湖南省实验动物机构生物安全管理现状调查

目的通过问卷调查,进一步了解湖南省实验动物机构在生物安全管理方面的现状,查找管理工作中的“短板”,针对性地提出改进意见和建议。方法2023年7月对湖南省内40家实验动物机构发放调查问卷,内容主要包括实验室管理体系建立和整体运行情况、突发事件应急管理、医疗废弃物处置、实验动物运输管理、从业人员管理、环境设施消毒及设备使用维护等情况;同时在每家单位至少抽取1名实验动物饲育或实验操作人员,对共计50名从业人员的生物安全意识、动物咬伤情况和疫苗接种情况等进行问卷调查。结合文献查阅和比较研究等方法,从生物安全管理体系、人员培训、环境设施消毒及废弃物处置等方面,对湖南省实验动物生产、运输和使用过程中生物安全管理现状进行剖析并提出建议。结果在湖南省40家实验动物机构中,有39家(97.5%)建立了实验室管理体系,37家(92.5%)建立了实验动物突发事件应急预案,15家(37.5%)有完整的实验动物生物安全应急演练记录,39家(97.5%)建立了实验动物尸体及废弃物管理处置制度,26家(65.0%)有实验室生物安全风险评估报告。在8家生产单位中,4家(50.0%)制定了实验动物运输途中应急预案,7家(87.5%)使用专用车辆运输实验动物。在50名实验动物饲育或实验操作人员中,2人(4.0%)不了解实验动物应急预案或处置程序,6人(12.0%)未能做到在进行实验动物操作时穿戴个人防护装备,38人(76.0%)有被实验动物咬伤或抓伤经历。调查发现,湖南省内在实验动物突发事件应急管理、运输管理、人员管理等方面尚待完善,建议相关职能部门加大监督管理力度,建立本省的实验动物运输管理规范,督促各单位严格执行相关文件并开展应急演练,加强从业人员培训。结论湖南省40家实验动物机构的日常管理总体较为规范,运行情况良好,但在突发事件应急管理、运输管理、人员管理等方面仍需进一步加强,逐步提升实验动物安全管理水平,共同维护公共卫生安全。

湖南省实验动物生物安全突发事件应急预案的编制说明

湖南省实验动物生物安全应急管理工作是湖南省贯彻落实国家生物安全战略的重要组成部分。为加强实验动物生物安全风险防控,快速有效应对实验动物生物安全突发事件,最大限度减轻其对从业人员、公众健康、实验动物产业等造成的损害,保障人民群众生命财产安全,维护公共安全及社会稳定,湖南省制定了《湖南省实验动物生物安全突发事件应急预案》。本文分析了应急预案编制的必要性、指导思想、原则和依据等,阐述了预案的主要内容,包括适用范围、事件分级、组织体系及职责、监测预警机制、应急报告、应急处置、后期评估和保障措施等,并对近年来湖南省实验动物生物安全应急管理工作进行了小结和展望。

肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白基因片段在大肠杆菌中的表达与鉴定

表达肺炎嗜衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)主要外膜蛋白(MOMP)的可变区VD2-VD3区,纯化产物并进行免疫活性分析,为探索重组蛋白在肺炎嗜衣原体血清学诊断中的应用提供资料.应用聚合酶联反应(PCR)技术,从肺炎嗜衣原体标准株AR-39的MOMP上扩增出抗原优势表位VD2-VD3区,将目的片段定向插入pET-30a载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并以Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物并行western-blot鉴定.成功构建了pET-30a-MOMPVD2-VD3的原核表达系统,表达并纯化出相对分子质量(Mr)为24×103Da的重组蛋白.Western-blot证实重组蛋白能与Cpn MOMP多克隆抗体发生特异性反应.肺炎嗜衣原体的MOMPVD2-VD3基因可以在大肠杆菌中得到表达,其表达产物能与相应的抗体结合,为肺炎嗜衣原体诊断候选抗原的研究奠定了基础.图4,参9.

湖南省男性HIV＋／AIDS患者生殖支原体感染及其对免疫功能的影响

【目的】分析人类免疫缺陷病毒感染（HIV＋）者和艾滋病（AIDs）男性患者生殖支原体感染状况，探讨艾滋病相关生殖支原体对人类免疫系统及免疫功能的影响。【方法】选择2013年9月至2016年1月在长沙市传染病医院就诊的86例男性HIV＋／AIDS感染者，采集其首段尿，用MGB荧光PCR方法检测生殖支原体（Mg），同时对HIV感染者和AIDS患者进行CD4＋T细胞计数测定。【结果]86例HIV＋／AIDS患者中生殖支原体感染26例（30．23％），AIDS患者的生殖支原体感染率稍高于HIV＋感染者，AIDS患者Mg阳性标本中，CD4＋T淋巴细胞越低其所占比例越高。【结论】生殖支原体感染与患者免疫水平有一定相关性。

肺炎嗜衣原体CPAF诱导THP-1细胞产生前炎症细胞因子和凋亡

目的 研究肺炎嗜衣原体（Chlamydophila pneumoniae,Cpn）衣原体蛋白酶样活性因子（Chlamydial protease-like activity factor,CPAF）能否在体外诱导人单核细胞THP-1产生前炎症细胞因子和凋亡,为进一步探索Cpn感染宿主致病的分子机制提供实验依据.方法 将Cpn CPAF全基因克隆于pGEX6p-2载体上,在大肠杆菌（E coli）中诱导表达重组蛋白,经去内毒素纯化柱和琼脂糖凝胶FF获得纯化且无脂多糖（LPS）污染的重组蛋白GST-CPAF.以不同浓度的该蛋白作用于THP-1,ELISA检测TNF-α吨和IL-6水平.MTT法检测经该蛋白处理后THP-1的增生或抑制作用,用Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、Armexin V-FITC-PI染色法检测细胞凋亡情况.结果 制备的莺组蛋白GST-CPAF以时间和剂量依赖方式刺激THP-1分泌TNF-α和IL-6,并以剂量依赖方式抑制THP-1增殖;当GST-CPAF刺激THP-1细胞24 h后,能诱导细胞调亡.结论 制备的Cpn重组蛋白GST-CPAF能诱导THP-1产生前炎症细胞因子和凋亡,可能是Cpn致病机制中的一个因素.

湖南省即食食品中食源性致病菌污染状况及耐药性研究

目的了解湖南地区即食食品中食源性致病菌的污染状况和耐药性,为预防和控制食源性疾病提供科学依据。方法从湖南地区的农贸市场、超市和餐饮单位采集即食食品(凉拌菜和熟肉制品),依据GB 4789-2010和GB/T4789-2008方法,对样品进行沙门菌等4种食源性致病菌检测,分离菌株使用微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果 991份样品共检出食源性致病菌92株,检出率为9.28%,其中检出金黄色葡萄球菌68株,检出率为6.86%,检出沙门菌和单增李斯特菌各12株,检出率为1.21%,未检出大肠埃希菌O157。药敏结果显示金黄色葡萄球菌和沙门菌均具有一定的耐药性,其中金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药率高达61.76%,而且多重耐药明显。结论湖南地区即食食品存在一定的食源性致病菌污染,应加大卫生监督力度,防止食源性疾病的暴发流行;同时应控制动物饲料中抗生素的添加使用,加强抗生素的管理和耐药性监测。

湖南省食源性沙门菌血清型分布及耐药性研究

目的掌握湖南省食品中沙门菌血清型分布和耐药现况,为沙门菌病的防控提供科学依据。方法应用GB4789.4-2010对来自食品中的沙门菌进行血清分型鉴定,采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法对分离株进行14种抗生素敏感试验。结果 150株沙门菌分离株血清群以B群为主,主要血清型为德尔卑沙门菌、阿贡纳沙门菌、瓦伊勒沙门菌。126株(84.00%)对1种以上的抗生素耐药,其中对3种以上的抗生素耐药占49.33%(74/150);在所测定14种抗生素中,对四环素(56.00%)、阿莫西林/克拉维酸(56.00%)、氨苄青霉素(42.00%)的耐药性较高,对头孢吡肟、阿米卡星、头孢噻肟和头孢曲松较敏感;同时分离出3株耐9种以上抗生素的鼠伤寒沙门菌,其耐药谱与超级耐药鼠伤寒沙门菌DT104的耐药谱类似。结论湖南省食源性沙门菌血清型分布呈多态性,各血清型沙门菌均有不同程度的耐药及多重耐药。加强对沙门菌的综合监测,有利于指导沙门菌病的防治,提高对疫情的应急能力。

湖南省食源性德尔卑沙门菌耐药谱及PFGE分型研究

目的了解湖南省食源性德尔卑沙门菌的耐药谱及分子分型,建立沙门菌指纹图谱数据库。方法运用肉汤稀释法对食源性德尔卑沙门菌进行药敏试验,并采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型。结果 47株德尔卑沙门菌中,有46株对1种以上抗生素耐药(97.87%),有29株多重耐药菌株(61.70%);德尔卑沙门菌分为32种PFGE型,其中有10种PFGE型的菌株数超过1株。结论湖南省食源性德尔卑沙门菌分离株呈高耐药和多重耐药趋势,PFGE分子型别呈多态性,有同源菌株存在,PFGE分型为食源性疾病溯源和预警提供技术基础。

2006-2009年湖南省桶装饮用水微生物检验结果分析

目的了解湖南省桶装饮用水卫生微生物污染状况,分析其饮用安全性。方法按国家饮用水检测标准方法对桶装纯净水、饮用水、矿泉水进行菌落总数、大肠菌群、致病菌、霉菌和酵母菌的实验室培养与检测,应用SPSS 15.0统计学软件分析不同饮用水总合格率之间的差异,并对抽检样品与送检样品的合格率进行比较。结果 147份桶装饮用水合格率为65.3%,不合格指标以菌落总数为主;2006-2009年不同饮用水之间总合格率差异有统计学意义(χ2=22.48,P<0.01);送检样品合格率为76.5%,高于抽检样品合格率51.5%,差异有统计学意义(χ2=10.1,P<0.05)。结论加大力度对桶装纯净水进行卫生监督监测工作,找出关键控制点,是抓好桶装饮用水卫生质量的关键。

实验动物垫料的微生物污染监测及影响因素研究

目的对实验动物垫料进行微生物指标监测,为管理机构制定垫料的卫生标准提供依据,为垫料生产企业在加工、灭菌、包装、运输、储存等环节及动物使用单位对动物实验结果影响因素分析方面提供参考依据。方法对来自不同实验动物生产和使用单位的垫料,参照GB4789-2010、2012检测方法进行菌落总数、霉菌及大肠杆菌计数、沙门菌的检测。结果 49份未灭菌的垫料存在不同程度的细菌、霉菌及大肠杆菌污染,未检出沙门菌;不同材质的垫料在不同条件下灭菌,在121℃30 min的条件下具有最佳灭菌效果,各项微生物指标均合格;已灭菌的21份垫料有19份存在不同程度的细菌及霉菌污染,未检出沙门菌及大肠杆菌;松软的混合型刨花垫料在灭菌后7 d检测到细菌;采用敞开编织袋储存5 d即检测到细菌污染;垫料使用1 d后的菌量可达104CFU/g,细菌及霉菌含菌量按天数逐步递增,但未检出沙门菌。结论垫料使用前必须消毒灭菌,采用合理的方式储存,及时更换可改善饲养环境,可减少微生物污染,保障实验动物的质量及实验结果的可靠。

2009-2016年1842份保健食品微生物检测结果分析

目的对2009-2016年全国部分省份不同厂家生产的保健食品进行微生物检测和数据分析,为进一步强化保健食品的监督管理提供依据。方法对不同省份不同厂家生产的各类保健食品1 842份,参照国家保健食品微生物检验方法进行菌落总数、大肠菌群、致病菌、霉菌和酵母的检测,统计不同年份、不同剂型保健食品的合格率及其差异。结果2009-2016年共对1 842份保健食品进行了微生物指标检测,各年样品合格率分别为94.44%、95.29%、96.79%、96.72%、97.09%、97.69%、97.76%、98.36%,经卡方检验,各年合格率间差异无统计学意义(χ~2=7.05,P=0.42);根据保健食品的剂型来统计,膏状类样品的合格率最高,固体冲剂类合格率最低,胶囊、片剂、膏状、口服液、固体冲剂5种剂型的合格率分别为98.39%、99.69%、100%、99.30%、92.25%,其合格率差异有统计学意义(χ~2=30.50,P=0.00)。结论 2009-2016年受检的1 842份保健食品的微生物指标合格率呈上升趋势,但不同剂型的样品合格率存在差异,应加强对固体冲剂类保健品的监管。

肺炎嗜衣原体三种不同抗原的临床诊断价值评价

目的研究肺炎嗜衣原体3种重组抗原Cpn0146、Cpn0147及Cpn0308应用于肺炎嗜衣原体感染血清学诊断中的价值。方法构建pGEX6p-2／Cpn0146、Cpn0147、Cpn0308重组质粒，并诱导表达重组蛋白，采用间接ELISA法和免疫印迹法（Western—blot）分析其免疫原性及其免疫反应性。建立分别以3种重组蛋白为包被抗原的间接ELISA法，与肺炎嗜衣原体IgG商品诊断试剂盒平行检测183份呼吸道感染患者的血清标本及32份沙眼衣原阳性患者血清标本，比较各方法检出准确性及阳性率。结果GST-Cpn0146、Cpn0147、Cpn0308免疫兔血清中特异性IgG抗体效价滴度分别达1：6400、1：12800和1：12800以上；以3种重组蛋白为包被抗原的ELISA法准确性分别为92．3％、94．5％、96．7％。各方法检测出阳性率结果显示，Cpn0146组的阳性率为38．8％（71／183）、与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异有统计学意义（χ^2=12．07，P〈0．05）；Cpn0147阳性率40．9％（75／183），与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异有统计学意义（χ^2=8．10，P〈0．05）；Cpn0308阳性率44．8％（75／183），与肺炎嗜衣原体IgG试剂盒的阳性率比较差异无统计学意义（χ^2=0．57，P〉0．05）。结论Cpn0308在肺炎嗜衣原体感染血清学诊断实验中表现出良好的准确性（96．2％）和较高的阳性率（44．8％），可望用于进一步研制肺炎嗜衣原体诊断试剂盒。