小鼠海马发育过程中丝切蛋白及其磷酸化调节基因表达差异分析

论文旨在研究小鼠海马发育不同时期丝切蛋白及其磷酸化状态调节基因的表达量变化模式,为进一步研究丝切蛋白在海马发育过程中的功能以及其活性调节奠定基础。用半定量PCR检测不同时期丝切蛋白及其磷酸化调节基因相对表达量,通过ImageJ对结果进行分析,得出丝切蛋白及其磷酸化调节基因在小鼠海马发育不同时期表达量的变化趋势。结果表明,在小鼠海马发育不同时期丝切蛋白一直处于高表达状态,随着海马发育成熟丝切蛋白的表达量呈缓慢下降趋势。在这个过程中丝切蛋白磷酸化基因表达量呈明显下降趋势,P0时期LIMK1的表达量是P14时期的5.05倍(n=3)。与此相反,随着海马的发育中丝切蛋白去磷酸化基因表达量呈明显上升趋势,在P60时期CIN的表达量约是P0时期CIN表达量的2.88倍(n=3),P14时期SSH3的表达量约是P0时期的26.5倍(n=3)。其中LIMK2、TESK1、TESK2、SSH1和SSH2在这个过程中的表达量变化不明显。以上结果表明在小鼠海马发育过程中机体主要是通过调节丝切蛋白活性以满足不同发育时期对其活性的需求,其中LIMK1、CIN和SSH3是主要的丝切蛋白活性调节因子。

对保险营销员税负过重问题的思考

营销员税负过重问题一直是限制保险营销队伍建设和寿险市场拓展的瓶颈。营销员实行的是代理人制度,与保险公司签订的是代理合同,没有底薪,收入来源于按保费收入一定比例提取的佣金,不享受保险公司任何福利待遇及费用支持,包括“三险一金”企业承担部分。双重缴纳税金造成实际收入较低,导致营销员税负过重,我们将其税负与按工资薪金所得纳税做一比较,

进一步完善江西省小额担保贷款的调查与思考

自小额担保贷款启动以来,江西各相关部门通力合作,严格国家政策规定,结合江西省实际,制定了切实可行的小额担保贷款实施办法,并随着小额担保贷款工作的推进,不断地加以规范完善。

新农村建设呼唤新型农村融资体系

党的十六届五中全会将建设社会主义新表村确定为我国现代化进程中的重大历史任务，为“三农”问题的解决提供了新的战略机遇，同时也对金融支农的广度和深度提出了更高要求。农村金融能否适应农村经济的发展变化、充分发挥服务“三农”的整体效能，直接关系到社会主义新农村建设大局。当前，新农村建设资金需求量更大、服务需求手段更广、产品需求更趋多样化，但金融资源对农业和农村经济发展供给不足、配置不合理的问题较为突出。金融支农在体制、机制和方式上还存在诸多阻滞和壁垒，亟待通过构建功能完善、分工合理、机制灵活的多元化新型农村金融服务体系加以改观。

关于我国注册会计师事务所及其分所准入机制的研究报告——以江西省为研究样本

江西省会计师事务所的发展有着自身的特点,本文以江西省的事务所分所为研究样本,选择事务所分所准入机制为研究角度,从发展现状、存在问题和政策建议三个方面开展研究,以期为注册会计师法的进一步完善提供参考。

六举措扎实推进党风廉政建设

今年以来,财政部驻江西专员办认真贯彻中央纪委六次全会和全国财政反腐倡廉建设工作会议部署,深入开展＂两学一做＂学习教育,坚持党要管党、从严治党,围绕一个核心、五条主线扎实推进党风廉政建设和反腐败工作,推动专员办和谐发展、稳步转型。

In-fusion连接技术优化及其在大片段重组载体构建中的应用

随着大规模基因组测序的完成和表达序列标签数据库的建立,基因组的研究已由结构基因组向功能基因组转化,而基因功能研究的关键是基因融合技术。为高效率高保真地构建融合大片段的重组载体,本试验利用In-fusion技术进行大片段载体构建,以不同的融合时间进行比较,通过细胞转染以及免疫印迹等方法对载体质量进行验证。通过对体系中连接时间的优化,构建出了含插入片段10、8、4ku的真核表达载体,并可正确表达。In-fusion技术的优化,提高了大片段真核表达载体构建的效率,为研究大片段基因的生物学功能奠定了基础。

小鼠Fyn及其多种突变体的载体构建和蛋白生物活性预测分析

旨在构建小鼠Fyn及其多种突变体真核表达载体,预测突变后的蛋白质二级结构和功能改变。克隆小鼠大脑皮质的Fyn基因,构建克隆质粒pMD18-T-Fynwt,经测序验证后,以pMD18-T-Fynwt为模板,针对不同突变位点设计引物,构建不同突变体克隆质粒并验证,将Fyn不同的突变体克隆至真核表达载体pCAG-MCS,构建真核表达载体pCAG-MCS-Fyn**,将表达载体转染细胞进行检测,并对其进行生物信息学分析。测序结果显示pMD18-T-Fynwt核苷酸序列正确率100%,突变体完全达到预期设计;pCAG-MCS-Fyn**转染细胞后Fyn**表达量明显升高(P<0.01)。结果表明,Fyn突变体蛋白质的二级结构与野型相比有很大改变,可能影响其生物活性。

药企销售费用推高药价现象浅析——关于药品价格形成机制的调研报告

一、药企销售费用现状 （一）销售费用占比过高。成为药品价格的主要组成部分 从财政部驻江西专员办对某药企的调查数据来看，2013年度毛利润率高达82．49％，而其销售净利润率仅为8．08％,主要是期间费用吞噬了大量的利润,其2013年销售费用高达25．34亿元，占收入的67．13％，这些销售费用大多以会议费、业务宣传费、学术推广费、市场开发调查费等各种名目列支，款项支付给一些中介服务公司，主要用于支付销售折扣。

企业工效挂钩政策存在的问题及对策

实行工资总额与经济效益挂钩，是我国国有企业工资制度的一项重要政策。工效挂钩政策主要包括两方面的内容，一是工资总额与经济效益挂钩；二是增人不增工资，减人不减工资。这项政策在计划经济体制下，对于正确处理国家、企业和个人三者利益关系，增强企业活力起到了积极的作用。

小鼠cofilin-1基因及其真核表达载体的构建与体内外表达

【目的】构建能够在神经系统中高效表达的小鼠cofilin-1野生型(Cfl1-wt)、活化型(Cfl1-S3A)、失活型(Cfl1-S3D)3种真核表达载体,并研究其在鸡胚脊髓神经元中的表达情况,为进一步探讨cofilin-1在大脑发育过程中对神经元迁移的影响奠定基础。【方法】从成年小鼠大脑组织中提取RNA,经反转录获得cDNA样本,RT-PCR扩增小鼠cofilin-1基因的CDS区,经引物设计引入点突变,扩增了野生型、活化型及失活型的cofilin-1基因片段,克隆入pCAG-MCS-myc真核表达载体中。经双酶切和测序鉴定后,转染CHO细胞,通过半定量RT-PCR和免疫荧光染色检测其在细胞中的表达情况。利用鸡胚活体原位电转的方法,将重组质粒转染胚胎发育第3天(E3)的鸡胚脊髓,在胚胎发育第6天(E6)取材,切片后经免疫荧光染色观察并统计分析重组质粒在脊髓中的表达情况。【结果】克隆并模拟了小鼠cofilin-1野生型、活化型和失活型的cDNA片段,成功构建了pCAG-cfl1-wt、pCAG-cfl1-S3A和pCAGcfl1-S3D3种真核表达载体。体外转染CHO细胞,半定量RT-PCR检测及统计学分析表明,转染重组质粒的CHO细胞中,Cofilin-1mRNA相对表达量与对照组(未转染质粒的正常CHO细胞)存在显著性差异;免疫荧光染色后观察到了Cofilin-1融合蛋白的表达。对经活体原位电转转染重组质粒的鸡胚脊髓切片进行免疫荧光染色,检测到Cofilin-1融合蛋白的表达,且重组质粒转染效果与pCAG-EGFP转染效果无明显差异。【结论】pCAG-cfl1-wt、pCAGcfl1-S3A和pCAG-cfl1-S3D3种真核表达载体的成功构建及其在体内外的高效表达,为进一步研究cofilin-1及其Ser3位点的磷酸化在神经元迁移中的作用机制奠定了基础。

中国仓鼠卵巢细胞和人胚肾T细胞骨架及其迁移特性的比较

【目的】比较中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和人胚肾T(HEK293T)细胞的迁移能力,筛选适用于细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响研究的细胞系。【方法】通过免疫荧光组织化学比较CHO和HEK293T细胞骨架的形态差异,通过延时成像和划痕试验比较细胞迁移能力,通过免疫印迹比较2株细胞系细胞骨架基因的相对表达,并从细胞骨架差异和结构基因的选择性表达方面解释细胞迁移能力的差异。【结果】CHO和HEK293T细胞系的细胞骨架在形态上存在较大差异,HEK293T细胞系的核质比是CHO细胞的2.25倍;CHO细胞比HEK293T细胞的迁移能力强,是HEK293T细胞的2.9倍;2种细胞内α-Tubulin/β-Actin的比率存在较大差异,CHO是HEK293T的1.2倍。【结论】细胞中微管微丝的差异性分布及结构基因Tubulin和Actin的选择性表达是细胞迁移特性不同的关键因素。CHO细胞适用于涉及细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响的研究,HEK293T细胞不适用于此类研究。

摇晃蛋白(Reelin)的剪切蛋白预测

【目的】探索生物信息学方法在Reelin剪切蛋白查找中的应用,并筛选大脑皮质中可能对Reelin有剪切作用的蛋白。【方法】以ADAMTS-4蛋白为基准,利用生物信息学方法,以功能域查找相似功能蛋白,并结合同源性比对方法从中筛选出剪切Reelin的候选蛋白,并对候选蛋白的理化性质、亚细胞定位、功能域、二级结构和组织定位进行分析。【结果】ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10、ADAMTS-16与ADAMTS-4有相似的理化性质,且均属于分泌蛋白,在大脑皮质中可能有分布。ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10、ADAMTS-16包含ADAMTS-4的功能域,且功能域内的二级结构相似。【结论】筛选到了可能对Reelin有剪切作用的蛋白ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10和ADAMTS-16。

煤矿折旧费维简费安全费用管理探析

淮沪煤电有限公司丁集煤矿是在水平面800米以下开采煤炭的，不仅受地质影响，还受到高压、高温、高瓦斯的影响，属于高危行业。为维持生产，确保安全，每年的折旧费、维简费、安全费用（以下简称“三项费用”）支出投入较多。本文就加强折旧费、维简费、安全费用的投入与控制作探析。

丙烯酰胺对小鼠成体神经发生及增殖相关基因的影响

【目的】探讨丙烯酰胺对成年小鼠海马成体神经发生及增殖相关基因的影响,为了解丙烯酰胺的毒性机理提供参考。【方法】将20只10周龄雄性成年昆白小鼠(体质量(30±2)g/只),随机均分为丙烯酰胺染毒组和生理盐水对照组,丙烯酰胺染毒组通过腹腔注射丙烯酰胺进行染毒,注射剂量为50mg/kg,连续注射14d,第15天注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50mg/kg,2次/d,共3d),观察2组小鼠体质量及行为活动的变化。用BrdU标记和免疫组织化学染色方法分析丙烯酰胺染毒对小鼠齿状回神经干细胞数量的影响,用RT-PCR法研究丙烯酰胺对小鼠海马增殖相关基因JNK3、Akt1、Gsk-3β、RhoA和Rac1mRNA表达的影响。【结果】丙烯酰胺染毒组小鼠体质量极显著低于对照组,精神萎靡、后肢无力,走路时后肢偶成劈叉姿势;与对照组相比,丙烯酰胺染毒组小鼠齿状回亚颗粒细胞层中的BrdU阳性细胞数量极显著降低(P<0.01),海马组织中JNK3和Rac1的mRNA表达量显著升高(P<0.05),Akt1、Gsk-3β和RhoA的mRNA表达量极显著升高(P<0.01)。【结论】丙烯酰胺中毒能显著抑制小鼠齿状回中成体神经干细胞增殖,可使海马组织中增殖相关基因JNK3、Akt1、Gsk-3β、Rac1和RhoA的表达量发生明显变化。

microRNA-34c在不同发育时期雄性小鼠脑组织中的表达分析

【目的】研究microRNA-34c(简称miR-34c)在出生后不同发育时期小鼠嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的表达情况,并分析其与小鼠行为活动之间的相关性。【方法】以出生后0,3,7,14,21,28,60和90d的雄性昆明小白鼠为试验动物,以5SrRNA为内参基因,运用荧光实时定量PCR技术,检测miR-34c在小鼠出生后8个不同发育时期嗅球、大脑皮质、小脑皮质和海马中的相对表达量以及在成年鼠脑组织中4个不同部位的相对表达量。【结果】随着小鼠的发育,miR-34c在嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的相对表达量均呈现不同程度的递增趋势。在成年鼠中,miR-34c在嗅球、大脑皮质、小脑皮质、海马中的相对表达量差异显著,其中海马中最高,小脑皮质次之,嗅球最低。【结论】miR-34c在出生后不同发育时期小鼠嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的表达趋势,与小鼠各种行为活动的出现具有一定的相关性。

小鼠RSP3基因序列分析及其亚细胞定位

衣藻RSP3是一个鞭毛结构蛋白,目前有关RSP3相关研究主要集中在衣藻上,而对其在哺乳动物中的同源基因的蛋白定位及功能研究甚少。本研究对各个物种的RSP3氨基酸序列进行比对分析,在用SMART软件预测小鼠RSP3结构域的基础上构建了小鼠RSP3真核表达载体,并在CHO细胞中成功表达,应用荧光共定位技术研究小鼠RSP3与微管、内质网及高尔基体的关系。结果表明,小鼠RSP3比衣藻RSP3在N端多出127个氨基酸,两者都含有一个RSP3结构域,RSP3结构域是一个微管结合结构域,而且在进化中高度保守。在CHO细胞中表达的小鼠RSP3并不直接与微管结合,也不定位在内质网或高尔基体,进一步研究发现其聚集分布于细胞质基质中,而且主要分布在细胞核的周围。说明RSP3在进化中较为保守,但在哺乳动物中的分布和功能可能与在衣藻中有所不同。

PCT、hs-CRP和血小板在新生儿败血症诊断中的价值及与病情的关系

目的探讨血清降钙素原(PCT)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和血小板在新生儿败血症诊断中的价值及与病情的关系。方法对我院住院治疗的66例新生儿败血症患者临床资料进行回顾性分析,选择同期60例健康新生儿为对照组。比较两组血清PCT、hs-CRP和血小板的水平,计算三者诊断新生儿败血症的敏感性、特异性。结果败血症组患儿PCT及hs-CRP水平显著升高(P<0.05),血小板水平显著下降(P<0.05);PCT、hs-CRP和血小板诊断新生儿败血症的敏感性分别为84.8%、69.7%和53.0%,特异性为75.0%、50.0%和22.5%;败血症组患儿恢复期PCT及hs-CRP水平显著降低,血小板水平显著升高,与疾病初期相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 PCT、hs-CRP和血小板对新生儿败血症具有诊断意义,能较好地反应患儿病情变化。

防风式枸杞植保机的研制与试验

针对目前枸杞植保作业中存在飘移严重、喷雾质量差、作业效率低等问题,设计了一款枸杞专用植保机,采用防风翼、智能喷雾控制系统、风送辅助系统、调节机构及大容量药箱等解决枸杞植保中存在的问题。试验结果表明:机器防风性能、喷雾质量、作业效率都符合设计要求,具有一定的推广价值。

新生儿脐血免疫血清学检验结果与高胆红素血症发生率相关性研究

目的探讨脐血免疫血清学检验结果与新生儿高胆红素血症发生率之间的相关性。方法对368例O型血母亲分娩的A或B型血新生儿进行脐血免疫血清学检验,并按检验结果进行分组,调查其高胆红素血症的发生率,并选择456例母子ABO血型相合的新生儿进行对照。结果在抗体释放试验阳性的实验组新生儿中,新生儿血液中存在的IgG抗A+B与高胆红素血症发生率无相关性(P>0.05);红细胞凝集的程度与高胆红素发生率有极显著相关性(P<0.01);新生儿血液中存在的游离IgG抗A(B)抗体与高胆红素血症发生率有极显著相关性(P<0.01)。结论脐血免疫血清学检验结果可为诊断新生儿高胆红素血症提供实验依据,具有一定的临床意义。