小鼠IL-3的原核表达条件优化及其促肥大细胞分化成熟的活性研究

目的:对小鼠白细胞介素3(interleukin-3,IL-3)进行原核表达条件筛选和优化,为体外肥大细胞模型的高效率构建奠定物质基础。方法:根据小鼠IL-3的核苷酸序列进行大肠杆菌偏爱密码子优化并构建至p ET-28a(+)质粒中,随后转化至大肠杆菌BL21(DE3)并筛选小鼠IL-3在该体系下表达的最佳条件,结合镍亲和层析和离子交换层析对其进行纯化,验证其促进小鼠骨髓细胞分化为肥大细胞的活性。结果:成功构建pET-28a(+)-IL-3原核表达载体,诱导出在SDS-PAGE中显示约16 kDa的蛋白条带,并通过四因素多水平参数筛选确定了最佳的诱导条件。最终纯化的小鼠IL-3与干细胞生长因子联合诱导小鼠骨髓细胞分化可成功获得表面FcεRI和CD117双阳性的肥大细胞,且具有β-己糖胺酶释放功能。结论:构建了小鼠IL-3的表达载体并筛选了最佳的原核表达条件,所纯化的小鼠IL-3能够成功用于过敏反应研究的体外肥大细胞模型构建。