恒定的自然杀伤T淋巴细胞在肝脏抗肿瘤免疫中的作用与机制

恒定的自然杀伤T淋巴细胞(iNKT细胞)是来源于胸腺的T淋巴细胞亚群,同时表达自然杀伤细胞相关受体和T淋巴细胞受体。iNKT细胞广泛分布于全身,在肝脏内富集,表现出独特的功能特性,可以分泌细胞因子并调节微环境其他免疫细胞活性,以达到免疫监视及预防疾病的作用,尤其是在肿瘤微环境中,iNKT细胞能够激发肝脏抗肿瘤免疫反应、逆转免疫抑制微环境状态。就iNKT细胞的生物学特性及其在肝脏免疫稳态中的特殊作用,尤其就iNKT细胞的抗肿瘤作用与机制作一综述。

靶向GPC3的第4代嵌合体抗原受体慢病毒载体构建及病毒包装滴定

目的 构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的第4代慢病毒载体,并进行慢病毒载体鉴定、包装及病毒滴度测定。方法 通过分子克隆技术从本实验室第2代anti-GPC3-CAR的慢病毒载体上得到anti-GPC3-CAR序列,并与人源化IL-15/IL-15Rα序列连接后插入慢病毒载体pCDH,重组质粒经菌落PCR及测序鉴定。将构建的重组质粒分别与辅助质粒共转染293T细胞,48 h后收集上清并进行病毒滴度测定,流式细胞术验证anti-GPC3-CAR的表达。结果 成功构建了第4代anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体,并成功包装了慢病毒颗粒。结论 本研究构建第4代anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体,可高效包装出含CAR基因的慢病毒颗粒,一定程度上可提高底盘细胞的功能及持久性,为后期CAR修饰的免疫疗法奠定了基础。

靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的嵌合体抗原受体慢病毒载体构建及病毒包装滴定的实验研究

目的构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的慢病毒载体,并进行慢病毒载体的鉴定、包装及病毒滴度测定。方法设计靶向GPC3抗原的嵌合性抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)分子重组基因及特异性引物,用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对CAR分子重组基因进行体外扩增及PCR反应片段搭桥,双酶切后定向插入到pCDH质粒,构建pCDH-anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体,经菌落PCR、DNA凝胶电泳及测序鉴定。将目的质粒与包装质粒共转染293T细胞,收集上清液按不同比例稀释后感染293T细胞,流式细胞术检测anti-GPC3-CAR表达并计算病毒滴度。结果经菌落PCR及测序证实,正确构建重组慢病毒载体pCDH-anti-GPC3-CAR,包装后的病毒滴度为(1.50~3.24)×10^(6)TU/ml。结论本研究成功构建携带不同共刺激分子的pCDH-anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体,可在293T细胞中表达并产毒,为后续构建CAR免疫细胞提供技术储备。