COVID-19相关心肌炎的研究进展

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)是一种新型冠状病毒,主要感染肺脏造成新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)。近年的临床病例报告了其心血管系统并发症主要为心肌炎、心律失常、心肌梗死等。其中,COVID-19相关心肌炎症状多样,不同年龄段均可发生,存在延迟发作,且与COVID-19患者的不良预后和死亡率呈正相关。因此,研究其临床特点、潜在发病机制和治疗方法可对未来COVID-19相关心肌炎的防治及药物开发提供新的思路和策略。本文将结合国内外关于COVID-19相关心肌炎的研究进行概述。

云南摩梭人7项不对称行为特征的研究

在云南省丽江市宁蒗县永宁乡中学对250例摩梭人中学生(男125例,女125例)的7项不对称行为特征(扣手、利手、叠臂、叠腿、利足、起步及利眼)进行了研究.结果显示:(1)摩梭人的扣手、利手、叠臂、叠腿、利足、起步和利眼左型率分别为29.6%、6.4%、49.2%、20.4%、3.2%、41.6%和32.4%;左型率均低于右型率;仅扣手出现率性别间差异具有统计学意义;(2)在中国少数民族中,摩梭人扣手左型率和利足左型率处于较低水平,利手、叠臂、叠腿、起步类型和优势眼左型率均处于中等水平;(3)摩梭人利足分别与扣手、利手、叠臂两两相关,叠腿和利眼两两相关;(4)聚类分析结果显示,摩梭人与云南蒙古族距离最为接近,与内蒙古蒙古族诸族群距离较远.

摩梭人5项舌运动的类型

目的:研究云南摩梭人5项舌运动类型特点,探讨摩梭人与其他族群的亲缘关系,为摩梭人民族识别提供生物学依据.方法:采用x2检验和聚类分析,对云南丽江州宁蒗县永宁乡中学摩梭人250例学生(男125例,女125例)进行了5项舌运动类型(卷舌、叠舌、翻舌、尖舌和三叶舌)的研究.结果:摩梭人卷舌、叠舌、翻舌、尖舌和三叶舌的出现率分别为60.4％、6.4％、4.4％、48.8％和10.4％,5项舌运动类型出现率性别间差异均无统计学意义.与我国云南和内蒙古的部分少数民族比较,摩梭人卷舌、尖舌、三叶舌出现率处于较低水平,卷舌出现率低于蒙古族9个族群,尖舌和三叶舌出现率均明显低于蒙古族10个族群,叠舌和翻舌出现率处于中等水平.卷舌除与叠舌基因不存在相关外,与翻舌、尖舌和三叶舌均存在相关,其他组合间不存在相关.结论:摩梭人5项舌运动类型出现率与革家人、苗族最为接近,卷舌、尖舌和三叶舌出现率均明显低于蒙古族.

HPLC法测定导赤冲剂中异牡荆苷和异荭草苷的含量

目的建立导赤冲剂中异牡荆苷和异荭草苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为迪马C18柱,流动相为四氢呋喃-乙腈-0.2%磷酸水溶液(66∶22∶12),流速为1.0mL.min-1,柱温为35℃,检测波长为330nm。结果异荭草苷在0.82～4.08μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9990),平均加样回收率为98.4%,RSD为2.7%;异牡荆苷在0.79～3.96μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.8%,RSD为2.6%。结论建立的含量测定方法简便、准确、灵敏,可用于导赤冲剂中异牡荆苷和异荭草苷的含量测定。

PLTL教学模式在药物毒理学教学中的应用

探讨同伴主导的小组学习(Peer-Led Team Learning,PLTL)教学模式在临床药学专业本科生药物毒理学教学实践中的效果。在靶器官毒理学案例教学过程中,首次引入研究生作为学生导师参与小组讨论学习,通过评估量表对学生的学习效果进行综合评价。PLTL教学模式既解决了传统教学师资不足的问题,又大大提高了本科生的学习成绩、自学能力和综合素质。

急性心肌梗死大鼠钙离子调控相关基因表达的变化

目的探讨急性心肌梗死大鼠心肌组织中L型钙通道α1,β亚单位(Cacna1c、Cacnb2)、兰尼碱受体(Ryr2)、肌浆网钙ATP酶(Serca2a)、钠-钙交换体(Ncx1)等钙离子调控相关基因表达的变化。方法采用左冠状动脉前降支结扎法制备大鼠心肌梗死模型,术后6 h经TTC染色法观察并计算心肌梗死体积,经Real-time PCR法检测梗死区心肌组织中Cacna1c、Cacnb2、Ryr2、Serca2a、Ncx1 mRNA表达情况。结果与假手术组不同,模型组大鼠冠脉结扎后ECG可见明显的S-T段改变,且伴有不同程度的心律失常。模型组大鼠心肌梗死体积为(38.36±8.59)%,显著高于假手术组。与假手术组相比,模型组大鼠心肌L型钙通道α1,β亚单位mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而Ryr2、Serca2a、Ncx1 mRNA的表达均显著减少(P<0.05,P<0.01)。结论钙离子调控相关基因Ryr2、Serca2a、Ncx1在大鼠急性心肌梗死中扮演重要角色,其表达异常可能是导致梗死后心肌收缩和舒张功能障碍的机制之一。

TTC染色评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤梗死面积的适宜观察时间及计算方法

目的探索氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤梗死面积的适宜观察时间及计算方法。方法将11只豚鼠离体心脏分为2组:对照组(control组,n=5)和缺血30 min再灌注60 min组(I30R60组,n=6)。Langendorff灌流后垂直心脏长轴将心脏横切成5片,弃去心耳片后,由心耳往心尖方向依次记为第1片、第2片、第3片、第4片并进行TTC染色,分别于染色后4个时间点(1、2、3、4周)对4个横切片进行逐个观察,并通过统计前2片、前3片和前4片的方法计算梗死面积百分比。结果与control组比较,I30R60组在第1周观察时第1至第4横切片梗死面积百分比均显著增加(P<0.05);第2周观察时,第1片无明显梗死,其余3个横切片与control组比较可见明显梗死区域(P<0.05);第3周观察时,4个心脏横切片梗死面积与control组比较无统计学差异(P>0.05);第4周观察时,仅第4片与control组比较具有统计学差异(P<0.05)。在计算梗死面积百分比方法中,与control组比较,I30R60组采用前2片、前3片和前4片进行计算,在第1周和第2周观察梗死面积具有统计学差异(P<0.05),在第3周、第4周观察均无统计学差异(P>0.05)。结论用TTC染色法评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤时,单片及多片心脏横切片评估梗死程度染色后第1周及第2周内观察为宜。

不同缺血时间对豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响

目的探讨不同缺血时间对豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响。方法将23只豚鼠离体心脏随机分成4组:正常组(Control,n=6)、缺血30 min再灌60 min组(I30R60,n=6)、缺血40 min再灌60 min(I40R60,n=5)、缺血50 min再灌60 min组(I50R60,n=6),观察不同缺血组缺血前及再灌期间心率和冠脉流量,测定灌流液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶(creatine ki-nase,CK)漏出量及组织中超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,并以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chlorid,TTC)染色法测定梗死面积。结果与Control组相比,I30R60组各指标尚未全部发生明显变化;而I40R60和I50R60组心率和冠脉流量降低,梗死面积加大,灌流液中LDH和CK漏出值升高,组织中SOD和MDA值降低;上述所观察指标中,I50R60组变化更为明显。结论豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤受缺血时间的影响,豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型的建立以缺血50 min为宜,再灌时间可考虑限制于15～60 min之间。

黄芪甲苷对心肌细胞L型钙电流及细胞内钙的影响

目的研究黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)对豚鼠心室肌细胞L型钙电流和细胞内钙的影响。方法分离单个豚鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术测定钙电流,并采用荧光显微镜CCD成像系统动态观察细胞内钙(intracellular calcium concentration,[Ca2+]i)变化。结果 1×10-6mol·L-1AS-IV可明显抑制I Ca-L,使最大电流峰值降低32.6%。AS-IV对60 mmol·L-1KCl诱导的[Ca2+]i升高有抑制作用,最大荧光密度变化值从1.17±0.30(n=6)降低到0.26±0.16(n=5,P<0.05)。AS-IV可直接促进钙池内钙释放,使[Ca2+]i从0.08±0.02(n=10)升高到0.23±0.07(n=8,P<0.05)。结论 AS-IV抑制L型钙通道,可减少细胞外钙内流;同时它促进内钙释放,对心肌细胞内钙稳态表现为双向调节作用。

遗传性癫痫大鼠海马组织Ca^(2+)/Ca_V1.2/CaM/CaMKⅡ信号通路的异常变化

目的研究遗传性癫痫大鼠(tremor,TRM)海马组织电压门控性L型钙离子通道α1C亚单位(CaV1.2)、钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化情况。方法应用West-ern blot法与免疫荧光双标法检测TRM海马CA1、CA3和DG区CaV1.2、CaM和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)的蛋白表达及分布;激光共聚焦显微镜检测TRM海马组织中[Ca2+]i。结果与正常Wistar大鼠相比,TRM海马组织中CaV1.2和CaM的蛋白表达明显升高(P<0.01),而p-CaMKⅡ的蛋白表达明显下降(P<0.01);免疫荧光双标法结果显示:CaV1.2、CaM、p-CaMKⅡ在CA1、CA3区的锥体细胞和DG区的颗粒细胞群表达丰富,同时CaV1.2与CaM、p-CaMKⅡ与CaM在海马各区域均存在共定位;激光共聚焦显微镜检测TRM海马细胞[Ca2+]i明显增强(P<0.01)。结论Ca2+/CaV1.2/CaM/CaMKⅡ通路的异常变化可能参与遗传性癫痫大鼠的癫痫发生与发展。

无镁诱导培养大鼠海马神经元癫痫放电模型中延迟整流钾电流的变化

目的利用无镁细胞外液诱导原代培养大鼠海马神经元癫痫放电模型来检测延迟整流钾电流的变化。方法采用新生24 h内Wistar大鼠,分离海马神经元进行原代培养。体外培养至12~16 d时,无镁细胞外液处理神经元3 h并恢复正常细胞外液,应用全细胞膜片钳技术记录神经元的放电情况及延迟整流钾电流。结果无镁处理后的神经元存在自发的"癫痫样"放电;无镁诱导可使神经元延迟整流钾电流增大。结论延迟整流钾电流增大可能与无镁诱导体外培养大鼠海马神经元自发异常放电的基础病理机制相关。

羧甲基壳聚糖对大鼠单一心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流的作用

目的 探讨羧甲基壳聚糖 (CMCS)对心血管作用的机制。方法 利用膜片钳全细胞记录方式 ,双脉冲方波刺激 ,首先给一个时程为 2 0 0ms ,保持电位 - 6 0mV ,去极化到 +30mV的条件脉冲 ,间隔 2 0ms后 ,再给予波宽 12 0 0ms的方波刺激 ,保持电位- 6 0mV ,刺激电压从 - 40mV～ +5 0mV ,步阶电压10mV。结果 CMCS抑制IKur,当其浓度为 1和 2g·L- 1时 ,指令电位 +5 0mV的电流值分别由给药前的 ( 1.8± 0 .7)和 ( 2 .0± 0 .6 )nA下降到 ( 1.6± 0 .6 )(n =12 ,P <0 .0 1)和 ( 1.5± 0 .5 )nA (n =7,P <0 .0 1)。其他指令电位下的IKur的改变也符合此趋势。增加刺激频率及指令电压IKur的变化均不显著 ,提示CMCS对IKur的抑制作用不具有电压依赖性和频率依赖性。结论 CMCS可抑制大鼠单一心房肌细胞IKur。

Cav1.2钙通道片段CT1融合蛋白的制备及生物学活性鉴定

目的诱导表达Cav1.2钙通道片段CT1与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法将pGEX6p 3/CT1重组质粒转化入E.coli BL21中并诱导表达,采用非离子去污剂B per的方法分离纯化GST CT1融合蛋白,使用Western blot技术鉴定GST CT1融合蛋白,pull down assay实验方法检测GST CT1融合蛋白的生物学功能。结果非离子去污剂B per能够成功分离纯化GST CT1融合蛋白,识别此片段的特异性抗体能够检测到GST CT1融合蛋白;制备获得的GST CT1融合蛋白具有与钙调蛋白结合的生物学功能。结论技术简单、操作快速的非离子去污剂B per能够分离纯化具有生物学功能的GST CT1融合蛋白。

体外重组CaV1.2不同蛋白片段纯化及其与CaM相互作用的研究

目的纯化CaV1.2不同蛋白片段并研究其与CaM的相互作用。方法质粒转化、筛选得到转化成功BL21菌株,利用IPTG诱导GST钙通道融合蛋白表达,Glutathione-Sepharose 4B beads纯化钙通道不同蛋白片段;采用GST pull-down assay实验研究钙通道蛋白不同片段与CaM以及突变体的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得钙通道不同蛋白片段;GST pull-down assay结果显示CT1可与CaM及突变体结合,且GST-CT1与野生型CaM结合量显著多于与突变体CaM结合量。结论成功纯化CaV1.2钙通道蛋白片段并顺利完成GST pull-down assay实验,为深入研究蛋白相互作用或发现新的蛋白相互作用奠定了基础。

豚鼠钙调蛋白2基因编码区及3′端非编码区序列克隆

目的克隆豚鼠钙调蛋白2(Ca M2)基因编码区及3′端非编码区,为豚鼠Ca M基因功能等研究提供遗传学信息。方法以豚鼠心肌组织作为实验材料提取RNA,通过RT-PCR和3′-RACE PCR的方法扩增Ca M2的编码区和3′端非编码区序列,应用基因工程技术插入克隆载体构建重组质粒后基因测序及分析。结果克隆出豚鼠Ca M2基因编码区450 bp序列和3′端非编码区660 bp序列。分析编码区序列所编码的氨基酸序列与其他种属其他亚型完全一致。而3′端非编码区与其他亚型的同源性较低。结论成功获得了豚鼠Ca M2基因编码区和3′端非编码区序列,为进一步研究Ca M2的基因功能及其在相关疾病中的作用奠定基础。

重组钙调蛋白及其突变体蛋白的分离纯化及活性鉴定

目的建立一种简单稳定高效分离纯化体外重组钙调蛋白(CaM)及其突变体蛋白的方法。方法将CaM及其三种钙结合位点突变体的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CaM及其突变体的GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化。采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量;采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度;采用膜片钳技术检测纯化后蛋白的活性。结果纯化的CaM及突变体蛋白具有较高的纯度;CaM及突变体蛋白得到了大量表达;纯化后蛋白可恢复已"run-down"心肌细胞膜钙通道的活性。结论本研究成功建立了一种稳定高效简单的重组CaM及其突变体蛋白的分离纯化方法,为深入研究CaM的生物学功能奠定了基础。

心肌L型钙通道钙依赖性调节研究新进展

L型钙通道(L-type calcium channel,LTCC)是钙离子(Ca2+)进入细胞内的主要途径,它是心肌中重要的离子通道,参与心脏的收缩与舒张。LTCC是由α1、α2/δ、β、γ五个亚单位构成的复合物,并且由多基因编码。LTCC的功能受Ca2+、CaM、CaBP1、Calpastatin以及CaMKII等蛋白质的调节,且其具有钙离子依赖性。近年来新的研究表明LTCC也可以进行自我调节。LTCC失调导致多种严重的心脏疾病,因此了解其调节机制具有重要的意义。本文结合了我们实验室和国内外关于心肌LTCC的钙依赖性调节的研究新进展做一下概述。

多孔n-HA/PVA/CS复合水凝胶的制备与抑菌性能研究

以纳米羟基磷灰石、聚乙烯醇、壳聚糖为原料,采用物理交联法制备复合水凝胶(n-HA/PVA/CS),并测定其含水率、力学强度及微观结构。采用比浊法和平板计数法测定n-HA/PVA/CS复合水凝胶在酸性条件下的最低抑菌浓度和抑菌率,同时对比研究其对革兰氏阴性菌大肠杆菌(E.coli)和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(S.aureus)的抑菌性。结果表明,n-HA/PVA/CS复合水凝胶具有均匀分散的三维多孔结构,含水率75%,拉伸强度0.26 MPa。经过2%(质量分数)的醋酸溶液处理的n-HA/PVA/CS复合水凝胶材料对S.aureus和E.coli的最低抑菌质量浓度均为0.5 g/L;在该复合水凝胶质量浓度为2.0 g/L时,对S.aureus的抑菌率为84%,对E.coli的抑菌率达到99%,当其样品质量浓度为2.5 g/L时,对E.coli抑菌率接近100%。n-HA/PVA/CS复合水凝胶可望成为性能优良的人工角膜支架材料。

变性再复性方法提取高纯度Cav1.2片段GST-CT1及其生物活性的鉴定

目的探寻诱导谷胱甘肽转移酶(GST)与Cav1.2钙通道片段CT1重组的易形成包涵体的大分子融合蛋白的提取与纯化的方法。方法在E.coli BL21中转化入p GEX-6p-3/CT1重组质粒并诱导表达,采用GST包涵体变性复性试剂盒和非离子去污剂B-PER分离纯化GST-CT1融合蛋白,用Pull down assay方法鉴定GST-CT1融合蛋白及其生物活性。结果应用GST包涵体变性复性试剂盒和非离子去污剂B-PER能够分离得到高纯度的易形成包涵体的GST-CT1融合蛋白,且分离纯化的GST-CT1融合蛋白具有与钙调蛋白结合的生物活性。结论操作简易的GST包涵体变性复性法能够针对易形成包涵体的GST-CT1融合蛋白进行分离和纯化,且得到的蛋白具有生物学活性。

PBL结合Seminar教学法对临床药学专业学生学习能力的培养

PBL结合Seminar教学方法首次应用于临床药学专业药物毒理学的教学。90名学生平均分为传统教学组、PBL教学组与PBL结合Seminar教学组三组,应用评估量表来评价教学效果。与传统教学组和PBL教学组相比,PBL结合Seminar组学生的学习主动性、沟通能力以及分析问题、解决问题等学习能力显著提高。PBL结合Seminar教学方法能够提高教学效果和学生的学习能力。