双抗性质粒pSC33、pSC48的构建及其特性研究

截短的短小芽孢杆菌质粒pCJ3与去除了复制功能的金黄色葡萄球菌质粒PUB110经EcoRI酶切,DNA连接酶连接后组建T_o^r及K_m^r的双抗性的重组质粒pSC33和和PSC48。根据电泳迁移率估算pSC33及pSC48的大小分别为6.7及6.27Kb。具有BamHⅠ、AVaⅠ、XbaⅠ及BgLⅡ等限制酶的单切点,其中BgLⅡ切点位于卡那霉素抗性基因内。pSC33及pSC48能转化枯草杆菌各种突变体的感受态细胞,转化率比亲本质粒高一个数量级,也能转化枯草杆菌的原生质体。pSC33及pSC48在枯草杆菌BR151中表现稳定,以PSC48和载体克隆了滑鼠蛇肝线粒体DNA片段。

地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因的克隆及其表达

以噬菌体λEMBL3为载体,大肠杆菌Q358,Q359为宿主构建了地衣芽胞杆菌的基因文库,用I_2-KI染色法从该文库中分离出α-淀粉酶基因,并将含该基因的2.5kb片段亚克隆至pBR322。限制图谱分析显示克隆的基因与国外克隆的地衣芽胞杆菌基因有所不同。将2.5kb的基因片段与质粒pUB18的BamHI片段连接、组建重组质粒pUA44,并将其转入枯草杆菌的感受态细胞及短小芽胞杆菌的原生质体,实验结果证明,克隆基因可在枯草杆菌及短小芽胞杆菌中表达。

应用DNA-RNA斑点杂交法检测登革病毒核酸

新近制备了大量纯化的pEH920 DNA,该质粒DNA插入了登革病毒2型核酸片段的互补DNA。以[a-^(32)P]dCTP按缺口转译法标记pEH 920 DNA作为探针,以感染病毒的蚊细胞c_6/36培养上清作标本,应用DNA-RNA斑点杂交法检测了登革病毒核酸。结果显示同位素标记探针(pEH 920)与登革病毒2型标本反应最强,具有一定的型特异性。但与其它血清型登革病毒也呈一定交叉反应。初步探讨了探针的敏感性,至少可检出TCID_(50)625的登革病毒2型核酸。