猪皮酶解液分子量分布与除盐工艺考察

目的:考察猪皮酶解液的分子量分布和除盐工艺,以筛选出最佳除盐方案。方法:以不同分子量物质的含量和除盐效果为指标,采用膜处理和电渗析除盐的方法对猪皮酶解液进行分子量分布测定和除盐工艺的考察。结果:通过对不同分子量物质的重量测定,得出猪皮肽在>3000 Da、1000～3000 Da和<1000 Da分子量下所占比例分别为21.36%、56.19%、4.72%,1000～3000 Da比例最高;通过电导率的变化、除盐率和肽回收率的考察,得出猪皮酶解液在电压31 V、流速15 L·h^(-1)、除盐时间2 h、药液浓度200 mg·mL^(-1)的条件下,效果最好,平均除盐率为93.58%,且肽回收率高达82.28%。结论:猪皮肽的分子量主要集中在1000～3000 Da,其除盐工艺合理可行,对后期实验进行和产品开发奠定了一定的实验基础。

不同产地苦杏仁药材及其饮片水提液HPLC指纹图谱研究

采用高效液相色谱法建立苦杏仁药材水提液的指纹图谱,并通过对生杏仁和燀杏仁指纹图谱的比较分析,为苦杏仁药材质量控制提供参考依据。采用Kinetex C18(2.6μm,100 mm×4.6 mm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速0.6mL·min^-1,检测波长210nm,柱温20℃,进样量10μL。不同产地的15批苦杏仁药材共有7个共有峰,峰面积之和大于总峰面积的90%。对各产地的药材进行了相似度比较,建立了苦杏仁药材水提液的HPLC指纹图谱方法。对比生杏仁与燀杏仁的指纹图谱,发现燀杏仁中缺少1、3、7号峰,且苦杏仁苷含量明显高于生杏仁。本研究建立的指纹图谱方法可行,可以为苦杏仁药材及含苦杏仁的复方制剂质量控制提供参考。

中华圆田螺肉抗氧化肽的分离纯化及小鼠体内外活性研究

采用超滤、大孔树脂、凝胶过滤色谱和半制备液相色谱对中华圆田螺肉的酶解液进行分离纯化,以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、铁离子还原能力(FRAP)、氧自由基吸收能力(ORAC)为指标,制备抗氧化肽,并通过小鼠体内抗氧化酶活性及MDA生成量进行测定试验。结果表明:分子质量<1 kDa部位的抗氧化活性最强,分离出的混合物抗氧化肽纯度达到90%。体外抗氧化活性显示,该抗氧化肽的DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、ORAC均为最高,且ORAC与谷胱甘肽相比效果无显著差异(P>0.05),通过小鼠体内抗氧化酶及MDA增加值的测定显示,除GSH-PX外,试验组与谷胱甘肽阳性对照组无显著差异(P>0.05),说明试验所获得的抗氧化肽具有和谷胱甘肽相当的抗氧化活性,具有深层的开发利用价值。

基于传统煎液四物汤构建的HPLC特征图谱方法的四物颗粒和四物合剂评价研究

目的建立四物汤HPLC特征图谱的分析方法,并应用于传统煎液与成方制剂四物颗粒及四物合剂的对比,为全面评价市售四物颗粒和四物合剂质量提供依据。方法采用Inertsil ODS-SP(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长225 nm,柱温30℃,流速为1 mL/min,运用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"软件对色谱图进行处理和相似度评价。结果各批次四物汤相似度均在0.97以上,标定了11个特征峰,对其中7个特征峰进行了指认。成方制剂四物颗粒与四物合剂与传统煎液对照特征谱图对比,相似度良好,分别为0.993和0.987。结论所建立的四物汤HPLC特征图谱方法,精密度、重复性和稳定性良好,能用来对四物颗粒和四物合剂进行全面的质量评价。

雄性土鳖虫中不同分子量多肽活性研究

目的:对雄性土鳖虫不同分子量物质进行活性测定,得到最强活性片段。方法:采用不同截留孔径的超滤、纳滤;DA201-c树脂、葡聚糖G25对样品进行分子量分离,得到不同分子量组分,并采用体外抗凝实验、溶栓实验、平板实验等测定其活性。结果:采用超滤、纳滤得到小于1000 Da、1000~3000 Da、大于3000 Da组分,并通过实验测定得到1000~3000 Da的物质活性最强,再通过DA201-C树脂对活性组分进行极性分离,得到三个洗脱组分:25%乙醇洗脱组分、50%乙醇洗脱组分、75%乙醇洗脱组分。并通过抗凝、溶栓试验得到50%乙醇洗脱组分活性最强。再将50%乙醇洗脱组分经过G25进行分离,得到三个峰位,分别记为FIV1、FIV2、FIV3。经抗凝、溶栓实验测得FIV2活性强。在经过高效液相得出FIV2组分的分子量集中于1000~1500 Da。结论:通过超滤、树脂、尺寸排阻色谱分离得到的活性组分,可以进一步进行分离,为以后的肽段测序奠定基础。

HPLC法测定圣愈汤冻干粉中4个指标成分的含量

目的:建立测定圣愈汤冻干粉中阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯、黄芪甲苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法测定3批冻干粉样品4种成分含量。测定阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯的色谱柱为Inertsil ODS-SP C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为330 nm,检测器为二极管阵列检测器,柱温为30℃,进样量为10μL;测定黄芪甲苷的色谱柱为Kromasil C18,流动相为乙腈-水(32∶68,V/V),检测器为蒸发光散射检测器,漂移管温度为100℃,载气(空气)流量为2.5 L/min,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL。结果:阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯和黄芪甲苷进样量线性范围分别为0.050 15~10.03μg(r=0.999 8)、0.067 80~13.56μg(r=0.999 9)、0.057 30~11.46μg(r=0.999 5)、1.128~11.28μg(r=0.999 3);检测限分别为2.12×10-4、1.30×10-3、8.02×10-4、1.09×10-3μg,定量限分别为7.43×10-4、3.87×10-3、2.34×10-3、3.36×10-3μg;精密度、稳定性(12 h)、重复性试验的RSD均小于2%(n=6);平均加样回收率分别为99.6%(RSD=0.83%,n=6)、100.9%(RSD=1.07%,n=6)、98.8%(RSD=0.84%,n=6)和101.3%(RSD=0.99%,n=6)。3批样品中阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯和黄芪甲苷的含量分别为1.225~1.248、0.413~0.424、0.325~0.332、0.394~0.404 mg/g(批间RSD<1.5%)。结论:建立的含量测定方法稳定性、重复性好,能够快速、准确地测定圣愈汤冻干粉中阿魏酸、毛蕊花糖苷、藁本内酯和黄芪甲苷的含量。

复配絮凝剂对圣愈汤合剂澄清效果研究

目的为了提高圣愈汤合剂的澄清度,采用复配絮凝技术对圣愈汤合剂进行除杂研究。方法采用壳聚糖与明胶两种絮凝剂复配的方式对圣愈汤合剂进行除杂,采用单因素试验,以阿魏酸和毛蕊花糖苷保留率、鞣质去除率及处理后合剂浊度为指标,考察壳聚糖与明胶的配比、复配絮凝剂的用量、浓缩液含生药量、反应pH和反应温度对澄清效果的影响;采用响应面试验确定最佳絮凝工艺条件并验证。结果单因素试验确定了絮凝剂配比和用量:1%明胶与1%壳聚糖的配比为1∶2,每50 mL浓缩液复配絮凝剂的用量为3 mL;响应面试验确定了最佳絮凝工艺条件:浓缩液含生药量为0.20 g/mL,反应pH为7,反应温度为30℃。结论实验结果表明建立的絮凝方法能够选择性地去除圣愈汤合剂中的鞣质,提高合剂的澄清度,同时较好地保留了有效成分。

鸡胚肽锌螯合物的制备工艺及免疫调节功能研究

以鸡胚蛋为原料,通过分步酶解法制备鸡胚肽。以螯合率及螯合物得率为指标,利用单因素实验结合响应面法优化制备鸡胚肽锌螯合物,通过小鼠免疫器官胸腺和脾脏质量指数探究鸡胚肽锌螯合物的免疫调节功能。结果表明,先用碱性蛋白酶后用胰蛋白酶将鸡胚蛋进行酶解,在螯合温度70℃,鸡胚肽与锌的浓度比为2.3∶1,pH为8,螯合时间2.2 h的条件下,鸡胚肽与锌元素的螯合率最高,为48.98%±0.35%,此时螯合物得率为38.04%±0.26%,得率较高且稳定。按照此方法制备的富锌鸡胚肽能使胸腺和脾脏的质量指数明显增大,说明通过双酶酶解制备的鸡胚小肽与锌元素的螯合物具有一定的免疫调节功能,并呈现一定的量效关系。鸡胚肽锌螯合物在食源性螯合肽免疫功能方面具有一定的开发利用价值。

苦荞添加微量元素发芽后降糖作用研究

目的研究苦荞添加微量元素发芽过程中肌醇等降糖活性成分含量的动态变化,以及对降糖活性的影响,为开发新型降糖资源提供理论基础。方法以肌醇含量为指标,使用HPLC-ELSD法对发芽过程中肌醇含量变化进行监测,以芦丁及槲皮素的含量为指标,使用HPLC法对发芽过程中黄酮类成分的含量变化进行监测,使用盐酸-正丁醇法对苦荞中.原花青素的含量进行测定;以四氧嘧啶致糖尿病小鼠为模型,对糖尿病小鼠空腹血糖值进行测定,研究苦荞添加微量元素发芽后对糖尿病小鼠空腹血糖值的影响。结果苦荞发芽过程中游离肌醇含量呈先增加后降低的趋势,在发芽第4天时达到最大值;苦荞黄酮类成分的含量随着发芽时间的延长有先增加后慢慢降低的趋势,在第4天时芦丁及槲皮素总量达到最大值;原花青素的含量随发芽时间的延长呈先增加后降低的趋势,在发芽第4天时含量达到最大值;苦荞添加微量元素发芽能显著降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠的空腹血糖值。结论添加微量元素发芽后肌醇含量增加为初始浓度的6倍,芦丁含量呈上升趋势,槲皮素的含量先增加后降低,原花青素的含量逐渐增加,具有显著降糖活性,降糖效果优于未添加微量元素发芽的荞麦粉。