细菌荧光酶生物发光分析法测定血清γ-氨基丁酸

利用γ－氨基丁酸酶偶联细菌荧光酶生物发光系统建立血清γ－氨基丁酸的微量分析方法。血清首先用０．５ｍｏｌ／Ｌ三氯乙酸溶液沉淀蛋白，再与双酶液混合，由全自动发光光度计记录发光峰值并计算结果。测定的线性范围达１０００ｎｍｏｌ／Ｌ，与高效液相色谱法比较，相关系数为０．９７６，不同含量的三份样品，批内变异分别为１１．２％、９．５％和８．３％，批间变异分别为９．１０％、１３．４％、１５．０％。

血液同型半胱氨酸的测定方法及临床意义

同型半胱氨酸是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物，可能是动脉粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子。血浆中同型半胱氨酸含量与遗传因素、营养因素、雌激素水平、年龄因素等有关，与同型半胱氨酸代谢有关的N5N10-亚甲基四氢叶酸还原酶和胱硫醚-β-合成酶的基因突变，酶活性下降，也可引起高同型半胱氨酸血症。同型半胱氨酸的测定方法有：气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法（HPLC）、全自动的荧光偏振免疫测定（FluorescencePolarizationimmunoassayFPIA）、高效毛细管电泳法。HPLC最常用，而高效毛细管电泳是有发展前途。

对氧磷酶(Paraoxonase)的测定方法与临床意义

对氧磷酶 (Paraoxonase)是结合在高密度脂蛋白 (HDL)上的一种有机磷三酯化合物水解酶。最近研究表明 ,对氧磷酶可以保护低密度脂蛋白 (LDL)的氧化 ,其活性与基因多态性被认为是动脉粥样硬化、冠心病的独立危险因素。本文综述Paraoxonase的生化特征、基因的多态性。

影响FK-506在全血中分布的因素

目的分析影响FK-506在全血中分布的因素。方法全血和血浆的FK506浓度采用微粒子酶免疫测定法(Microp-article enzyme immunoassay MEIA),红细胞压积和红血球记数采用全自动血液细胞分析仪进行测定,HDL,VLDL和总胆固醇使用常规的生物化学方法进行测定。结果红细胞压积和红血球记数与FK-506的分布呈现正相关的关系,HDL、VLDL、总胆固醇和FK-506在血浆中的浓度密切相关,血浆白蛋白浓度与FK-506在血浆中分布没有相关性。结论红细胞压积和红血球记数严重影响全血中FK-506的分布,HDL、总胆固醇对FK-506在血浆中有一定的影响作用,血浆白蛋白浓度不影响在FK-506在血浆中的分布。

细菌荧光酶生物发光分析法测定血清中抑制性神经递质GABA

ｙ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）是一种主要的抑制神经递质，其含量的变化与许多神经和精神性疾病有关，本文报道了利用ＧＡＢＡ酶偶联细菌荧光酶生物发光系统建立的ＧＡＢＡ超微量分析方法。血清标本先经８０ｇ／Ｌ的三氯乙酸溶液沉淀蛋白，再与双酶工作液混和，由全自动发光光度计记录发光峰值和计算结果。本法的线性范围是０－１０００ｎｍｏｌ／Ｌ。与高效液相色谱法比较，ｙ＝０．９７６，不同含量的３份标本，批内变异分别为１１．２％、９．５％和８．３％，批间变异为１２．５％。本研究还初步探讨了ＧＡＢＡ对帕金森综合征的诊断价值。

烟曲霉几丁质酶基因的克隆与表达

Chi4 4是烟曲霉 (Aspergillusfumigatus)YJ 4 0 7产生的一种胞外几丁质酶。通过用真菌几丁质酶保守氨基酸序列与Chi4 4的N 端序列检索烟曲霉部分基因组序列数据库 ,获得一个编号为contig5 5 5的烟曲霉基因组序列 ,可能包含烟曲霉几丁质酶的基因。根据检索结果用RT PCR方法从烟曲霉YJ 4 0 7中克隆到 1 4kb的cDNA片段 ,该cDNA的ORF编码一个 395个氨基酸的蛋白 ,分子量为 4 3 6kD。对其推导氨基酸序列分析表明该蛋白与其它真菌来源的几丁质酶同源 ,而且活性中心与人巨噬细胞几丁质酶高度同源。该cDNA已在E .coli与PichiapastorisGS115中获得表达 ,分别获得 4 3kD和 4 4kD的重组蛋白 ,两种重组蛋白均有几丁质酶活性。与野生酶相比 ,大肠杆菌表达的 4 3kD重组酶及Pichia酵母表达的 4 4kD重组酶稳定性下降 ,说明Chi4

产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌感染的临床和微生物学特点

目的研究分析产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌感染的临床和微生物学特点。方法收集2011年1—12月武警总医院18株产KPC酶的肠杆菌科细菌,使用PCR和测序的方法对菌株进行鉴定,用微量肉汤稀释法检测其对常用抗菌药物的耐药性,并对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌感染的病例临床资料进行调查分析。结果 2011年从临床送检的标本中,通过表型鉴定和PCR检测,共分离出产KPC型碳青霉烯酶细菌18株,其中肺炎克雷伯菌13株,大肠埃希菌4株,产气肠杆菌1株。90%患者在产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌分离之前,使用过头孢菌素类(包括第二、三、四代头孢菌素)、头霉素、氨曲南和β内酰胺酶抑制剂复方制剂,70%患者使用过碳青霉烯类抗生素。所有菌株对头孢菌素类和碳青霉烯类抗生素耐药,对阿米卡星的敏感率为60.0%,对替加环素的敏感率为100%。经过治疗后,7例患者死亡,病死率43.8%。结论产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的出现,提示临床上应严格控制抗生素的使用,加强医院感染控制措施,防止和减少此类耐药菌在医院内的传播。

米诺环素、替加环素对多重耐药菌的体外抗菌活性比较

目的评价米诺环素、替加环素对多重耐药的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)、肠球菌和鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性。方法采用微量肉汤稀释法测定临床分离的多重耐药细菌对米诺环素、替加环素的敏感性。结果多重耐药的1 55株鲍曼不动杆菌,99株(63.9%)对米诺环素敏感,39株(25.2%)对米诺环素耐药,17株(11.0%)对米诺环素中介。75株多重耐药MRSA,50株(66.7%)对米诺环素敏感,20株(26.7%)对米诺环素中介,5株(6.7%)为耐药株。93株多重耐药屎肠球菌中36株(38.7%)对米诺环素敏感,57株(61.3%)对米诺环素耐药。39株粪肠球菌中25株(64.1%)对米诺环素敏感。75株MRSA对替加环素100%敏感,132株肠球菌100%敏感。5株耐万古霉素屎肠球菌和4株产新德里金属β内酰胺酶不动杆菌全部对替加环素敏感,MRSA和肠球菌对替加环素敏感性为100%。结论替加环素对米诺环素耐药的肠球菌和MRSA有很好的体外抗菌活性,替加环素对米诺环素耐药的鲍曼不动杆菌的抗菌活性也不理想。

罕见豚鼠耳炎奴卡菌的鉴定及其药物敏感性分析

目的探讨罕见豚鼠耳炎奴卡菌的鉴定方法并评价其药物敏感性。方法采用形态、生理生化表型鉴定与16S rRNA序列分析相结合的方法鉴定菌株,使用微量肉汤法检测其药物敏感性。结果临床分离的奴卡菌被鉴定为豚鼠耳炎奴卡菌,其对哌拉西林、红霉素、头孢他啶、头孢哌酮、庆大霉素、头孢西丁、哌拉西林/他唑巴坦耐药,万古霉素、左氧氟沙星、亚胺培南、依替沙星、环丙沙星、阿米卡星、复方磺胺甲基异噁唑敏感。结论 16SrRNA基因序列分析法可用以鉴定豚鼠耳炎奴卡菌,磺胺类药物治疗有效。

产KPC铜绿假单胞菌的耐药性研究

目的探讨产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)铜绿假单胞菌的耐药性。方法铜绿假单胞菌菌株来自2例痰液标本。采用VITEK 2COMPACT全自动微生物鉴定/药敏分析仪进行细菌菌株的鉴定,应用聚合酶链反应(PCR)及基因测序法鉴定KPC酶基因型,采用肉汤稀释法进行抗菌药的最低抑菌浓度(MIC)测定。结果 2例菌株均对β-内酰胺类抗菌药、左氧氟沙星耐药,对环丙沙星中介,对庆大霉素、奈替米星、妥布霉素、黏菌素及多黏菌素B敏感;其中1株还对替加环素敏感。2例菌株所产碳青霉烯酶不是金属β-内酰胺酶,其亚型为KPC-2。接合实验未能证明bla KPC基因能接合转移到大肠埃希菌J53中。结论产KPC铜绿假单胞菌的出现给临床抗感染治疗带来严峻挑战。

用多位点序列分析技术鉴定9株产高光学纯度D-乳酸野生菌株

目的对从某发酵食品中分离纯化出的9株产高光学纯度D-乳酸的野生菌株(SZD菌株)进行鉴定。方法先结合表型特征及16SrRNA基因序列分析将SZD菌株鉴定到种的水平,再通过综合分析hsp60、pheS、rpoA及tuf基因的多位点序列分析(MLSA)技术将其鉴定到亚种的水平。结果 SZD菌株的16SrRNA基因序列与棒状乳杆菌扭曲亚种及棒状亚种相应序列的相似率均达99.9%以上。SZD菌株的pheS基因序列与棒状乳杆菌棒状亚种及扭曲亚种的相应序列的相似率分别为100%和97.87%,而rpoA基因序列与棒状乳杆菌棒状亚种及扭曲亚种的相应序列的相似率分别为98.65%和100%;tuf基因序列与棒状乳杆菌两个已知亚种相应序列的相似率均为99.00%以上,而hsp60基因序列与棒状乳杆菌两个已知亚种相应序列的相似率均为99.00%以下。在用应用算术平均数的非加权成组配对法构建的基于16SrRNA、hsp60、tuf和pheS基因的进化树中,SZD菌株独立于棒状乳杆菌的两个已知亚种而自成一支。因此,将SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌的一个新亚种。结论结合表型特征及16SrRNA基因序列分析将SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌,最后通过基于hsp60、pheS、rpoA及tuf基因的MLSA技术将其鉴定为棒状乳杆菌一个新的亚种。

Chelex-100法快速提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA

目的探索一种快速、高效提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA的方法。方法采用Chelex-100法提取14株革兰氏阳性杆菌的基因组DNA,利用PCR技术扩增16SrRNA基因及4个单拷贝管家基因以评价提取核酸的质量。结果 Chelex-100法能够在20min内从革兰氏阳性杆菌中提取出基因组DNA,所提取的DNA可直接用于PCR扩增。所有菌株的16SrRNA基因及棒状乳杆菌的4个单拷贝管家基因均扩增成功,PCR产物经电泳检测目的条带清晰特异,与预期目的片段长度相符。结论 Chelex-100法具有快速、高效、安全、经济的特点,采用这种方法提取的革兰氏阳性杆菌的基因组DNA可直接作为PCR扩增的模板。

肝移植受体嗜麦芽寡养单胞菌感染的分布及药敏分析

目的了解肝移植患者术后嗜麦芽寡养单胞菌感染的分布及耐药情况。方法采用回顾性分析2004年9月-2006年12月从医院肝移植中心490例肝移植术后患者送检的标本中分离到的55株嗜麦芽寡养单胞菌分布及耐药情况。结果呼吸道标本是嗜麦芽寡养单胞菌感染的主要来源,占69.1%,其次为胆汁、导管分泌物和血液;嗜麦芽寡养单胞菌对大多数抗菌药物耐药,敏感性较好的是喹诺酮类、头孢哌酮/舒巴坦,复方新诺明。结论肝移植患者术后嗜麦芽寡养单胞菌感染率为11.2%,嗜麦芽寡养单胞菌的耐药性严重,早期拔出插管和合理使用抗菌药物,可减少肝移植患者术后嗜麦芽寡养单胞菌的感染。

荧光多聚酶链反应测定细胞色素P450 3A5 1*3多态性

目的建立荧光多聚酶链反应测定细胞色素P450 3A51*3的多态性。方法以TaqMan技术为基础,采用等位基因特异性引物,在引物的3′端第二位人为引入一个非配对碱基提高引物的分辨力。对PCR反应的Mg2+和探针浓度进行优化,同时对本方法的灵敏度和精密度进行了研究,应用直接DNA测序法对准确度进行评价。结果优化后的Mg2+和探针浓度分别为3.5mmol/L和0.7μmol/L,批内(n=20)CV为1.41%,批间(n=20)CV为1.72%,在25μl反应体系中,样本DNA浓度5.0×102～5.0×106pg范围内可获满意结果。本法确定的50份标本基因型与直接DNA测序法结果完全一致。结论本法快速、灵敏、可靠,适用于细胞色素P4503A51*3多态性测定。

检验科管理系统网络的建立与应用

检验科管理系统网络的建立与应用武警总医院检验科刘建刚，彭国钧，崔云龙，张志臣，周尔范，胡红焱（北京１０００３９）关键词检验科，计算机，网络随着科学技术的发展，检验科自动分析能力不断提高。但各分析仪之间缺乏联系，以至于大量的计算、统计、查找结果等工作仍...

洛菲不动杆菌株多药耐药NDM-1基因的鉴定

目的检测并鉴定洛菲不动杆菌多药耐药菌株中新德里金属β内酰胺酶新德里金属β-内酰胺酶(new delhi metallo-β-lactamase,NDM)-1基因表达。方法抗菌药物最小抑菌浓度(minimal inhibitory,MIC)筛选多药耐药菌株,PCR方法鉴定候选菌株中金属β-内酰胺酶基因,经PCR测序、亚胺培南和亚胺培南+EDTA复合纸片的双纸片协同法鉴定金属β内酰胺酶表型,并采取接合实验和全基因组测序来确定NDM-1。结果自458株金属β-内酰胺酶阳性菌株中分离出一株洛菲不动杆菌,并检出NDM-1基因,此菌株并不合并存在VIM和IMP金属β-内酰胺酶基因阳性表达。该菌株对所有的β-内酰胺类抗生素均不敏感,而对阿米卡星、多粘菌素、替加环素敏感。全基因组测序确定其位于一个48.9 kb的质粒上,目标带纯化后克隆、扩增的目标序列与文献报道的NDM-1基因同源性为100%。结论 NDM-1是一种针对碳青霉烯类抗生素耐药的新机制,临床工作者应关注其对洛菲不动杆菌多药耐药的影响。

高温高强度训练条件下氧化应激对血清白细胞介素-6的影响

目的研究高温、高强度和阳光中紫外线照射下训练士兵血清中白细胞介素-6（IL-6）的变化。方法选择训练组和对照组士兵共60人，于训练结束后，抽取外周血。采用酶联免疫吸附测定法检测对照组和训练组血清中IL-6、活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）、丙二醇（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的表达水平。结果对照组和训练组血清中IL-6、ROS、NO、SOD表达水平比较有统计学意义（P〈0．05）；对照组和训练组血清中MDA表达水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论高温、高强度和阳光中紫外线辐射下训练，机体产生氧化应激，血清中IL-6表达水平升高。