人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建与表达

目的构建人转录辅助因子CITED2突变型(c.573-578del6)及野生型真核表达质粒并检测两种重组质粒CITED2蛋白的表达情况。方法分别以健康儿童和CITED2基因突变的先天性心脏病患儿血细胞DNA为模板,PCR定向克隆扩增野生型和突变型CITED2编码链,分别T/A克隆至pMD19-T simple质粒上,筛选出野生型和突变型CITED2的T载体重组质粒。应用DNA重组技术将T载体重组质粒上的CITED2基因片段亚克隆入真核表达载体pEGFP-C1,构建pEGFP-C1-wtCITED2和pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒,并分别转染至HEK293细胞,24h后在荧光显微镜下观察质粒转染情况,48h后应用流式细胞仪检测转染效率,Western blotting检测CITED2蛋白的表达。结果成功构建了人野生型pEGFP-C1-wtCITED2和突变型pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒。转染至HEK293细胞后24h,在荧光显微镜下可观察到各转染组EGFP的表达,转染后48h流式细胞仪检测转染效率为50%～60%,Western blotting检测可见CITED2蛋白与EGFP的融合表达。结论成功构建了人转录辅助因子CITED2突变型及野生型真核表达质粒,并检测到CITED2蛋白的表达。

CITED2基因CpG岛甲基化与先天性心脏病的关系

目的研究先天性心脏病患儿CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并探讨其在该病发病中所起的作用。方法收集43例先天性心脏病患儿及2例意外死亡儿童右心耳组织,对CITED2基因进行突变筛查,同时利用生物信息学筛选,分别用亚硫酸氢盐修饰结合测序(BSP)及甲基化特异性PCR(MSP)检测CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并运用实时荧光定量PCR检测CITED2基因mRNA的表达。结果先天性心脏病组启动子区存在4例杂合子突变(均为-341 T>G),此突变对CITED2基因mRNA的表达无影响。其中BSP法成功检测到先天性心脏病组甲基化阳性率为83.3%(10/12),MSP法分析发现甲基化阳性率为84.2%(16/19),同时CITED2基因异常甲基化使其mRNA的表达明显减低(P<0.05)。结论先天性心脏病中存在CITED2基因CpG岛的异常甲基化,此甲基化下调了CITED2基因mRNA的表达。

临床技能培训在儿科住院医师规范化培训中的问题探讨

目的探讨我院临床技能培训中可能存在的问题,旨在优化临床技能培训方案。方法我院于2016年4月—2017年3月采用仿真模型对学员进行临床技能培训及考核,收集64位学员的11项技能考核成绩,依据学员专业、学历及培训项目类别进行分组,对比分析考核成绩是否存在差异。结果 (1)儿内科和儿外科学员各项技能成绩比较显示,不同科室的学院骨髓穿刺术成绩对比,差异具有统计学意义[91.0(86.2,92.8) vs. 87.9(19.6,89.9),(P=0.008)]。(2)硕士和学士学位学员各项技能成绩比较显示,腰椎穿刺术、气管插管术成绩比较,差异具有统计学意义[87.0(81.1,92.8) vs. 84.3(76.9,87.0),(P=0.047);87.4(82.5,90.1) vs. 81.1(76.2,87.0)(,P=0.019)]。(3)不同项目类别成绩比较显示,传染病防护与处理措施成绩最高[96.0(93.3,98.0)],外科项目成绩最低[82.9(76.6,84.7)],且与其他类别成绩比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论实施高效的儿科住院医师规范化培训,需依据学员专业、学历不同及培训项目差异制定个体化临床技能培养计划。

脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S在大鼠骨癌痛维持中的作用

目的 探讨脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S（CatS）在大鼠骨癌痛维持中的作用.方法 雌性未交配SD大鼠50只,4～6周龄,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将其分为5组（n=10）：假手术组（S组）、骨癌痛组（BCP组）、假手术＋CatS抑制剂吗啉亮氨酸高苯丙氨酸乙烯基苯基砜（LHVS）组（S＋L组）、骨癌痛＋二甲基亚砜组（BCP＋D组）和骨癌痛＋LHVS组（BCP＋L组）.左侧胫骨骨髓腔内接种浓度为2×107/ml Walker256细胞5μl制备大鼠骨癌痛模型.分别于造模后10、11、12d时S＋L组和BCP＋L组鞘内注射LHVS 50 nmol/10l,1次/d,BCP＋D组给予等容量二甲基亚砜.分别于造模前1d（基础状态）及造模后3、6、9、10、11、12 d（T0-6）测定机械缩爪反应阈（MWT）,分别于鞘内给药前、鞘内给药后0.5、1.0、3.0、6.0、9.0、12.0、24.0 h时测定（MWT）.处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定OX-42表达.结果 与S组比较,BCP组、BCP＋D组和BCP＋L组T2-6时MWT降低,脊髓背角OX-42表达上调（P＜0.01）,S＋L组MWT和脊髓背角OX-42表达差异无统计学意义（P＞0.05）；与BCP组比较,BCP＋L组T4-6时MWT升高,脊髓背角OX-42表达下调（P＜0.01）,BCP＋D组MWT和脊髓背角0X-42表达差异无统计学意义（P＞0.05）.S＋L组和BCP＋D组鞘内给药后3.0、6.0、9.0h时MWT低于BCP＋D组（P＜0.01）.结论 脊髓背角小胶质细胞CatS激活参与了大鼠骨癌痛的维持.