流感病毒感染小鼠肺巨噬细胞Dll1和MHC-Ⅰ表达研究

目的探讨小鼠肺巨噬细胞Dll1及MHC-Ⅰ与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)为主的细胞免疫应答的关系,为制备有效的新型抗流感病毒疫苗提供理论依据。方法将小鼠随机分为3组,异型免疫组(用rL-H5株重组二联活疫苗免疫)、同型免疫组(用A/H1N1流感病毒免疫)和未免疫感染组(用PBS代替疫苗),不同疫苗免疫小鼠后均感染A/H1N1型流感病毒,比较3组小鼠肺巨噬细胞Notch-Dll1及MHC-Ⅰ表达情况,并研究干扰素(IFN)-γ、T细胞水平变化。结果异型免疫组感染4 d和7 d后,肺巨噬细胞Notch-Dll1[分别为(0.01460±0.00125)和(0.01750±0.00196)]及MHC-ⅠmRNA表达水平[分别为(0.03050±0.0029)和(0.0495±0.0024)]显著高于感染前[分别为(0.00045±0.00004)和(0.0120±0.0018)],未免疫感染组感染4 d和7 d后Notch-Dll1[分别为(0.01010±0.00107)和(0.01320±0.00143)]和MHC-ⅠmRNA表达水平[分别为(0.0219±0.0024)和(0.0248±0.0022)]均高于感染前[分别为(0.00032±0.00007)和(0.0090±0.0013)];异型免疫组感染4 d和7 d,后Notch-Dll1和MHC-ⅠmRNA表达水平均高于同型免疫组[感染4 d和7 d后,Notch-Dll1分别为(0.00089±0.00018)和(0.00143±0.00096),MHC-ⅠmRNA分别为(0.0038±0.0008)和(0.0008±0.0002)及未免疫感染组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。感染后第7天,异型免疫组IFN-γ、CD8+T细胞的百分比含量为(3.31±0.34)%,高于同型免疫组和未免疫感染组[分别为(0.38±0.06)%和(1.58±0.27)%];感染后第5天,异型免疫组流感病毒量为[(6.26×105)±(3.7×105)]copies/μL,低于未免疫感染组[(6.85×107)±(2×107)]copies/μL,而高于同型免疫组(400±250)copies/μL(均P<0.05)。结论小鼠肺巨噬细胞Dll1及MHC-Ⅰ的表达可能在以CTL为主流感病毒异型交叉保护免疫应答反应中起重要作用。

感染流感病毒巨噬细胞Dll1对分泌IFN-γ相关因素的影响

目的通过体外途径,应用Notch信号阻断剂(GSI),研究流感病毒感染巨噬细胞Dll1对分泌IFN-γ相关MHC分子表达及细胞因子IL-6、IL-12、IL-18水平的影响。方法用A/H1N1流感病毒感染RAW264.7巨噬细胞,并加入不同浓度GSI与细胞共孵育48h,分别提取细胞总RNA及收集培养上清液,采用实时荧光定量PCR法检测MHC分子表达及细胞因子水平。结果与DMSO对照组比较,感染流感病毒的RAW 264.7在GSI作用下表面分子MHC-ⅠmRNA表达水平无明显变化(P>0.05),而MHC-ⅡmRNA表达降低(P<0.05)。经Pearson相关性分析Dll1mRNA表达与MHC-Ⅱ呈正相关(r=0.816,P<0.05)。感染流感病毒的RAW264.7细胞在GSI作用后分泌的IL-12和IL-18水平低于DMSO对照组(P<0.05),而IL-6水平高于对照组。0.5、1和5μmol/L GSI组IL-12含量[分别为(24.15±0.35)、(21.15±4)和(14.75±0.7)pg/ml]均低于DMSO对照组[(53±2.83)pg/ml](P<0.05);5μmol/L GSI组IL-18含量[(75±7.07)pg/ml]低于DMSO对照组[(114.75±4.5)pg/ml](P<0.05)。经Pearson相关性分析,Dll1mRNA表达与IL-12呈正相关(r=0.972,P<0.05),与IL-6呈负相关(r=-0.767,P<0.05)。结论不同Dll1基因表达水平影响分泌IFN-γ相关巨噬细胞表面MHC-Ⅱ及IL-12、IL-18的水平,从而影响IFN-γ介导的抗流感病毒免疫应答反应。巨噬细胞Dll1与抗流感病毒免疫相关。