人参皂苷辛酸酯通过内质网应激诱导肝癌细胞免疫原性细胞死亡的机制研究

目的:探讨人参皂苷辛酸酯(Rh2-O)能否诱导Huh-7肝癌细胞免疫原性细胞死亡及可能机制。方法:体外培养Huh-7细胞,设置空白对照组、Rh2-O药物组及阳性对照组(米托蒽醌处理),CCK-8、流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡,ELISA及化学发光法分别检测细胞上清高迁移率族蛋白1(HMGB1)和三磷酸腺苷(ATP)含量,免疫荧光法检测细胞钙网蛋白(CRT)的膜外翻,荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS水平,Western blot检测细胞内质网应激信号通路相关蛋白表达。结果:Rh2-O可显著降低细胞活力,促进细胞凋亡,诱导细胞HMGB1分泌、ATP释放及CRT膜外翻,使细胞内蓄积大量ROS,提高内质网应激信号通路相关蛋白PERK、eIF2α、p-eIF2α表达(均P<0.05)。内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理可显著减弱Rh2-O诱导的CRT膜外翻(P<0.05)。结论:Rh2-O可诱导肝癌细胞发生免疫原性细胞死亡,其机制可能与Rh2-O激活内质网应激促进细胞CRT膜外翻有关。

基于体外模拟消化、发酵和网络药理学探讨桑叶酚类物质的潜在生物学活性

目的 基于体外模拟消化、发酵和网络药理学探讨桑叶酚类物质对于阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)、癌症和糖尿病3种疾病的潜在共同作用靶点,为研究桑叶治疗多种疾病提供理论基础。方法 新鲜桑叶冷冻干燥粉碎后模拟体外消化及肠道微生物发酵过程,取不同消化(或发酵)阶段产物,利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析其中的特征酚类物质,结合Swiss Target Prediction和Genecards数据库筛选特征酚类物质治疗AD、癌症和糖尿病3种疾病的潜在作用靶点,采用String平台构建蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图,再用Cytoscape软件分析特征酚类物质与以上3种疾病作用的共同核心靶点,并筛选出其中的主要活性组分;通过David数据库对共同核心靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路富集分析;使用Autodock vina和PyMol软件对主要活性组分和共同核心靶点进行分子对接。结果 桑叶体外消化(或发酵)各阶段共检测到19种特征酚类物质,其中主要活性组分为咖啡酸、槲皮素和山柰酚。特征酚类物质与3种疾病交集靶点的共同靶点有48种。PPI得出特征酚类物质对3种疾病作用的10个共同核心靶点(AKT1、TNF、EGFR、PTGS2、SRC、TLR4、CASP3、ESR1、STAT3和MMP9)。对核心靶点进行富集分析,得到120个生物过程、11个细胞组分、14个分子功能和35条信号通路,其中炎症相关通路占比最高。主要活性组分与核心靶点进行分子对接模拟后,结合能均小于-5 kcal/mol。结论 桑叶不同体外消化(发酵)过程中产生的特征酚类物质可能通过抑制慢性炎症反应对AD、癌症和糖尿病3种疾病起到治疗效应。