美国、欧盟和中国生物技术药物的比较

按照相同表达系统表达的相同氨基酸序列的产品视为同种产品,而不同表达系统表达的相同氨基酸序列的产品视为不同产品的原则,归纳总结了美国、欧盟和中国已批准上市的生物技术药物。美国FDA批准的以基因工程产品、抗体工程产品和细胞工程产品为主要代表的生物技术药物共79种(18种为大肠杆菌表达,8种为酵母表达,53种为哺乳动物细胞培养生产),其中基因重组蛋白质药物为64种。欧盟批准了49种基因重组酶、激素或细胞因子,11种基因重组治疗性抗体和5种基因重组疫苗。在欧美60％-70％的产品由哺乳动物细胞表达。中国批准了27种生物技术药物。比较了美国、欧盟和中国生物制药的特点。

生物制药的现状和未来(一):历史与现实市场

以基因工程产品、抗体工程产品和细胞工程产品为主要代表的生物制药产业是发展最快的高技术产业之一 ,最近 6年全球年销售额连续每年以 1 5 %～ 33%的速度增长 ,并在 2 0 0 4年突破 40 0亿美元。生物技术药物在治疗肾性贫血、白细胞减少、癌症、器官移植排斥、类风湿关节炎、糖尿病、矮小症、心肌梗死、乙肝、丙肝、多发性硬皮病、不孕症、粘多糖病、戈谢病、法布莱氏病、囊性纤维化、血友病、银屑病和脓毒症等发挥了重要乃至关键作用。综述生物制药的历史、现状和市场。

生物制药的现状和未来(二):发展趋势与希望

随着基因组和蛋白质组研究的深入,越来越多的与人类疾病发展相关的靶标被确定,使得我们能够研发更精确的药物来防治这些疾病。这意味着生物制药将有更多机会获得突破性进展,最终将使更多更好的生物技术药物被批准上市。综述了生物制药发展的几个趋势,主要有:(1)哺乳动物细胞表达的产品将在相当长的时间内占统治地位;(2)治疗性抗体将会是生物制药领域第二次创新高潮;(3)越来越多分子量大、结构复杂的功能蛋白将被开发成生物技术药物,尤其是用于治疗遗传性疾病的药物;(4)对已批准上市的生物技术药物的化学修饰尤其是PEG化以改善药物性能;(5)通过某些药物的定点突变获得第二代新生物技术药物,如胰岛素、EPO和t-PA的突变体;(6)组织工程、细胞治疗和基因治疗充满了机遇和挑战。

多孔微载体无血清培养rCHO细胞生产u-PA

在 30L搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂 (u PA)的DNA重组CHO细胞 ,定期部分更换Cytopore多孔微载体 ,使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖 ,解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在 91d连接换液培养过程中 ,细胞密度可维持在 (1 3～ 2 6 )× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 90 %以上。在7 5L搅拌罐中培养细胞 ,利用外部周期性压力振荡刺激并结合载体更新技术 ,可减轻密度效应对细胞生长和表达的影响 ,在一定程度上提高细胞在高密度培养条件下的表达水平。在 6 7d连续换液培养中 ,细胞最高密度为 2 6 4× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 95 %以上。与稳压操作相比 ,利用周期变压刺激技术可提高产量 10 %～ 2 0 % ,且可降低葡萄糖厌氧代谢生成乳酸的转化率 ,利用 4步纯化工艺 ,从含u PA约 135g的 2 10 0L上清中获得约 80 gu PA(单链比例约为 90 % )。

用多孔微载体大规模长期培养动物细胞的方法

长期大规模高密度动物细胞培养是生物制药产业中的关键技术，文中介绍了利用多孔微载体在中试规模生物反应器中长期大规模连续培养分泌尿激酶原的DNA重组中国仓鼠卵巢细胞（rCHO）的方法。

纤维素多孔微载体的制备及其用于动物细胞培养

将纤维素铜氨溶液喷洒至－４０℃的硅油：正己烷＝１：４的冷冻液中形成含冰晶的微球，用－３０℃、４０％的Ｈ２ＳＯ４再生纤维素，并用ＥＤＡＥ盐酸盐修饰其表面，制成适合动物细胞培养的纤维素多孔微载体。利用该微载体培养能分泌尿激酶原（ＰｒｏＵＫ）的重组ＣＨＯ细胞，在１００ｍＬ搅拌瓶中换液培养２５ｄ，细胞最高密度为６３×１０６／ｍＬ，尿激酶原最高活性为２３２５ＩＵ／ｍＬ，共获２８７ｍｇ产品。之后转入１０００ｍＬ搅拌瓶中培养，可观察到细胞可从种子微载体中自动转移到新微载体中生长繁殖直至所有微载体中都长有细胞。在２５ｄ二级培养中，细胞最高密度为７３×１０６／ｍＬ，尿激酶原最高活性为３１０８ＩＵ／ｍＬ，共获含３５３ｍｇ尿激酶原的上清１３７Ｌ。在培养后期换用无血清培养基培养，细胞生长及蛋白表达水平正常。

全球生物制药产业概况

以基因工程、抗体工程或细胞工程技术生产的，源自生物体内的，用于体内诊断、治疗或预防的生物技术药物，已经成为利用现代生物技术生产的最重要的产品，并成为衡量一个国家现代生物技术发展水平的一个最重要的标志，生物制药已成为制药业中发展最快、活力最强和技术含量最高的领域。从1982年第一个新生物技术药物基因重组人胰岛素上市至今，生物制药产业只有20余年历史，约有100余种产品，但这些产品在治疗肾性贫血、白细胞减少、癌症、器官移植排斥、

用多孔微载体大规模培养rCHO细胞

多孔微载体是近年来发展起来的一种用于大规模高密度培养动物细胞的支持物，具有许多优点，如：容易固定细胞，适合于贴壁细胞和悬浮细胞的固定化连续灌流培养；细胞生长在载体内部，增加了细胞固定化的稳定性，可降低血清用量，适合长期培养；能保护细胞免受机械损伤，增...

炭疽毒素受体ATRcDNA的合成和克隆及ATR-Fc融合蛋白的真核表达载体的构建

可溶性炭疽毒素受体(sATR)可以特异性结合炭疽毒素保护抗原(PA),为获得用于中和炭疽毒素以防治炭疽感染的候选抗毒素药物,构建了表达ATRFc抗体样分子融合蛋白的真核表达载体。将全长为681bp的编码炭疽毒素受体N端1～227氨基酸的基因分成长约50～60碱基的18个寡核苷酸片段,相邻片段重叠部分为20～22个碱基,利用重叠延伸PCR和引物PCR法,将合成的片段组装与扩增,得到了含有ATR1～227的全部编码区和HindIII、BamHI位点在内的DNA片段。回收的基因片段经BamHI/HindIII双酶切连接到pUC19质粒中,挑选阳性克隆进行酶切鉴定和双向序列测定,获得了全序列正确的克隆。将ATR基因与Fc基因连接后插入pcDNA3.1载体多克隆位点HindIII和NotI之间,得到表达ATRFc融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1/ATRFc,为利用CHO哺乳动物细胞表达ATRFc并研究其生物学性质奠定了基础。

血清浓度及溶氧对培养rCHO细胞生产尿激酶原的影响

在 30L搅拌式反应器中用多孔微载体培养分泌尿激酶原的DNA重组中国仓鼠卵巢细胞 (rCHO) ,研究了血清浓度及溶氧对细胞生长和表达的影响。结果表明 ,在 2× 10 5 ml低密度接种条件下 ,使用低 (无 )血清培养基会延长细胞生长延滞期并降低比生长速率 ,而细胞密度大于 10 6 ml时 ,血清浓度对细胞生长和产物表达的影响没有显著差别。溶氧 (DO)维持在 2 0 %～ 45 %时 ,对细胞表达产物和葡萄糖代谢无明显影响 ,但溶氧降至 7%～ 9%时 ,细胞表达水平明显降低 。

组织工程的一般考虑

组织工程的最终目标是通过体外培养活细胞与其胞外环境相互作用而发育成具有生物活性的组织或器官替代物 ,替换、修复组织或器官 ,或强化其生物学功能。本文主要讨论细胞移植和组织重建的影响因素和可能的方法。

人胚胎干细胞的研究

来自着床前的囊胚和早期人胚胎的人胚胎干细胞是未分化的多能干细胞 ,具有无限增殖和分化的潜力 ,这种特性使之在基础研究和移植治疗中具有广泛的应用。尤其是胚胎干细胞可以产生任何类型的可供临床使用的细胞、组织和器官的潜力 ,将会带来一场医学革命。

稳定高产黄酮的水母雪莲细胞系的建立

利用^60Co-γ射线照射、高温诱变和紫外光线照射等手段诱变雪莲愈伤组织，结果表明：剂量为40Gy的60Co-γ射线照射原始雪莲细胞系RP-1得到的IRP-5细胞系，黄酮含量可从细胞干重的4．34％提高至6％。分别采用温度和紫外光线等手段诱变IRP-5细胞系得到的细胞系TIP-33和UIP-17，相应的黄酮含量可提高至10．1％和8．8％。用上述三种诱变方法处理原始雪莲细胞系，获得了一株稳定高产雪莲细胞系TUIP-8，黄酮含量大于12％，比天然植株高20-30倍，连续传代培养100代，细胞的培养密度和黄酮含量一直维持在20g（干重）／L和12％-14％左右。考察了温度对TUIP-8细胞悬浮培养的影响，该细胞系可以在20-30℃环境中生长，最适培养温度范围为20-25℃。

细胞工程在生物制药工业中的地位

细胞工程是生物制药工业中的关键技术 ,它是利用动物细胞体外培养和扩增来生产生物产品 ,或者作为发现和测试新药的工具。本文综述了细胞工程发展的历史、现状和未来 。

新型气液双升式动物细胞反应器

为克服目前动物细胞反应器存在的不足 ,设计了一种新型气液双升式动物细胞反应器( ALLR)。该反应器结合了气升式反应器和流化床反应器的优点 ,同时在结构上使气泡与流体自然流动与分离 ,消除了气泡凝聚破裂给细胞造成的机械损伤。测定了 2 L反应器的液体循环流速及氧传质系数 KLa值 ,表明 ALLR具有较好的传质性能和极小的流体剪切力 。

动物细胞培养用多孔载体的研制

多孔载体是一种新型的用于动物细胞培养的优秀的细胞支持物，其内部网状结构的小孔具有固定细胞和保护细胞免受机械损伤的功能，适合于贴壁细胞和悬浮细胞的培养，能提高培养密度，可应用于大规模培养系统。本文综述了多孔载体的物化性质、制作材料和制备方法。

人造生物皮肤

由活细胞和生物相容性材料制成的人造生物皮肤是第一种获得FDA批准的组织工程产品 ,它们在治疗严重烧伤病人和顽固性溃疡病人具有很好的疗效。本文综述了人造生物皮肤的特点、制备方法和作用机理 。

气液双升式反应器动物细胞培养及批式生长动力学模型

初步研究了气液双升式动物细胞反应器微载体培养 Bowes细胞和悬浮培养 M4G3杂交瘤细胞的生长条件 ,在不加入消泡剂和保护剂的情况下 ,批式培养 Bowes细胞的最大密度为 2 .6×1 0 6/ml,批式培养 M4G3细胞的最大密度为 1 .5× 1 0 6/ml。基于细胞生长的密度效应 ,建立了动物细胞生长动力学模型 : μ=0 t<t Lμ=μm{1 - exp[( - K) ( xm- x) /( x- xc) ]}t≥