1例Krabbe病患儿的临床资料及家系基因变异分析

球形细胞脑白质营养不良(globoid cell leukodystrophy,GLD,OMIM 245200)又称Krabbe病,是一种罕见的溶酶体贮积病,为常染色体隐性遗传病。该病是由于半乳糖脑苷脂酶(galactocerebrosidase,GALC)基因缺陷,导致溶酶体内半乳糖脑苷脂酶活性缺失,引起半乳糖脑苷脂不能降解而蓄积,产生鞘氨醇半乳糖苷毒性,造成中枢及外周神经纤维髓鞘脱失、星形胶质细胞增生及巨噬细胞浸润,从而引起一系列中枢与周围神经系统症状[1]。Krabbe病根据发病年龄分为4种临床类型,其中婴儿型在出生后6个月内发病,90%病例为婴儿型,患儿大多在2岁左右夭折;晚发婴儿型的发病时间在19个月至4岁之间;少年型在4岁至19岁之间发病;成人发病在20岁后。Krabbe病在国内罕见,多为个例报道,欧美国家发病率约为1/100000[2]。现将1例婴儿型Krabbe病患儿的临床表现和家系基因变异分析报告如下。

10313例新生儿听力与耳聋易感基因联合筛查结果分析

目的 对扬州地区10 313例新生儿进行听力与耳聋易感基因联合筛查,探讨该地区常见耳聋基因突变位点分布及联合筛查的意义。方法 对2018年3月至2020年12月在扬州市妇幼保健院出生的10 313例新生儿进行听力与耳聋易感基因联合筛查。听力筛查包括耳声发射和自动听性脑干反应;耳聋易感基因检测采用PCR导流杂交法,检测4个常见耳聋易感基因的13个位点,包括GJB2基因(c.35delG,c.176del16,c.235delC,c.299delAT,c.155delTCTG),SLC26A4基因(c.2168A>G,c.919-2A>G,c.1229C>T),GJB3基因(c.538C>T),线粒体12SrRNA(m.1555A>G,m.1494C>T)和线粒体tRNA(m.7445A>G,m.12201T>C)。应用Sanger测序对单个位点基因筛查阳性的听力损失患儿进行验证。结果 10 313例新生儿中听力初筛通过率为87.26%,复筛为81.61%,检出听力损失者38例。共检出耳聋基因突变577例,携带率为5.59%,GJB2、SLC26A4、GJB3和12SrRNA基因的检出率分别为3.03%、1.89%、0.24%和0.32%。联合筛查发现耳聋易感基因突变组听力损失发生率(2.77%)明显高于阴性组(0.23%)。结论 突变位点GJB2 c.235delC和SLC26A4 c.919-2A>G是扬州地区新生儿耳聋易感基因的主要突变类型。大规模开展听力与耳聋易感基因联合筛查提高了新生儿聋病或高危聋儿的检出率,有利于聋病的防治和干预。

1868例孕妇羊水细胞染色体检测指征及结果分析

目的探讨孕妇孕中期羊水细胞染色体检测指征及核型分析结果在产前诊断中的应用价值。方法收集该院2015-2016年1 868例进行孕中期羊水细胞G显带染色体核型分析检测的孕妇病例资料,对孕妇的产前诊断指征及核型分析结果进行回顾性分析。结果 2016年检测指征前3位由高到低依次为高龄孕妇、母血清学产前筛查高危、超声筛查高危。2015年检测指征前3位由高到低依次为母血清学产前筛查高危、高龄孕妇、无创检查阳性。2016年检测指征以高龄孕妇为主。羊水细胞核型分析结果显示,1 868例孕妇中共检出79例胎儿染色体核型异常,异常率为4.23%。2015、2016年高龄孕妇染色体核型异常率均超过母血清学产前筛查高危孕妇染色体核型异常率,染色体非整倍体为主要的异常核型。结论孕中期羊水细胞染色体检测可降低新生儿出生缺陷率,对产前诊断、优生优育具有重要的意义。

1个X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良家系的TRAPPC2基因突变分析

目的确定1个迟发性脊椎骨骺发育不良(spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDT)家系的致病基因。方法收集先证者及家系的临床资料,提取先证者及亲属外周血DNA,用高通量测序技术对先证者的COL2A1、COL1A1、MATN3、TRAPPC2、FGFR3等189个骨骼相关基因的外显子编码区测序,对发现的致病突变进行Sanger测序验证,并对家系其他成员进行该突变的检测。结果在先证者TRAPPC2基因第5外显子上发现了1个移码突变c.271_275del CAAGA半合子缺失,为X-SEDT的致病性突变,同时发现患者母亲为该突变的携带者,而患者父亲和妹妹未检测到该突变。结论用靶向二代测序和Sanger测序结合的方法确定了1个X-SEDT家系的移码突变c.271_275del CAAGA半合子缺失,为临床遗传咨询提供了分子依据。

产前超声表现与胎儿染色体异常的关系分析

目的探讨产前超声表现与胎儿染色体异常的关系,并根据超声检查结果为合理实施侵袭性产前诊断技术提供依据。方法回顾性分析进行羊水细胞染色体检查的7908例孕妇的产前超声表现,其中292例羊水细胞染色体检查异常,了解其超声征象与染色体疾病类型的关系。结果292例羊水细胞染色体检查异常患者中,同时存在产前超声异常82例(28.08%),其中超声软指标异常59例(20.21%),结构畸形12例(4.11%),合并指征11例(3.77%)。结论超声检查的软指标和结构异常可为羊水染色体检查提供有力证据,提高产前侵入性诊断的准确性,减少和避免漏诊。

一个常染色体隐性多囊肾家系的PKHD1基因变异分析

目的 对一个常染色体隐性多囊肾(ARPKD)家系进行基因变异分析,推断出可能的遗传学病因。方法 收集胎儿及父母的临床资料及样本DNA,应用高通量测序技术对胎儿进行测序分析,筛选候选基因变异位点,以Sanger测序验证变异位点并对父母进行溯源检测。结果 测序结果显示胎儿PKHD1基因存在第4外显子c.279_281+13delinsA(p.Arg94fs)和第58外显子c.9769C>T(p.Gln3257^(*))的复合杂合变异,分别来自父亲和母亲。结论 该ARPKD家系的遗传学病因可能为PKHD1基因的复合杂合变异,新变异的检出扩展了PKHD1基因的变异分布谱系,并为家系的遗传咨询和再生育指导提供了分子依据。

眼皮肤白化病一家系基因突变分析

目的 利用靶向二代测序技术对1个眼皮肤白化病家系进行基因突变分析。方法 收集1个眼皮肤白化病家系的临床资料，提取先证者及其父母外周血DNA。通过高通量测序技术，对先证者TYR、OCA2、TYRP1、SLC45A2等29个基因的外显子编码区进行直接测序，寻找可能存在的基因突变。以Sanger测序技术检测先证者父母的相应基因位点。结果 先证者TYR基因检测到2个杂合突变，分别是c.534G 〉 C（p.Trp178Cys）和c.1147G 〉 A（p.Asp383Asn）。其中c.534G 〉 C突变为新发突变，c.1147G 〉 A突变为已知致病突变。先证者父母TYR基因突变检测结果证实，先证者的c.534G 〉 C突变来自父亲，c.1147G 〉 A突变来自母亲。结论 应用靶向二代测序技术为一个眼皮肤白化病家系确定了TYR基因致病性新突变c.534G 〉 C。

盐城地区4429例孕妇脊髓性肌萎缩症携带者筛查及产前诊断

目的对盐城地区孕妇进行脊髓性肌萎缩症(SMA)携带者筛查,并对携带者夫妇的胎儿行产前诊断,探讨该地区SMA携带者的携带频率及临床意义。方法选取2020年10月至2022年2月盐城市妇幼保健院产前诊断中心就诊的33560例表型正常的孕妇为研究对象。运用荧光定量PCR检测运动神经元存活基因1(SMN1)第7、8外显子(E7、E8)拷贝数,筛出SMA携带者夫妇。然后通过多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对其胎儿进行产前诊断。结果33560例孕妇中4429例自愿接受携带者筛查,接受率约为13.2%。4429例孕妇中共筛查到携带SMN1基因E7单拷贝或E7和E8单拷贝73例,其中67例E7和E8单拷贝,6例单纯E7单拷贝,携带频率1/61。73例携带者经过遗传咨询,60例配偶接受SMA筛查,结果提示2对夫妇同时为SMA携带者,并对2例高风险胎儿行产前诊断,最终提示SMN1基因E7和E8双拷贝胎儿1例(正常),继续妊娠;SMN1基因E7和E8零拷贝胎儿1例(SMA患儿),终止妊娠。结论通过筛查明确了盐城地区人群的SMA突变的携带频率,联合运用MLPA对高危胎儿行产前诊断,可避免SMA患儿出生。

胎儿血清β_2微球蛋白水平与宫内病毒感染的关系

目的评估胎儿血清β2微球蛋白水平与先天性巨细胞病毒感染和风疹病毒感染的关系。方法回顾性分析巨细胞病毒与风疹病毒感染胎儿血清的β2微球蛋白水平,并与病毒IgM阴性的对照组进行比较。β2微球蛋白水平的截断值为5mg/L。结果 15例先天性巨细胞感染的胎儿,有13例血清β2微球蛋白明显升高(敏感性为86.7%);35例对照组的血清中,有32例β2微球蛋白水平低于截断值(特异性为91.4%)。8例风疹病毒感染的胎儿,血清β2微球蛋白均明显升高(敏感性为100%);15例对照组的血清β2微球蛋白水平均低于截断值(特异性为100%)。病例组与对照组比较,均具有显著统计学意义。结论对于先天性巨细胞病毒和风疹病毒感染,胎儿血清β2微球蛋白可作为一种有效的辅助性标志物,对胎儿宫内感染的诊断与评估提供参考指标。

辅助生殖技术对中孕期母血清free β-hCG和AFP浓度的影响

目的评估辅助生殖技术(assisted reproductive technologies,ART)对本地人群中孕期母血清甲型胎儿蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)以及游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位(freeβ-human chorionic gonadotropin,freeβ-h CG)的影响。方法对198例通过辅助生殖技术妊娠的单胎中孕期母血清学筛查数据进行回顾性分析,其中包括体外受精(in vitro fertilization,IVF)108例,卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)31例以及冷冻胚胎移植(frozenembryo transfer,FET)59例。按1:3的比例选择孕周、体重、年龄均匹配的自然受孕且结局正常的单胎孕妇组成对照组,进行比较。以时间分辨荧光免疫法(time resolved fluoroimmunoassay,FRFIA)检测中孕期孕妇血清中AFP和freeβ-h CG的浓度,并对所有妊娠跟踪随访至胎儿出生后。结果 AFP水平在IVF组降低(33.65比38.07,Z=-2.55),ICSI组降低(32.18比42.37,Z=-2.91),FET组升高(46.12比38.84,Z=-3.71),差异均有统计学意义;freeβ-h CG水平在IVF,ICSI组差异无统计学意义(Z=-0.09,Z=-1.30),FET组升高(13.24比11.35,Z=-2.00),差异有统计学意义。结论 IVF、ICSI、FET等辅助生殖技术对孕中期母血清freeβ-h CG和AFP浓度有影响,在风险评估时应进行校正。

扬州市某医院孕中期妇女心理健康现状及影响因素分析

目的分析孕中期妇女的心理健康状况及其影响因素,为开展及时、有效、针对性的孕期心理干预提供依据。方法采用症状自评量表(SCL-90)、孕妇一般情况调查表,对2014年1月至2015年7月到扬州市妇幼保健院心理门诊接受心理健康评估的孕中期妇女进行调查,并进行卫生统计学分析。结果通过对542例孕中期妇女的调查显示,SCL-90焦虑因子得分检出率为14.2%,高于全国常模(7.8%)(P<0.01)。高年龄、低学历、低家庭月收入及非妊娠意愿、夫妻感情差的孕中期妇女更易出现焦虑,差异有统计学意义(P<0.01),与公婆关系差、对居住环境不满意的孕中期妇女焦虑检出率偏高(P<0.05)。结论孕中期妇女的心理健康总体状况良好,焦虑是主要的负性情绪。年龄、文化水平、家庭月收入、妊娠意愿、夫妻情感、与公婆的关系及对居住的满意度是主要影响因素。

一个先天性手足裂畸形家系的遗传学分析

目的对1个先天性手足裂畸形家系进行遗传学分析,以鉴定致病性变异。方法提取先证者及家系中其他患者的基因组DNA,应用染色体微阵列技术对患者进行全基因组拷贝数变异分析。结果染色体微阵列分析显示先证者和另外3例患者存在染色体10q24.31-q24.32区域约400 kb的片段重复变异,该重复区域包含完整的LBX1、BTRC、POLL及DPCD基因,并含有FBXW4基因的部分外显子。结论染色体10q24.31-q24.32区域的重复与该家系患者疾病表型共分离,基因组拷贝数变异为患者的致病原因。

一个迟发性耳聋家系的DFNA5基因变异分析

目的确定1个常染色体显性遗传性迟发性非综合征性耳聋(non-syndromic hearing loss,NSHL)家系的致病变异。方法收集先证者及其家系成员的临床资料,采集其外周血样,提取基因组DNA,应用核心家系全外显子组测序对先证者及其父母19396个基因的编码区及侧翼序列进行测序,寻找可能的致病变异。用Sanger测序法验证候选变异并对家系其他成员进行检测。结果发现先证者DFNA5基因第8内含子存在1个单碱基缺失杂合变异(c.1183+1delG p.?),该变异为父源性。结论应用核心家系全外显子组测序确定了1个迟发性NSHL家系的致病变异,为遗传咨询提供了依据。

靶向捕获高通量测序技术在遗传性疾病分子诊疗中的应用

目的应用靶向捕获高通量测序技术对常见遗传性疾病进行基因突变分析,为患者及家庭提供基因诊断的依据。方法对1例神经纤维瘤家系和1个脊椎骨骺发育不良的家系应用高通量测序技术进行相关基因检测。结果在神经纤维瘤患者中检测到符合临床提示的致病性基因突变,NF1基因第16内含子c. 1845+1_1845+5delGTAAG,脊椎骨骺发育不良的家系中检测到TRAPPC2基因第5外显子c. 271_275delCAAGA半合子致病突变。Sanger测序的验证结果与高通量测序一致。结论靶向捕获高通量测序技术可以在基因组水平对一些遗传性疾病进行分子诊断,评估预后,并为患者及亲属提供遗传咨询,预测再发风险以及提供产前诊断。

扬州地区应用串联质谱技术进行新生儿遗传代谢病筛查的临床价值

目的探讨串联质谱技术在扬州地区新生儿遗传代谢病筛查中的临床意义。方法采用串联质谱技术对扬州地区2017年7月—2019年12月的新生儿进行遗传代谢病筛查,并对筛查结果为可疑阳性的新生儿进行基因检测。结果共纳入新生儿25771例。其中,初筛阳性435例,召回394例,确诊17例。在17例确诊患儿中,氨基酸代谢病10例、有机酸代谢病3例及脂肪酸氧化代谢病4例,死亡3例。结论串联质谱技术在新生儿氨基酸代谢病、有机酸代谢病及脂肪酸氧化代谢病筛查中的广泛应用,对新生儿遗传代谢病的早期筛查、诊断及治疗具有重要意义。

扬州地区1876例孕妇羊水细胞染色体核型分析

目的分析妊娠中期不同产前诊断指征与胎儿染色体异常的关系,探讨羊水细胞染色体在产前诊断中的作用。方法选取2015年1月-2016年12月扬州大学医学院附属医院收治的1 876例具有不同产前诊断指征的孕妇为研究对象,对其进行羊膜腔穿刺术,抽取20 ml羊水进行细胞培养,采用细胞遗传学方法对羊水细胞G显带进行染色体核型分析。结果 1 876例羊水标本中,培养成功1 872例,成功率为99.79%;检出染色体异常核型86例,异常率为4.59%。异常核型中,常染色体异常54例(62.79%),性染色体异常8例(9.30%),其他结构异常24例(27.91%)。结论对具有不同产前诊断指征的孕妇,进行羊膜腔穿刺术和羊水细胞染色体核型分析是产前诊断的重要手段,可以有效地降低缺陷儿的出生,对于优生优育具有重要的意义。

一个无先证者标本的Lesch-Nyhan综合征家系的HPRT1基因变异分析及产前诊断

目的分析一个无先证者标本的Lesch-Nyhan综合征(Lesch-Nyhan syndrome,LNS)家系的HPRT1基因变异为其提供产前诊断。方法该家系中所有的男性患儿均于童年夭折,无法获得任何生物学标本。根据患儿典型的神经系统功能障碍和自残倾向,推断其患有LNS。用Sanger测序对家系中的女性成员进行HPRT1基因变异分析。针对该致病变异位点,对高危胎儿进行产前基因诊断。结果先证者母亲及其他3位女性成员均携带HPRT1基因的c.500_501delGGinsC(p.Arg167fs*23)杂合致病变异,既往未见报道。产前诊断结果显示胎儿为男性,并携带上述致病变异。结论通过Sanger测序确定了一个无先证者标本的LNS家系的HPRT1基因致病变异,为其遗传咨询和产前诊断提供了依据。

扬州地区88829例新生儿先天性肾上腺皮质增生症筛查结果分析

目的分析2013—2017年扬州地区新生儿先天性肾上腺皮质增生症(CAH)的筛查结果。方法采用时间分辨荧光免疫法,对全市88 829例新生儿采足跟血制成干滤纸血片,检测17羟孕酮(17-OHP)。对可疑CAH阳性患儿,召回复查并确诊。结果 88 829例新生儿中,CAH筛查阳性240例,召回238例,4例确诊CAH,发病率为1/22 207。4例确诊CAH的患儿均为失盐型21羟化酶缺乏症,均采用糖皮质激素治疗,随访一切正常。结论干滤纸血片测定17-OHP适用于大规模开展CAH筛查。

羊水细胞染色体多态和结构异常的遗传学分析

目的分析胎儿羊水细胞染色体多态和结构异常的亲代来源,为临床遗传咨询提供科学依据。方法对4123例高危孕妇行羊膜腔穿刺,共4097例羊水细胞培养成功并进行染色体核型分析。对于分析结果为染色体多态或染色体结构异常的病例,召回胎儿父母进行外周血染色体核型分析。结果 4097例羊水共检出染色体多态核型40例,35例召回胎儿父母进行染色体检查,结果显示胎儿的染色体多态均遗传自亲代一方,随访33例婴儿发育正常,2例失访;检出染色体结构异常核型20例,召回20对父母进行染色体检查,发现15例遗传自亲代一方,5例为新发染色体突变。随访15例核型与亲代一方一致的婴儿均发育正常,3例发生染色体新发突变胎儿因胎儿超声或染色体微阵列结果异常而选择引产,另有2例失访。结论羊水细胞染色体核型分析结果为染色体多态性或结构异常时应召回父母做染色体检查以明确亲代来源。胎儿染色体多态及染色体平衡型结构重排源自亲代一方,且父母无异常临床表型时可建议继续妊娠,染色体结构异常为新发突变时应结合其他检查结果谨慎咨询,预防不良妊娠结局。