青少年单眼急性后极部多发性鳞状色素上皮病变1例

患者男性,14岁。因4 d前无明显诱因出现右眼视物遮挡,来我院就诊。发病以来无眼红、眼痛、视物变形等不适,未予以特殊处理,精神、饮食、睡眠可,大小便正常,体力体重无明显变化。既往体健,否认手术、外伤史,否认药物过敏史,否认慢性病史。眼部检查:视力右眼手动/20 cm(矫正不提高),左眼0.2,矫正1.0。眼压:右眼21 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),左眼17 mmHg。

慢病毒干扰TNF-α对脊髓损伤大鼠Caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的:采用慢病毒抑制炎症因子TNF-α的表达,观察凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2、Bax在脊髓损伤大鼠损伤段的表达变化,探究在脊髓损伤中TNF-α与Caspase-3、Bcl-2、Bax的相互关系。方法:采用Allen法制备脊髓钝挫伤模型;Gene MANIA生物信息学方法预测TNF-α与Bcl-2的关系。用慢病毒包装的RNA,构建TNF-α的RNA干扰模型;TNF-α的表达被抑制后,用QRT-PCR检测Caspase-3和Bcl-2 m RNA的表达,用免疫组织化学技术检测Caspase-3和Bcl-2、Bax蛋白质的定位分布,用SPSS 17.0进行统计分析。结果:脊髓钝挫伤后SD大鼠双后肢截瘫,无法自行排便排尿。慢病毒干扰TNF-α后QRT-PCR结果显示,Caspase-3表达显著减少(P<0.05),Bcl-2表达下降,但是没有显著变化(P>0.05)。免疫组织化学实验结果显示在脊髓白质和灰质的神经元和神经胶质细胞中观察到Caspase-3、Bcl-2、Bax的免疫阳性反应细胞,并与QRT-PCR变化结果相同。结论:在脊髓损伤后的大鼠体内TNF-α能有效调控Bcl-2和Bax的比值,进而调节Caspase-3的表达,最终可能影响凋亡而作用于脊髓损伤后的功能恢复。

神经电刺激对大鼠脊髓钝挫伤后神经营养因子4和增殖细胞核抗原表达影响的研究

目的:探讨在电刺激干预下大鼠脊髓损伤节段神经生长因子(NT4)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及对脊髓损伤的影响。方法:成年雌性SD大鼠78只,随机分为3组:假手术组(n=6)、对照组(n=36)和实验组(n=36)。Allen's法复制SD大鼠T9脊髓钝挫伤模型。实验组脊髓钝挫伤后给予夹脊穴和足三里穴位神经电刺激干预。神经行为学评分后,运用免疫组化和蛋白质印迹(Western blot)来检测NT4、PCNA的表达变化。结果:行为学观察,实验组大鼠术后1周BBB评分显著高于对照组(P<0.05),低于假手术组(P<0.05)。实验组第1—3天NT4表达显著升高(P<0.05),第7天达到峰值并且其表达明显高于对照组(P<0.05)。实验组第1—3天PCNA表达降低,第7天达到最大差异(P<0.05)。结论:电刺激干预下,脊髓组织中神经元中的NT4表达增强,电刺激能改善运动功能恢复。神经电刺激后PCNA表达减少,神经电刺激对神经干细胞的分化作用大于神经干细胞的再生增殖。

大鼠脊髓钝挫伤后单核细胞趋化蛋白-1与趋化因子受体2的表达变化

目的:探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和趋化因子受体2(CCR2)在脊髓钝挫伤(SCC)大鼠的表达及其对运动功能和感觉功能的影响。方法:SD大鼠随机分为损伤(SCC组)术后12h、3d、7d、14d组及假手术组共5组。Allen打击法建立SCC模型,进行BBB评分,光热尾痛法测定大鼠温痛觉潜伏期,RT-PCR检测CCR2和MCP-1基因相对表达量,免疫组织化学观察MCP-1和CCR2在脊髓前角和后角的表达。结果:SCC后BBB评分降低,7d与14dBBB评分明显增高。SCC后3、7d温痛觉潜伏期较假手术组缩短。SCC后CCR2mRNA在12h和3d时表达量增高;随后在7、14dCCR2mRNA降低。MCP-1mRNA的表达量在12h、3d、7d增高,14dMCP-1mRNA下降。MCP-1和CCR2在脊髓前角主要表达在神经元中,在脊髓后角主要表达于神经胶质细胞和神经元。结论:MCP-1和CCR2可能作为重要的因子参与脊髓损伤早期的继发性损伤,导致大鼠运动功能和感觉功能障碍。

基于神经生物电原理治疗原发性痛经的作用机制研究

目的:探究神经生物电刺激对原发性痛经(Primary dysmenorrhea,PD)大鼠P物质(Substance P,SP)的表达变化的影响。方法:将SD大鼠随机分为非模型对照组、模型对照组和实验组3组。实验组给予股部皮下注射已烯雌酚,每天一次,连续10d,第1天0.8mg·只^(-1),第2-9天0.4mg·只^(-1),第10天0.8mg·只^(-1);第11天腹腔注射缩宫素2U·只^(-1);对实验组大鼠进行神经生物电刺激干预,并在1h、3h和7h后采用扭体评分进行运动评价。模型对照组只注射与实验组相同剂量的已烯雌酚与缩宫素,不进行神经生物电刺激干预,其余操作不变。非模型对照组不注射已烯雌酚与缩宫素,不进行神经生物电刺激干预,其余操作不变。免疫组织化学技术检测各组大鼠脊髓后角中SP的定位及表达变化,采用免疫荧光技术探究SP与脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)在脊髓后角的共定位情况。结果:扭体评分显示实验组大鼠运动增加幅度明显小于模型对照组(P<0.05)。SP主要分布于脊髓后角Ⅱ板层,所有时间点实验组SP表达均低于模型对照组,在3h表达差异最大(P<0.05)。免疫荧光双标技术显示SP和BDNF在脊髓后角共表达。结论:神经生物电刺激能抑制SP的表达,影响原发性痛经,其机制可能与SP及BDNF共同作用有关。

大鼠脊髓损伤早期CNTF与NT-4表达变化及其相互关系

目的探讨内源性睫状细胞神经生长因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)和神经营养因子4(neurotrophin-4,NT-4)在大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)早期的表达变化及其相互关系,为SCI神经营养因子疗法提供理论依据。方法成年Sprague Dawley(SD)大鼠45只随机分为假手术(Sham)组、SCI-12h、SCI-1d、SCI-3d和SCI-7d组(n=9)。各SCI组大鼠均采用改良Allen's法制备T10节段脊髓顿挫伤模型,用BBB(BassoBeattie-Bresnahan locomotor,BBB)评分法评估各组大鼠后肢运动功能;采用荧光定量PCR(Q-PCR)及免疫组织化学染色检测大鼠脊髓顿挫伤后CNTF与NT-4的表达情况;利用GeneMANIA数据库对CNTF与NT-4的相互作用进行预测分析。结果术后Sham组大鼠BBB评分不变,SCI组大鼠损伤平面以下完全瘫痪,BBB评分为0,SCI-7d组评分较SCI-12h组高(P<0.01),但仍低于Sham组(P<0.01)。与Sham组相比,SCI-12h组CNTF mRNA相对表达量降低(P<0.05),于SCI-3d组降至最低(P<0.05);NT-4mRNA相对表达量在SCI-12h组无变化,于SCI-1d组表达增高(P<0.05),至SCI-7d组表达降低(P<0.01),但与Sham组比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色结果显示,CNTF在神经元与神经胶质细胞均有表达,NT-4主要在神经元表达。与Sham组相比,CNTF与NT-4阳性神经元数量及IOD值均在SCI-12h组减少(P<0.01);两种蛋白质随后呈现不同的变化趋势:脊髓前角CNTF阳性神经元数量与IOD值分别在SCI-3d组与SCI-7d组再次降低(P<0.01);而NT-4阳性神经元与IOD值分别在SCI-7d组与SCI-3d组增高,表达水平接近Sham组。脊髓后角CNTF阳性神经元数量在SCI-1d组再次降低(P<0.01),至SCI-7d组无变化;NT-4阳性神经元数量及其IOD值分别在SCI-1d组及SCI-7d组增高(P<0.01),且SCI-7d组与Sham组比较差异无统计学意义(P>0.05)。GeneMANIA分析结果显示,CNTF和NT-4无直接相互作用,但与NGF、Tmem237、Kcnh6、Tph1、Psisp1和Ghrhr具有共同的共定位和/或共表达关系。结论机体在SCI急性期上调CNTF表达;在亚急性期上调NT-4,下调CNTF表达,推测与减少胶质瘢痕形成,促进运动神经元再生有关;CNTF与NT-4和多种蛋白质的共表达/共定位关系还需进一步的深入研究。

沉默白细胞介素-1β基因对脊髓钝挫伤大鼠波形蛋白的影响

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对大鼠脊髓钝挫伤模型中波形蛋白的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠30只,采用Allen法制备脊髓钝挫伤模型,随机分为空载组(n=15)和干扰组(n=15),分别注射空质粒和包装IL-1βsi RNA的质粒;每组再分为3 d、7 d和28 d亚组。通过Gene MANIA预测IL-1β与波形蛋白之间的关系。采用免疫组化和实时定量聚合酶链反应方法观察损伤区波形蛋白的表达。结果 Gene MANIA分析显示,IL-1β与波形蛋白可通过多个基因直接或间接联系。空载组波形蛋白在脊髓前角神经元和神经胶质细胞中广泛表达,干扰组波形蛋白及m RNA均较空载组下降(t>2.875,P<0.05)。结论 IL-1β能调控波形蛋白表达,可能影响损伤修复。

大鼠脊髓钝挫伤后早期糖原合成酶激酶3β的表达及意义

目的研究大鼠脊髓钝挫损伤早期,脊髓损伤区域糖原合成酶激酶3-β(GSK3-β)的表达变化及细胞定位情况,探讨其在脊髓损伤(SCC)早期的生物学功能。方法将40只成年Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成假手术(Sham)组与SCC-12h、1d、3d和7d组,每组各8只。除Sham组大鼠外均采用改良Allen's法建立大鼠T10节段脊髓钝挫伤模型,用BBB评分评价各组大鼠的运动功能;采用荧光定量PCR(Q-PCR)及免疫组织化学法检测各组大鼠脊髓GSK3-β的表达情况,观察并统计不同时间点SCC组大鼠GSK3-β免疫组化阳性细胞的分布及数量变化。结果与Sham组相比,各SCC组大鼠BBB评分显著下降,术后第7d比第3d有所升高,差异有统计学意义(P<0.01)。GSK3-βmRNA相对表达量于术后12h明显降低,至术后第3d再次降低。免疫组织化学检测各SCC组GSK3-β阳性细胞均比Sham组少,差异有统计学意义(P<0.01),以SCC-3d组最少;脊髓灰质的GSK3-β阳性细胞主要在前角表达,其数量在SCC-12h组明显降低,术后第3d达到最低值,术后第7d明显升高,但仍然低于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);脊髓后角GSK3-β阳性细胞表达较少,各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在维护脊髓正常功能中发挥重要作用;脊髓损伤后,机体通过调节GSK3-β的表达减轻炎症反应和促进损伤脊髓运动功能的恢复。

大鼠脊髓顿挫伤后CRMP-2的表达变化

目的:观察大鼠脊髓顿挫伤后脑衰反应蛋白2(CRMP-2)在脊髓组织中的分布及基因表达变化。方法:采用Allen's重物法打击SD大鼠制备脊髓顿挫伤模型。采用BBB评分方法评估大鼠后肢运动功能:采用免疫组织化学技术(IHC)观察CRMP-2在损伤脊髓中的定位,实时定量PCR(qRT-PCR)方法观察CRMP-2在大鼠脊髓顿挫伤后的基因表达变化。结果:脊髓顿挫伤后,BBB评分结果表明大鼠后肢运动功能明显下降,在损伤后1d,7 d,14 d,21 d和28 d的BBB评分逐渐恢复,但是仍然低于对照组。免疫组织化学染色结果显示:CRMP-2在脊髓前角运动神经元和神经胶质细胞中广泛表达在脊髓损伤后12 h,3 d,7 d,14 d和28 d,CRMP-2免疫阳性细胞数相比sham组均有明显的减少。定量qRT-PCR结果显示:脊髓顿挫伤后CRMP-2基因表达下降,并持续至术后28 d。结论:脊髓顿挫伤后,CRMP-2大量存在于脊髓前角运动神经元及神经胶质细胞中,在损伤脊髓中的基因表达持续下降。结果提示脊髓顿挫伤后CRMP-2可能影响神经细胞的生长,分化和迁移。

突触活性带蛋白1在大鼠脊髓损伤后的表达变化

目的观察突触活性带蛋白1(Complexin-1,CPLX-1)在大鼠脊髓损伤后的表达变化。方法采用Allen's法制备SD大鼠脊髓钝挫伤模型,BBB评分评估大鼠的运动功能,免疫组织化学技术观察CPLX-1在脊髓中分布,实时定量PCR(qRT-PCR)检检测CPLX-1基因在损伤后的表达变化。结果脊髓损伤后,大鼠后肢运动功能明显障碍,BBB评分于损伤后第1d最低,术后7d才有所恢复(p<0.05)。免疫组织化学结果显示,CPLX-1在脊髓前角运动神经元和神经胶质细胞中表达。此外,脊髓损伤后CPLX-1在神经元中表达逐渐降低,至术后第3d时最低,后随时间逐渐增加,但在神经胶质细胞中表达逐渐增加,至术后第3d时最高,后随时间逐渐降低;qRT-PCR结果显示脊髓损伤后CPLX-1的基因表达急剧下降,至术后3d达到最低,随后逐渐上升,但一直到术后28d仍低于正常水平(p<0.05)。结论 CPLX-1在脊髓运动神经元和神经胶质细胞中表达,在脊髓损伤后其基因和蛋白的表达量下降,可能在大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复中起重要作用。

应对“慕课”挑战 深化医学实验教学改革

随着“慕课”的兴起和我国精品开放共享课程的不断推进，在线医学实验课程成为医学教育中面临的挑战。伴随着“慕课”提供越来越多的高质量免费的大学基础课程，大学不再是高等教育的唯一提供者。在应对医学教育国际化的过程中，建立开放性、共享性医学教学平台，是解决医学教学资源集约化的主要途径。