热休克对H22细胞膜HSP70蛋白及其mRNA水平的影响

研究不同热休克条件对H22小鼠肝癌细胞的HSP70mRNA及蛋白表达的影响,以期获得最佳诱导条件.分别用MTT、RT-PCR、免疫荧光和FCM检测等方法观察不同热休克条件对鼠H22细胞的生存率、胞内HSP70mRNA转录水平及胞膜HSP70蛋白表达水平的改变.结果表明,H22细胞经轻度热休克(42～43℃),细胞生存率无影响,而中重度热休克(44～45℃)则随休克时间的延长,细胞生存率明显下降;42℃热休克初期(0.5～4小时)胞内HSP70mRNA水平低于对照组,休克后期(8～12小时)mRNA水平有所恢复并逐渐增高;不同时间热休克组H22细胞胞膜HSP70表达均较对照组显著增高(P<O.005),其中非致死性热休克以12小时表达最高,42℃为59.5%,43℃为96.8%.因此适当热休克条件可引起H22细胞HSP7OmRNA的改变及膜上HSP70蛋白表达的增加,从而增加肿瘤细胞的免疫原性.

活化淋巴细胞与慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型的比较

目的 :将本室建立的用活化淋巴细胞诱导的系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型与国际上公认的用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型进行比较 ,进一步探索SLE的发病机理。方法 :分别将亲代Balb c小鼠淋巴细胞经静脉和用ConA活化的(Balb c×C5 7BL 6 )F1代小鼠淋巴细胞经皮下途径输入F1代小鼠 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)荧光核型和肾小球内免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法检测抗可溶性核抗原 (ENA)抗体。结果 :亲代淋巴细胞免疫F1代小鼠所致的慢性GVHR和活化F1代小鼠淋巴细胞均可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等ANA ,并且肾脏都有明显的IgG类免疫复合物沉积。但亲代淋巴细胞免疫组ANA核型以颗粒型、核仁型为主 ,ENA多肽谱多在 32、47、6 7kD处显色 ;而活化淋巴细胞免疫组以胞浆型、周边型、均质型为主 ,ENA多肽谱在 2 8、47、6 7kD处显色。结论 :这 2种方法均可诱导出SLE样综合征 ,但其抗核抗体谱有所不同。

Con A活化的淋巴细胞诱导自身抗核抗体生成的实验研究

系统性红斑狼疮 (SLE)患者血清中出现的大量致病性抗核抗体 (ANA)的免疫原至今不明 ,本实验试图阐明活化的淋巴细胞 (T细胞 )是诱导ANA生成的免疫原。方法 :用ConA活化的F1代鼠淋巴细胞免疫F1小鼠 ,用ELISA法测定IgG类抗ds DNA抗体、抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测ANA核型和免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法测定抗可溶性核抗原抗体。结果 :用ConA活化的淋巴细胞能诱导抗ds DNA抗体、抗组蛋白抗体等多种ANA ,免疫小鼠的肾脏有显著的免疫复合物沉着。提示活化的淋巴细胞可能是诱导抗ds

牛血清中27kDa蛋白的免疫学特性研究

为探讨牛血清中存在的HBsAg样蛋白的性质,给HBV的发病机制、治疗、预防等研究提供依据,我们采集93份牛血清,以SDS-PAGE、WesternBlot对血清中HBsAg样蛋白进行研究,发现其分子量约为27kDa;以SDS-PAGE分离牛血清中的HBsAg样蛋白,经皮下多点免疫小鼠,可产生与人HBV编码蛋白HBsAg反应的抗体。表明该27kDa蛋白可能存在与HBsAg相似的免疫学特性。

乙型肝炎病毒细胞培养模型中人白蛋白的研究

本文建立了用ELISA法测定HepG_2 2215细胞培养液中人白蛋白含量的方法,其线性测定范围为0.16～40ng/ml,各种阴性对照P/N值均小于2.1。批内变异系数为3.4％,批间变异系数为8.5％。本实验结果说明,在利用HepG_2 2215细胞系研究抗乙肝病毒药物和免疫因子的作用时,应注意这些药物或因子对细胞代谢有无毒性作用,细胞培养液中人白蛋白的测定可作为检测细胞毒性的一项指标。

日本血吸虫循环抗原的生化检测

Ｓｊ６５蛋白为来源于日本血吸虫虫卵的循环抗原，该蛋白免疫原性较弱，能与一种分子量为６８ＫＤ的糖蛋白（Ｓｊ６５结合蛋白）专一结合。利用酶标记Ｓｊ６５结合蛋白，建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测感染血清中的Ｓｊ６５。用该法测定急、慢性血吸虫病人血清，阳性率分别为１００％及８１．３％。正常人、兔、鼠、肝炎病人血清及蛔、钩虫病人血清均未见阳性反应。在感染兔血清及并殖吸虫病人血清中可检出Ｓｊ６５，而在感染小鼠血清及并殖吸虫感染犬血清中却未检出。感染兔经吡喹酮治疗５周后，９０％转为阴性。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗１年后，６０％转为阴性。结果表明，感染血清中Ｓｊ６５的生化检测似能反映感染程度及考核治疗效果，同时也提示，血清中Ｓｊ６５的水平可因宿主的不同而不同。

慢性移植物抗宿主反应诱导SLE样小鼠模型

目的 运用慢性移植物抗宿主反应 (GVHR)诱导系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型 ,为进一步探索SLE发病机制奠定基础。方法 将亲代BALB/C小鼠淋巴细胞经静脉途径输入 (BALB/C×C57BL/ 6 )F1代小鼠体内 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)核型和免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法测定抗可浸出核抗原 (ENA)抗体。结果 亲代淋巴细胞所致的慢性移植物抗宿主反应可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等多种ANA ,免疫小鼠的肾脏有显著的免疫复合物沉着。结论 运用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型 ,小鼠发病迅速 ,抗核抗体的产生与人SLE相似 。

β-榄香烯诱导的抗肿瘤免疫保护作用机理初探

目的 探索中药莪术有效成分β榄香烯的抗肿瘤作用及其分子机理。方法 用免疫荧光法和流式细胞仪检测不同因素处理的小鼠肝癌Ｈ２２ 细胞膜ＨＳＰ７０ 蛋白表达的变化，并用处理后的Ｈ２２ 细胞作为抗原进行体内抗肿瘤免疫保护实验。结果 各实验组Ｈ２２ 细胞胞膜ＨＳＰ７０ 蛋白的表达率及表达强度均较对照组细胞有显著增加（ Ｐ＜ ０ ．００１） 。表达率以β榄香烯和丝裂霉素处理组细胞为最高，达９５ ．１ ％ ，而热休克能进一步增加胞膜ＨＳＰ７０ 蛋白的表达强度。用β榄香烯处理的Ｈ２２ 细胞免疫Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠能诱导出特异性抗肿瘤免疫，该作用可部分被抗ＨＳＰ７０ 分子的单抗阻断。肿瘤发生率在β榄香烯诱导组、单抗阻断组及阴性对照组小鼠中分别为２７－３ ％ （３／１１） 、５０－０ ％ （５／１０） 、１００－０ ％ （１０／１０） 。攻击后第２８ 天小鼠平均瘤重分别为（０ ．１７ ±０ ．３３） ｇ 、（０ ．６６ ±０ ．７７） ｇ 和（１ ．１１ ±０ ．５８） ｇ 。结论 β榄香烯等处理的Ｈ２２ 细胞具有较强免疫原性，能激发机体产生特异性抗肿瘤免疫，是一种良好的肿瘤疫苗。其抗肿瘤效应是或部分是由表达在肿瘤细胞膜上的ＨＳＰ７０ 蛋白所介导。

活性染色质诱导抗核抗体生成及肾损伤

系统性红斑狼疮 (SLE )的病因和诱导抗核抗体 (ANA )生成的激发原迄今不明。本实验试图用ConA活化淋巴细胞的染色质免疫同系BALB/c小鼠 ,寻找诱导ANA生成的真正免疫原 ,阐明SLE发生的激发原是自身活化细胞的核成分 ,而且证明它所诱导的ANA具有致病性。从ConA活化的脾细胞中提取染色质 ,然后免疫同系BALB/c小鼠 ,用ELISA方法测定IgG类抗双链DNA (dsDNA )、抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体核型和免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法测定抗核抗体谱 ,在光镜下检测肾损伤及电镜下检测肾小球沉积物 ,用考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量。结果显示 ,活性染色质能诱导IgG类抗dsDNA、抗组蛋白等多种抗核抗体生成 ,且肾小球有显著免疫复合物沉积和蛋白尿形成。该实验表明 ,活化淋巴细胞的染色质是诱导SLE发生的真正自身免疫原。

β-榄香烯、丝裂霉素C及热休克对小鼠H22肝癌细胞HSP 70表达的影响

为了进一步阐明肿瘤疫苗的特异性主动免疫治疗机理,采用β-榄香烯、丝裂霉素C(MMC)及热休克在体外单独及复合处理小鼠H22肝癌细胞,经间接免疫荧光染色,流式细胞仪分析,结果显示.上述处理因素均能明显地诱导H22细胞表达HSP70(以阳性率增高表示).在单因素中,以β-榄香烯效果最佳,阳性率为69.16%,MMC次之;在复合因素中.以β-榄香烯与MMC复合处理的效果最佳,阳性率为95.13%;三种因素联合处理的效果为85.34%.提示瘤苗的抗肿瘤免疫作用是与HSP70表达程度有关.

鼠肝癌细胞的热休克蛋白诱导及其抗瘤机理研究

目的摸索鼠肝癌Ｈ２２细胞膜热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）最适的诱导条件，并明确其体内外的抗瘤机理。方法用免疫荧光及ＦＣＭ法检测热休克Ｈ２２细胞膜ＨＳＰ７０蛋白的动态表达。并用ＭＭＣ灭活、热休克后的Ｈ２２细胞作抗原进行体内肿瘤免疫保护试验及体外肿瘤杀伤试验。结果小鼠肝癌Ｈ２２细胞经４２℃、４３℃热休克１２小时后，其胞膜ＨＳＰ７０蛋白表达率分别达到５９．５％，９６．８％。均较对照组显著增高（Ｐ＜０．００１）。用４３℃休克１２小时的Ｈ２２细胞免疫的Ｃ３Ｈ小鼠能抵抗同种野生型肿瘤细胞的攻击，其肿瘤发生率比野生型Ｈ２２免疫组及未免疫组均显著降低，分别为１／９、７／８和８／８。同时小鼠荷瘤生存期显著延长，中位生存期分别为＞９０天，７３．５天及３９．５天。体外杀伤试验表明，经热休克Ｈ２２诱导７天后的Ｃ３Ｈ脾淋巴细胞对热休克型Ｈ２２细胞杀伤率高达６３．３８％（４３℃，２小时）和６７．８４％（４３℃，１２小时），且这种杀伤活性可被抗鼠ＨＳＰ７０的单抗所阻断。分析效应细胞的表型发现，ＣＤ４＋、ＣＤ８＋淋巴细胞在整个体外诱导过程中并不增加，而ＴＣＲγδ＋淋巴细胞随诱导时间的延长与杀伤活性同步增加，诱导第７天为３０．４３％，第１４天?