抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的单克隆抗体(Mab),以原核表达的融合蛋白GST-N为免疫原,免疫7周龄雌性BALB/c小鼠,利用重组蛋白His-N和Vero细胞培养病毒液作为检测筛选抗原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果表明:获得3株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株(5B2,3H1和4H5),单抗亚型鉴定均为Ig G1,轻链均为Kappa链。Western blot和间接免疫荧光试验结果表明,Mab能够识别重组N蛋白和PEDV。制备获得3株稳定性好、特异性强的Mab,可为今后建立检测猪流行性腹泻特异性诊断方法和研究PEDV核衣壳蛋白功能奠定基础。

牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究

为了建立快速、敏感、特异的雌二醇(E2)残留免疫检测方法,本研究应用胶体金免疫层析技术,研究制备一种快速检测牛奶中E2的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,采用物理吸附法将E2兔多克隆抗体偶联至胶体金,经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条,测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数,并对E2类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明,试纸条最优包被抗原浓度为2mg/mL,抗体浓度为20μg/mL。采用消线法判定结果,检测时间10min,PBS缓冲液中E2检测限为10μg/L,该方法与雌三醇的交叉反应率为40%,与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应,牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测,该方法在牛奶样品中的判定值为20μg/L。本研究建立的E2胶体金试纸条使用简单方便,适合现场快速检测牛奶中E2残留。

食源性雌二醇残留检测技术研究进展

具有促生长、催情作用的雌二醇在畜牧业生产中已发挥重要作用,然而广泛的不当应用常导致食源性雌二醇残留的严重后果。当前,雌二醇残留导致的生物雌激素样作用、弱致癌性已引起全世界的广泛关注,加强食源性雌二醇残留的监测与管控,加强对雌二醇残留检测技术的研究与应用,对于保障食品安全与人类生理健康等具有十分重要的现实意义。该文概述了食源性雌二醇的主要来源、残留危害分析和主要检测分析技术。

弓形虫卵囊壁蛋白OWP1的重组表达和特异性单克隆抗体制备

为研究制备弓形虫卵囊壁蛋白和特异性单克隆抗体,以弓形虫弱毒株ME49株DNA为模板,应用PCR技术扩增卵囊壁蛋白OWP1基因,将其克隆至原核表达载体构建重组表达质粒p ET-28a-OWP1,经过IPTG诱导表达和His纯化树脂纯化重组蛋白His-OWP1。重组蛋白His-OWP1作为免疫原,免疫7周龄雌性BALB/c小鼠,重组蛋白GST-OWP1作为检测筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备弓形虫卵囊壁蛋白OWP1的单克隆抗体。结果表明,获得2株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株(4A2和2C10)。Western blot结果表明研究制备的单克隆抗体能够识别重组表达蛋白。制备获得的2株稳定性好、效价高的单克隆抗体,可为今后研究特异敏感的弓形虫病血清学检测方法提供材料。

雌二醇单克隆抗体制备及间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立敏感、特异、快速的雌二醇(estradiol,E2)残留免疫检测方法,本研究利用雌二醇人工抗原(E2-BSA)免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备特异性雌二醇单克隆抗体,利用高效价、高特异性单克隆抗体建立间接竞争ELISA(ic ELISA)方法。结果显示,试验成功筛选获得一株稳定分泌抗雌二醇抗体的杂交瘤细胞株(3H3),抗体效价可达1∶320 000,利用3H3腹水抗体优化间接竞争ic ELISA反应条件,检测抗体的敏感度,IC50为1.636 ng/m L,IC20~IC80线性范围为0.202~13.281 ng/m L。雌二醇腹水抗体与雌三醇、乙炔雌二醇的交叉反应率分别达0.31%和0.25%,而与雌酮、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、炔雌醚、己烯雌酚、壬基酚的交叉反应率均<0.1%。结果表明,利用本研究制备的单克隆抗体建立雌二醇间接竞争ELISA检测方法,可满足食品中雌二醇残留高灵敏度的检测要求。

我国专业银行企业化的构想

一、专业银行的改革万向 专业银行是我国社会主义金融体系的主体,在金融体制改革中,专业银行要以企业化作为改革的方向。 长期以来,我国把银行的性质视同国家机关,用行政办法办银行,使银行变成了“第二财政部”,未能充分发挥银行应有的作用。存在的主要问题是:

猪传染性胃肠炎病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）M蛋白的单克隆抗体（MAb）,试验利用原核表达融合蛋白His-M免疫7周龄雌性Balb/c小鼠,以PK-15细胞培养病毒液作为检测筛选抗原,并采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果表明：获得2株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株（2G1、2G2）,经检测其细胞培养上清液和诱导的小鼠腹水抗体效价分别可达到1∶3200和1∶1×105;连续培养15代及液氮冻存后复苏,抗体效价稳定;单克隆抗体亚型鉴定均为IgG1,轻链均为k链;MAb能够特异性识别TGEV。