用精原细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究

目的 探讨精原细胞介导法制备乙肝病毒 X基因转基因小鼠的可行性。方法 构建乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X;应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3- X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与雌鼠交配 ,用 PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源 DNA和肝组织中表达的 p X蛋白。结果 测序结果与文献报道一致 ,并且 X基因在 Hela细胞中表达 ;共产仔鼠 16只 ,其中 1只为阳性仔鼠 ,阳性率为 6 .2 5 %。结论 初步证明用精原干细胞介导法制备

蚓激酶的诱变实验研究

用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验，小鼠骨髓红细胞微核试验及ＣＨＬ细胞染色体畸变试验，对蚓激酶进行了诱变性试验研究，结果表明鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验为阴性，该药可能不诱发基因突变；小鼠骨髓红细胞微核试验及ＣＨＬ细胞染色体畸变试验均为阴性，说明该药可能不诱发体内、体外遗传物质损伤作用。

老年鼠六种组织细胞的细胞核与染色质DNaseⅠ的消化敏感性研究

为探讨衰老的机理，作者研究了老年鼠和断奶乳鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６ 种组织细胞的细胞核和染色质对ＤＮＡ 酶Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）的消化敏感性。结果显示：①老年鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６种组织细胞的细胞核和染色质对ＤＮａｓｅⅠ的消化敏感性均较断奶乳鼠相应的组织低；②老年鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６ 种组织的消化敏感性各不相同，脑组织的消化敏感性最低（Ｐ＜ ０．０１）；③断奶乳鼠脑组织的消化敏感性也较其它５ 种组织低，但乳鼠中其它５ 种组织细胞核及染色质的消化敏感性差异不明显。作者认为，老年鼠各组织细胞核和染色质转录活性降低，可能与活性基因减少有关。

白障明的诱变性试验研究

作者用鼠伤寒沙门氏菌回变试验,小鼠骨髓红细胞微核试验及CHL细胞染色体畸变试验,对白障明进行了诱变性试验研究。结果表明鼠伤寒沙门氏菌回变试验为阴性,该药可能不诱发基因突变,NIH小鼠骨髓红细胞微核试验及CHL细胞染色体畸变试验均为阴性,说明该药可能不诱发体内,体外染色体损伤作用。

拮抗丸诱发果蝇隐性伴性致死研究

采用十八反中甘遂、芫花、大戟、甘草等药物配制成的拮抗丸,经临床观察,对多种肿瘤有一定的疗效,为了评价该丸药的安全性,探讨其有无诱变作用,对生殖细胞中的遗传物质是否有损伤,本文对拮抗丸进行了果蝇隐性伴性致死研究。现介绍如下。

在教学中培养学生能力的探索

在医学生物学和细胞生物学教学过程中 ,在课堂上 ,我们在讲授知识的同时注重科学方法的讲解对学生逻辑思维能力的培养 ;教会他们从图书馆、电子图书资料库、Internet网上获取所需知识的方法。在实验教学中 ,培养学生发现问题 ,分析、解决问题的能力 ;组织学生参加科研兴趣小组 ,使教学、科研紧密结合 。

以学生能力培养为中心,提高教学质量

提高教学质量一直是教师探讨的热点话题。本文从课堂教学、到课外指导学生阅读文献和参考教材培养学生自学能力,利用大学生科研训练项目及教师自己的研究项目培养学生创新能力、表达能力和交际能力等方面分析了以学生为中心,培养学生多方面的能力、特别是创新能力,提高教学质量的一些心得体会。

D-半乳糖对大鼠骨髓间充质干细胞拟衰老作用的实验研究

目的探讨D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)衰老后的形态学及生物学变化情况。方法取3只2月龄SD大鼠MSCs分离培养至第3代,一部分置于含8g/LD-gal的培养液中继续培养至第6代作为诱导组;另一部分在原培养液中继续培养至第6代作为对照组,并作表型鉴定。采用流式细胞仪检测对照组加入8g/LD-gal后4d内细胞周期的分布变化。两组MSCs培养7d并绘制生长曲线,在光镜和透射电镜下观察其形态和结构变化,β-半乳糖苷酶染色、单细胞凝胶电泳检测DNA损伤方法检测其衰老后的生物学行为变化。结果诱导组MSCs镜下呈典型的衰老细胞形态;对照组MSCs形态均匀,长势良好。流式细胞仪检测表明加入D-gal诱导后90%MSCs停留在G0/G1期,而S期和G2/M期MSCs趋于消失,并随诱导时间延长趋势越明显;对照组MSCs各期比例正常。MSCs生长曲线示诱导组生长速度较对照组明显减慢。诱导组约85%呈β-半乳糖苷酶阳性染色,对照组染色为阴性。单细胞凝胶电泳示诱导组MSCsDNA有拖尾现象,对照组MSCs无DNA损伤。结论D-gal对SD大鼠MSCs的老化具有诱导作用,初步推断8g/L为最适浓度,为研究MSCs衰老提供了较好的模型。

刺五加对大鼠脑缺血损伤修复作用的研究

采用双侧颈总动脉结扎制作SD大鼠暂时性全脑缺血模型,手术后尾静脉分别注射药物刺五加注射液或生理盐水进行观察和神经行为学评分,制片作常规HE染色和Nestin免疫组化染色检测缺血损伤后的修复情况.神经行为学评分显示刺五加组神经功能恢复明显好于生理盐水组.脑缺血再灌注后3d时海马、室管膜和室管膜下区神经干细胞有少量Nestin阳性表达;脑缺血再灌注后5d和7d时海马、室管膜、室管膜下区和缺血区神经干细胞阳性Nestin阳性细胞数明显增加,尤其在缺血区,刺五加组Nestin阳性表达细胞数显著多于生理盐水对照组.结果表明刺五加有促进脑缺血脑组织神经干细胞的增殖,对大鼠脑缺血损伤有一定修复作用.

差速贴壁法纯化分离GFP转基因小鼠骨髓间充质干细胞

目的运用差速贴壁法分离纯化绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法分离GFP转基因小鼠骨髓细胞直接种植在培养瓶中,分别于2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、24h和48h进行首次全量换液,培养3d后按细胞类型对贴壁细胞分别计数,并用CD44、CD45、CD54进行免疫细胞化学染色。另外,选4h、8h、24h后换液的细胞进行传代培养,传至第5代,计算扩增倍数,用CD44、CD45、CD54进行免疫细胞化学染色。结果随着首次换液时间的延长,贴壁细胞密度增多,BMSCs的比例减少。首次换液时间在接种后2h的细胞纯度高,但细胞密度低;24h后的细胞密度高而纯度低;8h后的细胞密度大具有较高的纯度。传代后的GFP转基因小鼠BMSCs能稳定表达GFP。结论差速贴壁法能有效分离纯化GFP转基因小鼠BMSCs,首次换液时间在接种后8～10h时的传代细胞纯度高,具有扩增能力,可作为组织工程和基因治疗研究的种子细胞。

脊髓全横断损伤后差异表达蛋白的蛋白质组学分析

对脊髓全横断损伤前后的大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出18种蛋白质.脊髓损伤3d后表达上调的蛋白质有巨噬细胞游走抑制因子、S期激酶相关蛋白1、热休克蛋白27、多配体蛋白聚糖3、T细胞受体β链可变区、膜联蛋白Ⅲ、腺苷酸激酶1、半乳凝素3、丙酮酸脱氢酶、磷脂酶B、嗜铬粒蛋白A、热休克蛋白70凝结蛋白1;同时表达下调的蛋白质有磷酸丙糖异构酶、神经鞘氨醇磷酸化受体、热休克蛋白10、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶A.多数差异蛋白质涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程,为进一步阐明中枢神经系统的损伤和修复机制提供了理论依据.

人胚神经干细胞的分离、培养与鉴定

为了探讨人胚神经干细胞体外培养条件和分化情况 ,摸索出一种切实可行的获得较纯、多潜能人胚神经干细胞的方法。我们取三月龄人胎脑 ,用胰蛋白酶消化法分离单个细胞 ,部分冻存 ,另一部分进行细胞培养 ,加EGF、b FGF刺激生长 ,有限稀释法获得单细胞克隆 ,血清诱导分化 ,并用免疫组化方法进行鉴定。结果显示 ,EGF和 b FGF同时存在的无血清培养基中有大量神经干细胞团生成 ,含血清培养基则诱导神经干细胞分化成为神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞。这表明 ,神经干细胞的存活和分裂有赖于 EGF和 b FGF的共同作用。

自体血清培养人脐血间充质干细胞的实验研究

本实验采集脐血并分离脐血单核细胞与血清,分别用胎牛血清与自体脐血血清培养人脐血间充质干细胞。通过检测所培养出的成纤维细胞样细胞的表面抗原标记与细胞的成骨、成脂和成心肌细胞分化能力,鉴定所培养的细胞是否为间充质干细胞。成功采集的21例脐血中,有11例用胎牛血清和15例用自体血清培养出了间充质干细胞,表达细胞表面抗原标记CD29、CD44、CD105,不表达CD34、CD45,并成功地诱导成成骨细胞,脂肪细胞和心肌样细胞,说明使用自体血清培养脐血间充质干细胞较使用胎牛血清有较高的成功率,而且,自体血清培养的脐血间充质干细胞也能成功的进行多向诱导分化。

香丹注射液对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖作用

目的研究香丹注射液对大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）增殖的影响。方法肌注香丹注射液和5-溴尿嘧啶核苷（Brdu）;体外培养MSC,用四甲基偶氮唑法检测香丹注射液促进大鼠MSC的增殖作用,免疫组化检测MSC细胞的Brdu标记阳性率。结果3种高浓度的药液对MSC的增殖与对照组比较有显著性差异;停药后3-7 d,香丹组Brdu标记阳性细胞率与生理盐水组比较有显著性差异。结论香丹注射液有促进MSC增殖的作用。

对铬作业工人银染核仁形成区、姊妹染色单体互换及微核的研究

作者对31名从事铬酸盐生产的工人及31名健康人的外周血淋巴细胞银染核仁形成区(Ag-NOR)、姊妹染色单体互换(SCE)及微核率进行了研究。结果:连续工龄在8年以上者,Ag-NOR、银染近端着丝粒染色体的联合频率(Ag-AA)及SCE与对照组间有高度显著性差异(P<0.01);微核率,各工龄组与对照组间均有高度显著性差异(P<0.001)。表明长期接触铬酸盐工作者,其遗传物质可能遭受到一定程度的损伤。

增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建

构建增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因的真核表达载体pCDNA3.1(+) EGFP,转染至培养的Hela细胞中成功表达,并发出绿色荧光,证明EGFP一种良好的报告基因和筛选标记.

黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞株的抑制作用

目的研究黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用及探讨作用机理。方法肝癌BEL-7402细胞与不同浓度的黄芪总苷培养12,24,48 h,应用MTT和流式细胞术分析黄芪总苷对细胞的作用。结果黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖具有明显的抑制作用并呈剂量、时间依赖性。黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞具有促进凋亡作用,并且上调p53基因表达。结论黄芪总苷可抑制肝癌BEL-7402的增殖,其抑制肝癌BEL-7402作用与其促进肿瘤细胞凋亡、上调p53基因表达有关。

四种中药注射液对大鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的影响

目的寻找对骨髓间充质干细胞(MSC)增殖有促进作用的中药。方法通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法,Brdu标记MSC,免疫细胞化学法分析4种中药(参麦、生脉、黄芪、刺五加)对大鼠第五代MSC的增殖作用。结果4种中药中除黄芪外都有一定的诱导MSCs增殖的功能,但是刺五加的作用最强。结论刺五加具有较强的促进MSCs增殖的功能。

增强型绿色荧光蛋白表达对鼠C6细胞生物学特征影响的研究

脂质体包裹质粒pEGFP-N1转染C6细胞,经G418筛选,得到稳定表达绿色荧光的C6-EGFP细胞.细胞计数,MTT,流式细胞术分别测定C6细胞在转染绿色荧光蛋白后增殖性,细胞活力以及细胞周期等生物学特性.C6细胞在转染了绿色荧光蛋白基因后细胞增殖性降低,细胞活力降低,细胞周期也发生了一些改变.

维那利酮的诱变试验研究

作者应用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验,小鼠骨髓红细胞微核试验及CHL细胞染色体畸变试验,对维那利酮(OPC-8212)的诱变性进行了试验研究,其结果均为阴性。说明 OPC-8212不诱发原核细胞基因突变,也不会导致体内、体外染色体畸变,是一种安全可靠的强心剂。