Nogo-66受体在成年大鼠脊髓白质内胶质细胞的分布

目的 :研究Nogo 6 6受体 (NgR)在成年大鼠脊髓白质的分布情况 .方法 :选用正常雄性SD大鼠脊髓切片 ,进行免疫组织化学、免疫荧光双标和包埋前免疫电镜染色 ,观察NgR免疫阳性物质在脊髓白质的定位情况 .结果 :在光镜水平可观察到NgR阳性的点状结构主要分布在脊髓白质胶质细胞胞体周边和突起上 ,且与细胞膜关系密切 ;在电镜水平可观察到NgR阳性的胶体金颗粒分布在星形胶质细胞之间 ,寡突胶质细胞之间以及星形胶质细胞和寡突胶质细胞之间的缝隙连接上 .结论 :本研究提供了NgR在正常成年大鼠脊髓白质胶质细胞分布并且在缝隙连接定位的形态学证据 。

人体肝脏靶向性新型AAV血清型载体的研发

通过DNA shuffling技术选择8种AAV(AAV1~AAV4,AAV6~AAV9)cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库。将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列)。通过转化实验获得随机感染质粒文库(pIRC)。将所得质粒经过共转染HEK293细胞,72 h后收集纯化病毒,获得感染性AAV文库。利用野生型5型腺病毒(Wild Type Ad5,wt Ad5)辅助感染人肝癌Hep G2细胞,进行筛选后,最终在肝细胞中富集获得1种新型AAV血清载体AAVXL12。通过将携带GFP基因的不同AAV血清型载体感染Hep G2细胞,观察到不同程度的绿色荧光的表达,最终显示筛选到的AAV血清型载体AAVXL12介导的GFP基因表达效果最好,荧光强度最强。

聚乙烯亚胺改性的双介孔氧化硅基因载体构建

为了开发一种新型的非病毒无机基因载体,采用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTMS)和聚乙烯亚胺(PEI)对嵌入型双介孔氧化硅球(EDMSNs)进行改性,分别得到EDMSNs-NH2和EDMSNs-PEI,并比较了两种载体结合和保护pCMV-EGFP-N1质粒(pDNA)的能力及细胞转染性能。利用透射电镜、动态光散射及氮气吸附-脱附实验对材料的颗粒形态,动力学粒径,Zeta电位及孔结构参数进行表征。结果显示,EDMSNs-NH2和EDMSNs-PEI均表现出明显的双介孔结构,形貌为规整的球形且平均动力学粒径分别为343.2和338.9 nm,表面电位分别为+18和+43 mV。琼脂糖凝胶电泳、CCK-8法及荧光显微镜结果表明,EDMSNs-PEI对pDNA的担载量为8%,远高于EDMSNs-NH2(1%)。与PEI和lipofectamine2000相比,EDMSNs-PEI载体展示出更低的细胞毒性。EDMSNs-PEI/pDNA质量比为33:1时,EDMSNs-PEI/pDNA对293T细胞的转染效率在72 h达到最大值。因此,与EDMSNs-NH2相比,EDMSNs-PEI具有更高的正电位及pDNA担载量,可作为一类有前景的非病毒无机类基因载体用于重大疾病如恶性胶质瘤的治疗。