温州地区汉族人群CYP2C19和CYP2C9基因多态性分析

目的:研究温州地区汉族人群CYP2C19、CYP2C9基因多态性分布。方法:采用聚合酶链式反应和测序方法,对287例健康人群CYP2C19、CYP2C9基因多态性进行分析。结果:温州地区汉族人群的CYP2C19*1、CYP2C19*2和CYP2C19*3三种等位基因的频率分别为65.16%、29.27%和5.57%;CYP2C19*1/*1、CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*3、CYP2C19*2/*2和CYP2C19*3/*3基因型的频率分别为44.95%、33.45%、6.97%、4.18%、10.45%和0.00%,弱代谢率为14.63%;CYP2C9*1和CYP2C9*3等位基因频率分别为97.74%和2.26%,CYP2C9*1/*1和CYP2C9*1/*3的基因频率为95.47%和4.53%,未发现CYP2C9*3/*3。结论:温州地区汉族人群CYP2C19和CYP2C9弱代谢率与已报道的汉族人群基本一致,与日本人群相近,显著高于欧美人群。

实时荧光定量PCR检测精子线粒体DNA的提取效率

目的:测定宝生物工程有限(大连)公司和上海杰美基因医药科技有限公司两种试剂盒精子线粒体DNA提取的效率,以及核基因组DNA的残留。方法:CASA法计数精子数量,试剂盒提取线粒体DNA,TaqMan法荧光实时定量PCR,利用标准曲线测定线粒体基因Cox-I片段、核基因β-actin片段的拷贝数,计算出精子线粒体DNA的提取效率和核基因组DNA的残留。结果:两种试剂盒精子线粒体DNA提取效率分别是:0.44%±0.03%和6.19%±0.17%。核基因组DNA的残留率分别为4.71%±0.76%和38.1%±1.97%。结论:后者线粒体DNA提取效率高一个数量级,但核基因组DNA的残留率也高一个数量级。

PCA3基因启动子多态性快速分型的DHPLC法建立

目的建立DHPLC技术分析PCa特异性PCA3基因启动子多态性的技术平台。方法在PCA3基因启动子区域设计1对引物，以本室先前已经建立的11种（C2T6、C2T5、C3T5、C2T5／C2T6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7）已知多态性的PCA3基因启动子的克隆质粒为标准品，通过优化DHPLC检测体系，建立其多态性克隆质粒的标准图谱。采用完全随机设计，从200例病理确诊为PCa患者中选取147例，对其PCA3基因启动子的扩增产物进行DHPLC分析，比较各标本洗脱峰与标准克隆质粒的DHPLC图谱，以判断临床标本PCA3基因多态性类型，并对这些基因型再行克隆测序予以验证。结果通过克隆质粒优化DHPLC检测体系，最适检测体系为：含44．3％A洗脱液（0．1mol／L TEAA、0．025％ACN）和55．7％B洗脱液（0．1mol／L TEAA、25％ACN）的起始洗脱梯度，含35．3％A洗脱液和64．7％B洗脱液的终止洗脱梯度，柱温53℃，流速：0．9ml／min，在该条件下DHPLC用8种杂合型克隆质粒（C2T5／C2T6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7）进行重复性验证，结果显示，同一多态性色谱峰中2峰的出峰时间之差的批间CV值在0％～6．67％之间。11种克隆质粒多态性标本仅通过1～2次洗脱，就能根据峰型和各峰的出峰时间将其区分开。147例PCa患者中，144例DHPLC检测结果和克隆测序结果一致（Kappa=1，P=0．000），并出现3种新的峰型，经克隆测序验证为3种新的多态性（C3T5／C1T6、C2T5／C1T8、C3T5／C2T7）。结论成功建立的DHPLC分析PCA3基因启动子多态性的技术方法，可对PCA3基因启动子多态性进行基因型别鉴定。该方法具快速、准确、经济、高通量、重复性好、自动化等特点，为进一步研究PCa基因多态性提供了技术平台。