苦参碱对脂多糖／痤疮丙酸杆菌诱导的小鼠肝炎及产生肿瘤坏死因子的影响

用小鼠致死性肝炎模型和ＴＮＦ体外诱生的方法，研究苦参碱（Ｍａｔ）对脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）诱导的经痤疮丙酸杆菌（ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｔｔｍａｃｎｅｓ，ＰＡ）预刺激的小鼠产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）以及致死性肝炎的影响。结果表明：Ｍａｔ（１０，５０ｍｇ·ｋｇ￣（－１），ｉｐ，ｂｉｄ×３ｄ）可降低血清ＴＮＦ和ＡＬＴ水平及小鼠对ＬＰＳ致死毒性的敏感性，并可在体外抑制ＬＰＳ诱导的经ＰＡ预刺激的小鼠腹腔巨噬细胞释放ＴＮＦ。提示Ｍａｔ的保肝作用与其抑制ＴＮＦ释放有关。

蛋白激酶C抑制剂对沙土鼠和大鼠实验性脑缺血所致脑水肿的影响

以沙土鼠单侧结扎颈总动脉造成单侧脑水肿病理模型，观察了两种蛋白激酶Ｃ（ＰＬＣ）抑制剂１－（５－异哆琳磺酞基）－２－甲基哌嗪（Ｈ－７）及苦参碱（Ｍａｔ）对实验性脑缺血所致的脑水肿的影响，结果表明：缺血前３０ｎｉｉｎｌｐＨ－７（６．２５和１２．５ｒｎｇ·ｋｇ－１）可有效减轻沙土鼠单侧结扎颈总动脉７ｈ所致的结扎侧脑半球的水肿程度，同时减少该侧脑半球电解质的蓄积；Ｍａｔ（２５和５０ｍｇ·ｋｇ－１）对沙上鼠单侧结扎颈总动脉７６以及ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ大鼠中动脉阻塞ｌｈ后再灌流２４ｈ所致的脑水４中均有防治作用。

应用酵母单杂交系统筛选CpG免疫激活序列的特异性结合蛋白

目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。 方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性克隆以电泳迁移率变动分析 (EMSA )进行验证。结果 :已获得 4个双阳性克隆 ,其中两个编码功能未知的蛋白 ,而另外两个均属抗体轻链 ,分别与抗 DNA抗体和抗乙肝表面抗原抗体 (HBs Ab)高度同源 ;EMSA发现 HBs Ab可在偏酸 p H条件下 (p H6 .4和 5 .8时 )特异性地与含 ISS的寡核苷酸 (Cp G- ODN)结合。 结论 :HBs Ab可与

CpG-寡核苷酸对免疫细胞基因表达的影响

目的:研究CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)对免疫细胞基因表达的影响。方法:用Cy3和Cy5两种荧光分子通过逆转录反应将CpG-ODN刺激前后的单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞的mRNA分别标记成探针,混合后与小鼠基因表达谱芯片杂交,通过扫描、计算机分析,寻找经CpG-ODN刺激后差异表达的基因。结果:CpG-ODN刺激RAW264.7细胞6 h后,2次芯片杂交筛选出重复差异表达的基因119条,其中74条上调,45条下调;这些基因涉及细胞周期、免疫调控、脂肪代谢、泡沫细胞形成、信号转导等过程。结论:CpG-ODN可广泛调控巨噬细胞内多种基因的表达,对相关基因群的进一步研究有助于深入了解CpG-ODN的作用机制。

生物技术药物教学内容和模式的优化探索

为提高生物技术药物课程的教学质量,对该课程的教学内容和教学模式在以下几个方面进行了优化:在教学内容上求精求新,注重突出学科特色,同时充分利用网络资源,拓展学生的知识面,激发其学习主动性;在教学方式上采用多媒体教学,提高课堂授课质量,并在传统课堂讲授教学的同时,适当结合问题导向式教学模式,积极开展教学互动;在理论教学的基础上,进一步加强实验教学,提高学生的实践能力和创新能力。

萘磺酰胺衍生物对细菌脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的影响

研究了6种氯代萘磺酰胺衍生物对细菌脂多糖(LPS)诱导经卡西霉素A_(23187)体外激活的巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)作用的影响。表明:将氯代萘磺酰胺的氨基接以亲水性不同长度碳链的胺基,所得衍生物可明显抑制LPS诱生TNF的作用;接以疏水性烷基,则可明显增强亚适剂量的LPS诱生TNF的作用,且碳链长度对化合物的作用强度有一定的影响。

DNA的免疫激活作用——Ⅱ应用基础研究进展

综述免疫激活序列 (ISS)应用基础方面的研究进展。ISS- DNA不仅有望成为新一代高效低毒的免疫佐剂 ,而且在抗肿瘤、抗感染、促进造血、治疗免疫缺陷以及防治哮喘等方面均有非常乐观的应用前景。

课题式教学在基因工程药物教学中的应用

基因工程药物课程内容庞杂,理论体系复杂且实践性强,单纯采用传统课堂讲授式教学难以达到理想的教学效果。介绍了在基因工程药物教学中引入课题式教学法以提高教学质量的一些做法,不仅可以使学生更加深刻地理解基因工程药物相关的概念、原理,还可以提高获取知识的兴趣和能力,培养科学研究的思维和创新意识,增强交流沟通、团队合作等多方面的综合素质。

生物技术综合性实验教学的探索和实践

综合性实验项目的开设可以提高学生的综合分析问题和解决问题的能力，从生物技术综合性实验的构想、设计、实施、效果等方面探讨了生物技术专业综合性实验的教学，以期为生物技术实验教学改革提供借鉴。

DNA的免疫激活作用——Ⅰ.作用机理研究进展

含有免疫激活序列的DNA或寡聚核苷酸对脊椎动物的免疫系统可以产生广泛的激活作用。本文综述DNA免疫激活作用的结构基础。

苦参碱对大鼠实验性肝纤维化的影响

目的：研究苦参碱对肝纤维化的防治作用及其机理。方法：应用四氯化碳诱导大鼠实验性肝纤维化，并以苦参碱防治。观察了３，６，１２周对照组、模型组、治疗组的血清丙氨酸转移酶（ＡＬＴ）、透明质酸（ＨＡ）、肝组织羟脯氨酸（ＨｙＰ）含量以及肝脏病理变化。结果：苦参碱５０ｍｇ／ｋｇ和１００ｍｇ／ｋｇ均能显著减轻肝细胞变性、坏死及纤维组织的形成，同时能降低不同实验阶段血清ＡＬＴ（Ｐ＜０．０１）、ＨＡ（Ｐ＜０．０１）以及肝组织中Ｈｙｐ含量（Ｐ＜０．０５）。结论：苦参碱有防治四氯化碳诱发的肝纤维化的作用。

水飞蓟宾对小鼠肝脏炎症损伤和肿瘤坏死因子的产生及活性的影响

建立了小鼠肝损伤模型及体内外肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）诱生的方法，研究水飞蓟宾（ＳＢ）对肝脏炎症损伤、ＴＮＦ产生及其生物活性的影响。结果表明∶ＳＢ在体内外均可显著抑制脂多糖（ＬＰＳ）诱导ＴＮＦ产生；在体外能抑制ＴＮＦ对肝细胞系ＧＳＧ７７０１和成纤维细胞系Ｌ９２９的细胞毒作用；在体内对ＬＰＳ诱导的痤疮丙酸杆菌致敏的小鼠肝脏炎症损伤有保护作用。提示ＳＢ的保肝作用机理与其抑制ＴＮＦ的产生和活性有关。

苦参碱对细菌脂多糖诱导大鼠枯否细胞释放肿瘤坏死因子及白细胞介素-6的影响

目的是研究苦参碱对细菌脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｈｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）诱导经卡西霉素（ｃａｌｃｉｍｙｃｉｎ，Ｃａｌ）预激活的大鼠枯否细胞分泌肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）、白细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６，ＩＬ６）的影响以及对小鼠体内产生ＴＮＦ和ＩＬ６的影响。结果，苦参碱１２５，２５０及５００ｍｇ·Ｌ－１剂量依赖性抑制大鼠枯否细胞分泌ＴＮＦ和ＩＬ６；苦参碱５０及１００ｍｇ·ｋｇ－１降低小鼠体内ＴＮＦ和ＩＬ６的水平。提示苦参碱的抗炎作用可能与其抑制ＴＮＦ及ＩＬ６的产生有关。

苦参碱对巨噬细胞释放肿瘤坏死因子及其蛋白激酶C活性的影响

研究了用苦参碱（Ｍａｔ）处理内毒素诱导卡西霉素启动的小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍ ），观察其对分泌肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的影响，及在此过程中Ｍ 胞浆和胞膜部分蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性的变化。结果表明：Ｍａｔ０．５、１．０ｍｍｏｌ／Ｌ均可显著抑制ＴＮＦ分泌，对Ｍ胞浆和胞膜ＰＫＣ活性也有抑制作用。提示：Ｍａｔ抑制ＴＮＦ分泌与其抑制Ｍ 内ＰＫＣ活性有关。

孕妇血样采集后体外存放对血浆中胎儿游离DNA水平的影响

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性,单相酶扩散法测定血浆DNA酶活性。结果:血样体外存放36h后,血浆中β-globin基因的拷贝数较存放6h的样品显著增加,而SRY基因拷贝数明显减少;4℃存放条件下,妊娠晚期孕妇外周血中胎儿DNA占总DNA百分比从6h的(10.3±5.6)%下降到36h的(3.0±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。体外存放6h的血样中基本未检出死亡细胞,而存放36h的血样中分别检出了坏死和凋亡的白细胞;36h样品血浆中LDH活性较6h样品显著升高(P<0.05)。单相酶扩散法结果表明,血浆DNA酶在4℃时虽然活性显著减弱,但仍然保持降解DNA的能力。结论:血样采集后体外存放时间过长会导致血浆总游离DNA增多,而胎儿DNA减少,这种变化可能与血样体外存放过程中白细胞死亡和血浆DNA酶对胎儿DNA的降解作用有关;胎儿DNA抽提应在血样采集后尽早(6h内)进行。

ESAT6抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

目的?构建结核杆菌ESAT6抗原DNA疫苗,并观察其在BALB/c小鼠体内诱导的免疫应答。方法:构建结核杆菌 ESAT6抗原DNA疫苗pVAX-ESAT6,并将其肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,用ELISA方法检测小鼠的血清抗体(IgG、 IgG2a/IgG1)水平,并在体外用特异抗原刺激小鼠脾细胞,检测其分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平;用乳酸脱氢酶(LDH)释 放法测定小鼠细胞毒性T淋巴细胞反应。结果:pVAX-ESAT6DNA疫苗诱导了抗原特异的体液免疫应答和细胞免疫应答, 抗体亚型检测显示IgG2a与IgG1的比值为(2.28±0.4),脾细胞分泌的细胞因子水平检测显示IFN-γ的水平(360±45pg/ml) 高于IL-4的水平(124±16pg/ml)。结论:成功地构建了pVAX-ESAT6DNA疫苗,它能在小鼠中诱导抗原特异的免疫应答, 应答类型以Th1型占优势。

稳定表达结核分枝杆菌38抗原的EL-4细胞株的建立及鉴定

将结核分枝杆菌的38抗原基因片段经PCR方法扩增并插入到pcDNA3真核表达载体中,通过脂质体转染EL-4细胞,经G418筛选,用RT-PCR方法和ELISA方法检测整合和表达情况。结果成功地构建了pcDNA3-38抗原重组质粒,转染细胞中可检测到38抗原的存在,PCR扩增也证实38抗原基因已稳定整合于EL-4细胞的染色体中。本实验为今后在小鼠体内检测结核DNA疫苗激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应奠定了基础。

结核杆菌保护性抗原-遍在蛋白质系统的建立

目的 :将结核杆菌 4种保护性抗原基因与小鼠遍在蛋白质 (泛素 )基因融合 ,建立抗原 -遍在蛋白质系统。方法 :通过RT- PCR技术从小鼠睾丸组织中克隆遍在蛋白质 c DNA,同时培养结核杆菌并从基因组中克隆出 4种保护性抗原编码区 ,然后通过柔性接头将遍在蛋白质与 4种抗原的基因分别融合在一起 ,并插入到 p VAX质粒中。结果 :扩增出来的 4种抗原基因大小分别约为 0 .3、0 .7、1.0、1.6 5 kb,遍在蛋白质 PCR产物约为 0 .2 kb,均与 Gen Bank中登录的相符 ;p VAX重组质粒酶切结果显示融合基因正确地插入到 p VAX载体中 ,全自动测序显示抗原基因和遍在蛋白质基因均为所需基因 ,柔性接头序列也完全正确。 结论 :成功地构建了中国株结核杆菌的 4种保护性抗原基因 -遍在蛋白质融合系统 。

我国鹅细小病毒研究进展

1小鹅瘟的流行病学 鹅细小病毒（GPV）属于单股DNA病毒,在分类学上属于细小病毒科,细小病毒亚科,细小病毒属的成员。小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种传播快、死亡率高、高度接触性急性或亚急性败血性传染病,大多发生在1个月龄以内的雏鹅,2-3日龄的雏鹅即开始发病,7日龄以内的雏鹅最易感染。该病具有较强的传染性和较高的死亡率,随着近年来对小鹅瘟病毒流行病学的研究发现，小鹅瘟易感鹅群的发病日龄有逐渐增大的趋势，而且呈现无规律散发性流行。