磁性氮化碳复合材料的制备及其对磷酸化肽的富集

蛋白质的磷酸化在细胞信号传导和疾病发生发展中起着重要作用,但磷酸化的动态变化和低丰度的特点使得对其直接分析有着较大的困难。为了解决磷酸化肽难离子化、检测丰度低的瓶颈问题,本研究制备了一种磁性氮化碳复合材料,结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),建立了一种对复杂样品中低丰度磷酸化肽富集与分析的方法。采用电子显微镜、红外光谱分析及X射线衍射分析等手段对合成的磁性氮化碳材料进行表征。以酪蛋白酶解产物为实验模型,发现磁性氮化碳材料能够实现对磷酸化肽的高选择性富集和高灵敏度检测,检出限为0.1 fmol。选择脱脂牛奶、人唾液和人血清为实际分析样品,发现磁性氮化碳材料对微量蛋白生物样品中磷酸化肽的分析具有较高的应用潜力。

酪氨酸磷酸化多肽的化学选择性富集(英文)

酪氨酸激酶在生物分子的信号转导中起着非常重要的作用,目前除抗体技术外尚无有效的化学方法能够实现酪氨酸磷酸化蛋白质或多肽的选择性富集。然而抗体通常成本较高,而且往往会有模体序列的选择性识别。因此,本文发展了一种基于化学反应的酪氨酸磷酸化肽段的选择性富集方法。该方法利用了β-消除反应只能发生在丝氨酸和苏氨酸磷酸化多肽的特性,通过反相选择实现对酪氨酸磷酸化肽段的选择性富集。以标准多肽对其反应效率和回收率进行了考察,20 min内丝氨酸磷酸化多肽的β-消除反应效率可达99%以上,而同时酪氨酸磷酸化肽段可保持70%的回收率。进一步以6种标准蛋白质混合物的酶解产物对其进行考察,经β-消除反应和亲和富集之后,只有酪氨酸磷酸化多肽可以被检测出来。该方法为蛋白质酪氨酸磷酸化的分析提供了一种新的手段。

色谱指纹谱用于中药大黄抗肿瘤活性成分的筛选

采用液相色谱-质谱联用方法分析了中药大黄经过SD大鼠肝匀浆体外代谢前后的指纹谱中色谱峰面积、保留值的差异。指出5种游离型蒽醌化合物在SD大鼠肝匀浆体外代谢体系中只有大黄酚发生代谢反应转化为芦荟大黄素。考察了体外代谢条件下,肝匀浆浓度与代谢时间对大黄酚转化及其代谢产物的影响。SD大鼠体外抗肿瘤试验表明,大黄代谢物对于人宫颈癌(H eLa)细胞的抑制活性略高于其提取物。通过比较芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的活性,并结合大黄酚的体外代谢反应的考察,解释了大黄代谢物对肿瘤细胞活性的抑制率的提高是由大黄酚的代谢产物芦荟大黄素浓度的增加引起的。

基于质谱技术的贝伐珠单抗及其糖基化修饰的表征、定量与药代动力学分析

利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术以及Shot-gun蛋白质组学策略对贝伐珠单克隆抗体药物及其糖基化修饰进行了全面表征,共发现17种糖型并确定了特征肽段序列。利用液相色谱-串联质谱联用技术,采用平行反应检测模式,通过测定单抗水解后产生的特征肽段,实现了对大鼠血浆样品中单抗药物含量的绝对定量分析,获得不同给药计量下的贝伐珠单抗的药物浓度-时间曲线,同时实现了对单抗糖基化修饰各糖型的相对定量分析。本实验首先建立标准工作曲线,对大鼠血浆样品中的贝伐珠单抗进行定量分析,在线性范围内,相关系数R2=0.998,定量限为66 fmol,线性关系良好。对大鼠血浆样品的测定结果表明,高、低计量给药的贝伐珠单抗药物浓度-时间曲线趋势基本一致,浓度均为直接下降,与理论趋势相符。但是大多数糖型呈现浓度先上升的现象,之后的代谢情况因糖型差异而有所不同。

单克隆抗体药物糖基化修饰分析研究进展

单克隆抗体药物是一类以免疫球蛋白G的结构为基础的大分子糖蛋白药物,为癌症、自身免疫疾病以及病毒感染等多种疾病的治疗提供了全新的途径。单抗药物的糖基化修饰类型及水平对其稳定性、清除率、免疫原性、抗体依赖细胞毒性及补体依赖细胞毒性等都有一定的影响。单抗药物的迅速发展及其在多种疾病治疗中日益凸显的重要性都对单抗药物的研发及用药安全等方面提出了更高的要求。因此,建立规范可靠的单抗药物糖基化修饰分析方法有着十分重要的意义。该综述将简要介绍单克隆抗体药物糖基化修饰及相关的定性、定量分析方法。

酶切型稳定同位素标记肽段为内标用于药物代谢酶的绝对定量分析

利用带有酶切位点的稳定同位素标记肽段作内标,采取3种方式处理样品,考察了不同的样品处理过程对实验结果准确性的影响。首先合成不同长度的带有酶切位点的肽段,考察其酶解过程,实验结果表明,胰蛋白酶的活性位点具有一定的选择性,最终确定目标肽段两端分别加入3个氨基酸所形成的肽段为内标。分别采用在酶解前加入带酶切位点的稳定同位素标记肽段、不带酶切位点的稳定同位素标记肽段以及在酶解过程后、质谱检测前加入不带酶切位点的稳定同位素标记肽段3种方式处理样品。结果表明,采取第一种方式处理样品的测定结果更接近真实值,相对偏差范围更小,可减小蛋白质绝对定量分析的误差,提高分析结果的重现性。

基于蛋白质组学的细胞色素P450和葡萄糖醛酸转移酶亚型绝对定量分析

利用蛋白质组学方法,将大鼠肝微粒体样品进行胰蛋白酶水解;再利用液相色谱-串联质谱法(LCMS/MS),采用多反应监测模式(MRM),通过测定蛋白质水解后产生的特征酶切肽段,实现同时对大鼠肝微粒体内药物代谢酶P450和UGT的绝对定量。本实验首先建立标准工作曲线,对肝微粒体样品中P450和UGT进行定量,在线性范围内,相关系数r>0.995,线性关系良好,定量限≤10 nmol/L;以合成的稳定同位素标记特征肽段作为内标,对UGT1A1进行定量分析。结果表明,同位素标记特征肽段与未标记肽段色谱行为与质谱响应一致,在基质溶液中同位素标记肽段线性关系良好,利用标准曲线法和稳定同位素稀释法测得UGT1A1含量分别为17.30和18.23 nmol/g,两种方法所得结果基本一致,但稳定同位素稀释法操作简便,更适用于复杂样品的高通量测定。

先导控股:打造财务共享中心

用友财务系统在先导控股集团及其下属近50家核算主体统一上线,实现了数据共享和数据创新。长沙先导投资控股集团有限公司(以下简称"先导控股集团")是由长沙市人民政府批准成立,长沙市国资委出资,按照现代企业制度组建的综合性、多功能的大型城市资源综合运营商。

基于蛋白质组学的药物代谢酶与转运体定量分析研究进展

随着药物开发过程的不断完善和研究技术的进步,人们对药物在体内的代谢过程和代谢机制有了更深层次的认识。药物在体内的代谢由药物代谢酶和转运体共同介导,因此,对药物代谢酶和转运体的研究已经成为药物研发过程中的重要内容。传统免疫测定法不能真实反映体内药物代谢酶和转运体的表达水平,且存在灵敏度低、特异性差的缺点。本文主要从蛋白质组学的角度出发,结合近年来生物质谱技术的发展,对药物代谢酶和转运体的定量研究做一综述介绍。

基于蛋白质组学的单克隆抗体药物质谱分析

单克隆抗体药物是一类以免疫球蛋白G的结构为基础的大分子蛋白类药物,为心血管疾病、自身免疫疾病、病毒感染及癌症等多种疾病的治疗提供了全新的途径。单抗药物的迅速发展及其在多种疾病治疗中日益凸显的重要性都对单抗药物的研发及用药安全等方面提出了更高的要求。因此,建立规范可靠的分析方法对单抗药物及其糖基化修饰进行定性、定量分析,并开展单抗药物的药代动力学及药效动力学研究具有十分重要的意义。本综述将简要介绍基于质谱技术的对单克隆抗体药物及其糖基化修饰的定性定量分析。

药物靶标蛋白筛选的化学蛋白质组学研究进展

药物或生物活性物质通过与靶蛋白结合而发挥功能,研究表明,大多数药物具有多个作用靶点,药物靶标的发现有助于药物前体的筛选和作用机制的研究,同时对其耐药性等副作用的解决方案提供理论指导.基于生物质谱技术的蛋白质组学可对蛋白质进行高通量的定性定量分析,为药物靶标的筛选提供了全新的平台.本文综述了基于固载药物和游离药物模式的药物靶标蛋白筛选相关方法和应用研究的最新进展,为基于生物质谱技术的化学蛋白质组学研究提供参考.

人参蛋白质组学研究进展

人参具有很高的药用价值和广泛的药理活性,蛋白质对于人参次级代谢产物的产生和营养价值的体现具有重要意义。运用蛋白质组学的思路和技术可绘制人参的蛋白质表达谱,以评价人参的药用活性与差异蛋白质之间的相关性,同时还可研究人参活性成分的生物合成途径等。通过总结国内外的相关文献,从样品制备、差异蛋白质组分析及功能蛋白质研究等方面对人参蛋白质组学的相关研究进展进行综述,为人参蛋白质组学的系统化研究提供参考。

植物造景与点缀技巧

所谓植物造景,就是利用某些具有观赏价值和经济价值的林木和花卉进行人工合理布局,合理配置,科学利用和人工制造自然景观,使其自然功能和社会功能协调发展的活动。根据城乡人居生活和旅游发展的需要,现就如何进行植物造景与点缀技巧研究如下：

夏秋移竹造林技术研究

俗话说：“正月栽竹，二月栽木”，意指在这个黄金季节内。栽竹或栽树比较适宜，过后就难以成活。所谓夏秋，在我国，每年4-6月为夏天，7-9月为秋天，夏秋移竹实在是不容易，特别是在25℃～34℃酷热的高温季节移竹谈何容易，往往在山上挖取母竹后竹叶伴随着高温几分钟后很快枯萎，如果母竹较大并且带土较少，或泥土散落，或管理不当则更加难以成活，最后导致移植造林失败。但是，只要掌握了一定的相关技术，在成本造价上稍微高一点的话，在夏秋移竹造林还是可以成活的。

新晃县龙脑开发前景看好

龙脑（又名天然冰片、梅片），樟树枝叶提取物，是名贵的中药材和香料，有通诸窍、散郁火、去翳明目、消肿止痛之功效，在国内外临床上广泛应用，其价格居高不下。