生长 ,其中 TSF的活性最强 ,活性大小次序为 TSF>GST- TSF>PF4 (5 8～ 70 ) >TSP1(42 9～ 4 5 9)。结论 融合表达蛋白— TSF在细胞水平上能高效特异抑制血管内皮细胞的生长。

血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应

ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验，测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ，ＰＦ４（５８－７０），ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长，并有明显的剂量依赖关系；非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移；显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成；上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长，１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的，ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．

鲨鱼软骨血管生成抑制因子的抗体制备与组织特异性表达的检测

纯化鉴定了鲨鱼软骨血管生成抑制因子 (SharkCartilage derivedAngiogenesisInhibitoryFactor Ⅰ ,SCAIF Ⅰ )的纯度及分子质量 .采用新西兰大白兔背部皮下多点注射法制备了SCAIF Ⅰ的多克隆抗体 ,测定了抗体的效价 .通过Westernblot检测 ,证明了SCAIF Ⅰ相关蛋白在哺乳动物中的广泛分布及SCAIF Ⅰ在鲨鱼软骨中的组织特异性表达 .