Axl高表达对裸鼠胃癌细胞皮下成瘤的影响

目的 初步探讨Axl高表达对裸鼠胃癌细胞皮下成瘤的影响。方法 通过胃癌手术病理染色分析Axl与胃癌间的关系;通过转染慢病毒构建高表达Axl的胃癌细胞;通过对皮下注射胃癌细胞建立裸鼠胃癌细胞皮下成瘤模型;通过小动物活体成像在体评估皮下肿瘤大小。结果 胃癌手术病人切除组织免疫组化结果显示,Axl在胃癌组织中表达量显著升高;所构建Axl高表达胃癌细胞中Axl表达量升高2. 4倍。利用Axl高表达胃癌细胞建立裸鼠皮下成瘤模型,小动物活体成像显示皮下注射细胞2周后,高表达Axl细胞所形成的皮下瘤明显大于对照组,4周后,差异更加显著(P<0. 01)。最后,高表达Axl胃癌细胞所形成的皮下瘤的体积和重量均显著大于对照组。结论 胃癌组织高表达Axl,Axl高表达能够增强胃癌细胞SGC-7901的皮下成瘤能力。

具有学科特色的消化系疾病生物样本库

随着个体化治疗和转化医学的发展,生物样本库作为临床与科研转化间的桥梁,越来越受到人们的重视,以至越来越多的单位投入到了生物样本库的建设大潮中。但在众多的建设中也出现了一些问题和隐患,包括缺乏统一的建设标准(求量忘了质)、资源利用率不足(求存不求用)。在消化系疾病生物样本库建设过程中建立了严格可行的质量体系,质量控制方案贯穿于样本的收集、整理、入库、应用以及有计划地随机抽检等各个环节,以保证样本的质量;同时,消化系疾病生物样本库也把样本的信息建设作为重要建设内容,除了让样本具备完整的临床信息,还重视随访信息与科研数据信息的更新完善与反馈收集。西京消化病医院初步建立了较高"综合质量"的消化系疾病生物样本库,满足了临床、科学研究的许多需求,发挥了消化系疾病临床与科研转化的桥梁作用。

壳聚糖纳米粒在基因治疗中的应用

壳聚糖是自然界存在的唯一的碱性多糖,具有良好的生物粘附性、生物可降解性及生物相容性。用壳聚糖制备的纳米粒具有助渗作用及生物粘附性,在基因递送载体的研究中具有广阔的发展前景。

比较环孢菌素与英夫利息单抗治疗重症难治性溃疡性结肠炎疗效的荟萃分析

目的比较环孢菌素与英夫利息单抗治疗重症难治性溃疡性结肠炎后结肠切除率及并发症发生率。方法检索PubMed、EMBASE、Cochrane Library数据库中所有关于比较环孢菌素与英夫利息单抗治疗重症难治性溃疡性结肠炎的研究。应用比值比（0R）及其95％CI为疗效分析统计量。用Review Manager5.1软件对符合纳入标准的研究通过固定效应模式或随机效应模式进行荟萃分析，比较使用环孢菌素和英夫利息单抗后的3个月、12个月的结肠切除率及并发症的发生率。结果共9篇文献纳入荟萃分析。其中，6篇为回顾性研究，2篇为前瞻性研究，1篇为多中心随机对照研究。对于3个月的结肠切除率，0R值为1.48（95％CI：0.61～3.62，P=0.39）；对于12个月的结肠切除率，OR值为1.36（95％CI：0.59～3.12，P=0.47）；对于并发症的发生率，0R值为0.88（95％CI：O.54～1.41，P=0.59）。结论英夫利息单抗和环孢菌素在治疗重症难治性溃疡性结肠炎后的结肠切除率和并发症的发生率差异均无统计学意义。

MiR-218慢病毒表达载体的构建及鉴定

构建人m ir-218-2,pre-m iRNA慢病毒表达载体,为研究m iR-218在人体的功能及作用机制打下基础。以人hsa-m ir-218-2前体序列,设计部分互补的正反向引物,进行引物退火,形成引物二聚体。PCR扩增引物二聚体,酶切后插入到线性化pGCSIL-GFP慢病毒表达载体中,对重组质粒进行双酶切鉴定,并进行慢病毒的包装与滴度检测。用构建好的慢病毒表达载体感染人胃癌细胞MKN-28,qPCR检测细胞内m iR-218表达。结果显示,重组质粒经双酶切分析及转化菌液测序,插入序列正确,慢病毒表达载体感染人胃癌细胞后qPCR检测显示能显著增高m iR-218的表达。说明本实验成功构建了hsa-m ir-218-2慢病毒表达载体,感染人胃癌细胞后能有效提高m iR-218的表达。为进一步研究m iR-218在人体的功能及作用机制建立了实验基础。

血清PODXL监测子痫前期早期肾脏损伤的初步研究

目的:探讨血清足细胞标志蛋白足糖萼蛋白(PODXL)在子痫前期早期肾脏损伤和修复中的意义。方法:收集2018年3月至2019年9月于西安交通大学第一附属医院门诊就诊的子痫前期患者54例为病例组(尿蛋白阴性12例,阳性42例;应用硫酸镁9例,未用45例),同期无并发症正常分娩的孕妇39例为对照组。分别于分娩前、产后2天、产后5天和7天测PODXL,比较两组产前及产后血清中PODXL的变化,分析血清中PODXL与尿蛋白的关系以及应用硫酸镁对其浓度的影响。结果:病例组产前PODXL浓度[(11.15±3.38)ng/ml]明显低于对照组[(16.22±4.87)ng/ml](P=0.000);产后PODXL浓度逐渐升高,至产后7天恢复正常。与对照组相比,尿蛋白阴性组产前PODXL[(13.78±1.89)ng/ml]显著降低(P=0.014);尿蛋白阳性组PODXL[(10.40±3.35)ng/ml]显著低于尿蛋白阴性组(P=0.000)。硫酸镁组产后2天血清PODXL[(14.35±1.60)ng/ml]明显高于未用硫酸镁组(P=0.001),且与对照组无统计学差异(P=0.345)。结论:血清PODXL可早于尿蛋白反映子痫前期早期肾脏损伤,产前应用硫酸镁可能利于肾脏足细胞功能的修复。

基于质谱的尿蛋白质组学在肿瘤生物标志物发现中的研究进展

基于质谱(mass spectrometry,MS)的蛋白质组学技术的快速发展,应用蛋白质组学方法寻找新的肿瘤生物标志物成为肿瘤研究的热点。尿液以各种形式收集血液在稳态机制控制下排出的废物,其积累了人体生物系统的变化,能够很好地反映机体疾病的状态。相较于目前临床检测常用的血液样本,尿液样本具有成分简单稳定、可连续收集、更易检测感兴趣的低丰度蛋白等诸多优势,这使其成为肿瘤生物标志物研究的理想来源。尿液蛋白大多为分泌蛋白,因此在尿液中发现的潜在蛋白也可能是血液中很好的生物标志物。本文总结了基于MS的尿蛋白质组学在肿瘤生物标志物发现中的研究进展,并对常见肿瘤中筛选的尿蛋白标志物候选分子进行了系统归纳和分析。

幽门螺杆菌BabA2／UreI融合基因减毒伤寒沙门菌重组活载体疫苗的构建与鉴定

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）由于其高感染率和高危害性成为众多科技工作者的研究重点。减毒伤寒沙门菌是近年发展起来的新型疫苗抗原投送系统，已经构建出许多应用于不同疾病的单价、双价或多价疫苗[1-4]，取得了很多令人鼓舞的成果。本研究拟采用平衡致死系统构建表达Hp粘附素BabA2基因和尿素通道蛋白UreI基因的减毒伤寒沙门菌疫苗株，为进一步探索其体内的免疫作用奠定基础。

TGM2对胃癌细胞BGC-823增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:转谷氨酰胺酶-2(transglutaminase-2,TGM2)是一种多功能的蛋白,在乳腺癌,胰腺癌,黑色素瘤和前列腺癌等肿瘤中高表达,而且和肿瘤的增殖和转移密切相关。本研究旨在探索TGM2对胃癌细胞BGC-823的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:q RT-PCR、蛋白质印迹及免疫组化检测TGM2在胃癌细胞及组织中的表达情况;慢病毒转染胃癌细胞BGC-823以干扰TGM2的表达,荧光显微镜下观察转染效率,蛋白质印迹检测TGM2表达干扰效果;CCK-8法检测TGM2下调对BGC-823增殖能力的影响;Transwell法检测TGM2下调对BGC-823的迁移和侵袭能力影响;蛋白质印迹检测TGM2下调对转移和凋亡相关蛋白表达的影响。结果:TGM2在胃癌细胞和组织中均高表达,P<0.01(q RT-PCR),P<0.001(免疫组化);转染慢病毒后,荧光显微镜下观察结果显示转染效率超过90%,蛋白质印迹结果显示实验组sh TGM2-1的干扰效果最好,TGM2明显下调,差异具有统计学意义,P<0.0001;CCK-8结果表明TGM2下调后,从细胞铺板第2d开始,实验组(sh TGM2-1)的细胞增殖倍数明显下降,P<0.05(2d),P<0.01(3d),P<0.001(4d),P<0.01(5d);Transwell结果显示,TGM2下调后,BGC-823的迁移和侵袭能力明显减弱,P<0.001(迁移),P<0.01(侵袭);蛋白质印迹结果显示,TGM2下调后,NF-κB和Bcl-2表达下调,而Bax表达上调,P<0.05(NF-κB)、P<0.001(Bcl-2)和P<0.0001(Bax)。结论:TGM2下调能抑制胃癌细胞BGC-823的增殖、迁移和侵袭能力,并和NF-κB、Bcl-2的下调以及和Bax的表达水平上调有关,为胃癌的临床治疗提供了新靶点。

微小核糖核酸-25在胃癌患者血清中的异常表达及其临床意义

目的探讨微小核糖核酸-25（miRNA-25）在胃癌患者血清中的异常表达及其临床意义。方法选择第四军医大学西京医院手术及随访资料完整的胃癌（86例）、胃腺瘤（70例）患者和健康对照者（80名）为研究对象，提取血清总RNA，在建立了稳定、敏感的血清miRNA-25绝对定量检测方法（qRT-PCR）的基础上，检测胃癌、胃腺瘤患者和健康对照者血清中miRNA-25表达水平。分析胃癌、胃腺瘤和健康对照者血清中的miRNA-25表达差异及血清miRNA-25表达水平与胃癌临床病理参数的关系。结果胃癌患者血清中miRNA-25的表达水平（135．6ftool／μg总RNA）显著高于胃腺瘤（67．7fmol／μg总RNA）和健康对照者（62．2fmol／μg总RNA，P〈0．01），同时miRNA-25的受试者工作特征曲线显示，血清miRNA-25对胃癌诊断具有良好的特异度和敏感度（曲线下面积=0．827）；有淋巴结转移者[（148．3士10．2）fmol／μg总RNA]和临床病理分期Ⅲ／Ⅳ期[（146．7±9．5）fmol／μg总RNA]胃癌患者血清miRNA-25的表达分别明显高于无淋巴结转移者[（120．3士10．1）fmol／μg总RNA]和I／Ⅱ期胃癌患者[（119．4±12．2）fmol／μg总RNA]（P〈0．05）；相关性研究结果表明，血清miRNA-25高表达胃癌患者的生存期与血清miRNA-25低表达胃癌患者无明显差异（P〉0．05）。结论血清miRNA-25的检测可能有助于胃癌的诊断和预后预测。

Robo1与Nek9相互作用并影响胃癌细胞迁移

目的:筛选与Robo1分子相互作用的蛋白质,为揭示Robo1调节胃癌细胞迁移能力的机制提供线索。方法:通过Transwell迁移实验检测下调Robo1对胃癌细胞SGC7901迁移能力的影响,并对胃癌细胞SGC7901利用Robo1抗体和lgG分别进行免疫沉淀,再经质谱检测及生物信息学分析筛选与Robo1分子特异性结合的蛋白质,通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)验证蛋白质相互作用。结果:(1)转染Robo1小干扰RNA(si RNA)的SGC7901细胞较转染阴性对照RNA的迁移能力显著降低。(2)通过免疫沉淀、质谱检测和生物信息学分析的两次生物学重复得到一系列与Robo1相互作用的蛋白,筛选出丰度高、重复性好且功能相关的Nek9蛋白。(3)Co-IP实验结果显示与对照抗体相比,Robo1抗体可特异性地将Nek9沉淀下来,同时Nek9抗体也可特异性地将Robo1共沉淀下来,确证了Robo1-Nek9的相互作用。结论:Nek9是与Robo1相互作用的蛋白质,Robo1下调影响人胃癌细胞系SGC7901的迁移能力,可能通过Nek9起作用。Robo1-Nek9的相互作用为进一步研究Robo1在胃癌细胞中的功能及机制提供了有利的线索。

缺氧环境下的肝星状细胞中缺氧诱导因子1α与缺氧诱导因子2α对CD248表达水平影响

目的探究缺氧状态下的肝星状细胞(HSC)中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子2α(HIF-2α)对内皮唾液酸蛋白(endosialin/CD248/TEM1)表达水平的影响。方法首先,通过对布-加综合征(BCS)患者肝组织样本进行HIF-1α、HIF-2α和CD248免疫组化染色,并通过计算HIF-1α、HIF-2α和CD248的免疫组化累积光密度(IOD)值来分析CD248与HIF-1α、HIF-2α之间表达的相关性。其次,将成功包装的HIF-1α、HIF-2α过表达慢病毒和空载慢病毒分别感染体外培养的LX-2人肝星状细胞(HSC-LX2),并使用CoCl2进行低氧诱导处理。使用β-actin作为内参基因,通过定量聚合酶链反应技术观察缺氧环境下过表达慢病毒和空载慢病毒感染的HSC-LX2细胞中CD248基因表达水平,并对数据进行统计学分析。结果通过对BCS患者肝组织样本HIF-1α、HIF-2α和CD248的IOD值进行检测,显示CD248与HIF-1α(Pearson相关系数:r=0.285,P=0.010)和HIF-2α(Pearson相关系数:r=0.382,P<0.001)的表达水平呈现显著的正相关。定量聚合酶链反应技术检测显示,与空载慢病毒感染的HSC-LX2细胞比较,HIF-1α与HIF-2α过表达慢病毒感染的HSC-LX2细胞中CD248的表达丰度均明显升高(P均<0.05)。结论在缺氧状态下的HSC中,HIF-1α、HIF-2α均可能参与调控CD248基因表达增加。