CPO-PCL微粒在缺氧条件下对脂肪间充质干细胞体外增殖及成骨分化作用的影响

目的:探究聚己内酯(polycaprolactone,PCL)包载过氧化钙(calcium peroxide,CPO)的CPO-PCL微粒在缺氧条件下对脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cell,ADMSC)体外增殖及成骨分化作用的影响。方法:提取大鼠ADMSC,并加入制备的CPO-PCL微粒,在缺氧/常氧环境下,正常培养或成骨分化培养细胞,分别于培养第7天和第14天MTT实验检测ADMSC增殖,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP水平;茜素红染色观察钙化结节情况,免疫荧光染色观察ADMSC核心转录因子-2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(Osteocalcin)和骨桥蛋白(Osteopontin)的荧光表达量。结果:在缺氧成骨分化培养条件下,1.00%CPO-PCL微粒显著促进细胞增殖(P<0.05),0.50%和1.00%CPO-PCL微粒显著增加ADMSC ALP和钙结节生成量(P<0.001),促进RUNX2、Osteocalcin和Osteopontin蛋白表达(P<0.05)。在缺氧正常培养条件下,1.00%CPO-PCL微粒增加ADMSC ALP含量,促进RUNX2、Osteocalcin和Osteopontin蛋白表达(P<0.05)。在常氧成骨分化培养条件下,1.00%CPO-PCL微粒增加ALP和钙结节生成量,0.50%和1.00%CPO-PCL微粒促进RUNX2、Osteocalcin蛋白表达(P<0.001)。在常氧正常培养条件下,0.50%和1.00%CPO-PCL微粒促进RUNX2、Osteocalcin和Osteopontin蛋白表达(P<0.05),但对细胞成骨分化无显著影响。结论:1.00%CPO-PCL微粒在缺氧成骨分化培养条件下能够促进ADMSC体外增殖及成骨分化。

陆地和大海的来历

“○”表示一个胖巨人,“△”表示一个瘦巨人。“-”表示陆地,“～”表示大海。很久很久以前,地球上没有大海,也没有陆地,一点生机都没有,只有高山和小湖泊。但是,在这里仍然生活着两个巨人,他们一个胖一个瘦,一个住在地球东面。

智斗大灰狼

舒克和贝塔走进皮皮鲁家,看到了这幕情景,也吓了一跳。大胆的皮皮鲁说:“看我皮皮鲁的!”说着,他便拿起大斧头。

二甲双胍调控miR-340-5p/DDX17轴对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡的影响及分子机制

目的探讨二甲双胍调控miR-340-5p/DEAD-box解旋酶17(DEAD-box helicase 17,DDX17)轴对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡的影响。方法MC3T3-E1细胞分为对照组、高糖组、二甲双胍组、inhibitor NC组、miR-340-5p inhibitor组、二甲双胍+mimic NC组、二甲双胍+miR-340-5p mimic组,qRT-PCR检测miR-340-5p表达;Western blot检测DDX17、细胞周期素D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved aspartate-specific cysteine protease-3,Cleaved caspase-3)蛋白;CCK-8、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光原位杂交实验、双荧光素酶分别验证miR-340-5p与DDX17的定位、靶向关系。结果与对照组比较,高糖组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高(t=19.81,39.47,24.61,21.62,P均<0.001),OD_(450)值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低(t=7.624,30.100,26.54,19.46,21.20,P均<0.001);与高糖组比较,二甲双胍组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达降低(t=13.37,28.55,18.35,18.78,P均<0.001),OD_(450)值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达升高(t=7.97,25.76,18.48,12.39,18.98,P均<0.001);与高糖组、inhibitor NC组比较,miR-340-5p inhibitor组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达降低(F=85.92,301.11,142.64,170.35,P均<0.001),OD_(450)值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达升高(F=26.54,447.72,249.31,113.46,393.27,P均<0.001);与二甲双胍组、二甲双胍+mimic NC组比较,二甲双胍+miR-340-5p mimic组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高(F=36.27,395.56,94.90,18.59,P均<0.001),OD_(450)值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低(F=21.44,128.47,24.28,25.89,18.06,P均<0.001)。miR-340-5p靶向调控DDX17表达,且二者共定位于细胞质中。结论二甲双胍通过下调miR-340-5p表达,上调DDX17表达进而促进高糖诱导的MC3T3-E1细胞增殖,抑制凋亡。