β-细辛醚对多房棘球蚴的体外杀伤作用

目的明确α-细辛醚和β-细辛醚在体外对多房棘球蚴的杀伤作用。方法将5 mg/mL的α-细辛醚和β-细辛醚在体外分别与多房棘球蚴共培养时用光镜观察虫体变化,并以不同浓度的β-细辛醚在体外与多房棘球蚴共培养,以伊红染色后观察虫体的死亡率及结构变化。结果将多房棘球蚴分别与α-细辛醚、β-细辛醚在体外作用0.5 h,后者全部死亡,前者无变化。将多房棘球蚴在体外分别与2.50、1.25 mg/mL的β-细辛醚作用,前者在2 h时全部死亡,后者在20 h时死亡;浓度为0.75 mg/mL时,在20 h后多房棘球蚴死亡率达64.33%±2.333;扫描电镜观察发现多房棘球蚴虫体表面损伤,头部微绒毛消失、钩疑似脱落。结论β-细辛醚在体外对多房棘球蚴具有较强的杀伤作用。

基于环介导等温核酸扩增技术分型检测多房/细粒棘球蚴方法的建立

目的本研究拟建立用于分型检测多房棘球蚴与细粒棘球蚴的分子生物学方法。方法采用生物信息学软件Primerexplorer针对多房棘球蚴(Echinococcusmultilocularis,E.m.)和细粒棘球蚴(Echinococcusgranulosus,E.g.)线粒体基因组ND2基因,设计用于区分多房棘球蚴和细粒棘球蚴DNA样本的LAMP引物,并行筛选、验证后进一步对扩增温度、Mg^2+扩增浓度、dNTP Mix扩增浓度进行考察以优化其反应体系。结果通过生物信息学方法Primerexplorer,针对多房/细粒棘球蚴线粒体基因ND2的差异序列位点设计、获得了两对可用于多房/细粒棘球蚴分型检测的引物ND2A(E.m.)、ND2A(E.g.);ND2B(E.m.)、ND2B(E.g.)。进一步通过LAMP反应扩增后经琼脂糖电泳及可视化探针筛选发现ND2A(E.m.)、ND2A(E.g.)引物可以成功区分多房棘球蚴和细粒棘球蚴线粒体DNA序列,而ND2B(E.m.)、ND2B(E.g.)引物无法区分。进而通过优化反应条件发现,ND2A(E.m.)、ND2A(E.g.)的最适反应温度分别为64℃和61℃;ND2A(E.m.)、ND2A(E.g.)的最适Mg^2+反应浓度分别为1.5×10^-4mM和1.7×10^-4mM;ND2A(E.m.)、ND2A(E.g.)的最适dNTP Mix反应浓度为3.5×10^-5mM和3.4×10^-5mM。结论通过设计、验证、筛选获得了用于区分多房/细粒棘球蚴线粒体DNA的LAMP引物,并通过优化反应条件成功建立了一种基于LAMP技术用于多房/细粒棘球蚴分型检测的分子生物学方法。

多房棘球绦虫多表位疫苗GILE的设计构建及原核表达

目的 设计、构建多房棘球绦虫多表位疫苗GILE,并表达、纯化该重组蛋白。方法 基于课题组前期对多房棘球绦虫EmEMY162、EmLAP、EmGLUT1优势抗原表位鉴定的结果,通过SWISS-MODEL、pyMOL、SOPMA、VMD生物信息学软件预测GILE的结构及疏水性,设计多表位疫苗GILE。合成GILE序列,插入质粒pCzn1中,构建重组质粒pCzn1-GILE。将重组质粒转化入大肠杆菌Artic express中,添加IPTG诱导重组蛋白表达。通过SDS-PAGE和免疫印迹法确定重组蛋白是否表达。结果 通过SWISS-MODEL软件开展同源建模,结果表明抗原表位最优串联方式为EMY162_(95-104)―LAP_(464-479)―LAP_(495-510)―LAP_(396-410)―EMY162_(106-121)―LAP_(504-518)―EMY162_(112-126)。通过SOPMA软件分析GILE的二级结构,结果表明α螺旋占13.84%,β折叠占26.25%,β转角占14.88%,无规卷曲占45.82%。通过酶切和测序验证表明,质粒pCzn1-GILE构建成功。通过IPTG诱导,得到45KD的重组蛋白。通过Ni-NTA柱的亲和纯化,得到纯化重组蛋白GILE。通过Western blotting法验证,纯化后的GILE蛋白能与His抗体特异结合,得到纯化重组蛋白GILE。结论 本研究通过生物信息学软件成功设计、构建了多表位疫苗GILE,并通过GILE原核表达系统表达、纯化了重组蛋白GILE。

藏药拉卜楞洁白丸对小鼠急性酒精性胃损伤的保护作用

目的探讨藏药拉卜楞洁白丸对小鼠急性酒精性胃损伤的保护作用。方法60只小鼠分为六组,即模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组、低剂量预防组、高剂量预防组和对照组,每组10只。模型组、低剂量治疗组和高剂量治疗组予一次性灌胃(无水乙醇)制备急性酒精性胃损伤小鼠模型,之后连续灌药5 d,模型组同时灌胃予等量生理盐水。低、高剂量预防组连续灌药5 d后予一次性灌胃(无水乙醇)。对照组给予等量生理盐水。生物解剖镜下观察胃组织计算损伤指数;光镜下观察小鼠胃窦部的病理形态学改变。结果低剂量预防组损伤指数与模型组无明显差异(P>0.05);其他各灌药组与模型组比较,损伤指数均降低,具有统计学差异(P<0.05)。各灌药组与模型组比较,胃窦部细胞损伤程度均减轻。结论藏药拉卜楞洁白丸对急性酒精性胃损伤小鼠具有一定的预防和治疗作用。

医用个人防护用品应用现状研究综述

医用个人防护用品作为保护人员生命安全的重要屏障,在急性传染性疾病防治过程中具有举足轻重的作用,比如在突发传染性疾病防控中的应用——隔断病原,防止扩散。本文探讨了医用口罩、眼部防护用品、手部防护用品和防护服的应用现状及分类,重点指出防护用品现存问题,并提出了防护用品今后发展建议,医用个人防护用品在中国市场应该拥有更加广阔的发展空间和应用前景。