甲型流感病毒H1N1型灭活病毒标准物质研究

以人工培养真实病毒为原料,研制了一种甲型流感病毒H1N1型灭活病毒标准物质。该标准物质经化学灭活及灭活效果验证后,联合多家实验室采用数字PCR定量检测方法对拷贝数浓度进行定值,对标准物质的均匀性、稳定性及不确定度进行了评估。结果显示该标准物质均匀性良好,在-80~-70℃保存条件下稳定保存5个月,标准物质最终定值结果为(1384.5±249.3)copies/μL(k=2)。该标准物质可为H1N1型甲型流感病毒检测的全过程提供计量溯源和质量控制支撑,有助于提升相关核酸检测结果的准确性和可靠性。

离子交换层析初步分离大鼠肝蛋白水解酶、ADAMs、ACP、AKP和PCNA

用DEAE 离子交换层析法分离 2 /3肝切除 ( partialhepatectomy ,PH)后恢复 4、 3 6和 14 4h的大鼠再生肝及正常肝的蛋白水解酶、ADAMs、ACP、AKP和PCNA ;用SDS PAGE、Western blot、酶复性电泳等方法 ,分析了它们在不同洗脱段中的分布及活性变化 ,为分离与肝再生有关的蛋白 (酶 )提供了资料。

细胞极性的形成

细胞的极性形成对细胞分化、发育及其功能的发挥起着举足轻重的作用。现就线虫受精卵、果蝇卵母细胞和哺乳动物上皮细胞三类细胞极性形成的特点和异同进行阐述,并探讨了近年来三类细胞极性形成的研究进展。

大鼠(Rattusnorvegicus domestica)八种器官的蛋白质图谱分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)技术分析了大鼠脑、心脏、肺、肝脏、胃、肾脏、脾脏和肌肉的蛋白质图谱 ,为以大鼠为材料的实验研究提供了一些基础资料。

负载Her-2多肽的DCIK细胞对乳腺癌细胞杀伤作用研究

本文观察利用树突状细胞(DC)呈递肿瘤抗原(Her-2多肽)的特性提高DCIK细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性。提取外周血来源的有核细胞诱导分离出细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和树突状细胞(DC),DC负载Her-2多肽后和CIK细胞共培养产生DCIK细胞,并鉴定其HLA基因型。分析三株肿瘤细胞(MDA-MB-231、SK-BR-3、MCF-7)HLA基因型和Her-2蛋白表达情况。用细胞毒试验(CCK-8法)测定DCIK细胞的对三株Her2表达不同的乳腺癌细胞株的杀伤活性。结果表明DCIK细胞对MDA-MB-31、SK-BR-3、MCF-7的杀伤率(效靶比10:1)分别为50.38%±3.25%、52.19%±3.25%、47.09%±2.41%。而负载Her-2多肽的DCIK细胞对MDA-MB-231、SK-BR-3、MCF-7的杀伤率分别为76.30%±1.74%(P<0.001)、55.70%±3.05%(P=0.0143)、47.67%±2.40%(P=0.6972)。实验证明负载Her-2多肽的DCIK细胞能显著提高对Her-2(+)的乳腺癌细胞的杀伤作用,为乳腺癌患者进行过继免疫治疗提供了理论依据。

体内外因素对大鼠肝脏加工ADAMs的影响研究

ADAMs是近年发现的一个新的具有多个结构域和多种功能的蛋白质家族。本文多方面比较了大鼠实质肝细胞和非实质肝细胞的ADAMs与再生肝的ADAMs异同。检测多种因子对ADAMs体外加工的影响发现，活性的最适pH为3.5-4的酸性蛋白水解酶在细胞ADAMs降解加工中起关键作用；活性的最适pH为7.5-8.5的偏碱性蛋白酶在基质ADAMs降解加工中起重要作用；外源的胶原酶能高效降解75kDADAMs和140kDMDC15，可见，体内胶原酶样的蛋白水解酶是ADAMs降解加工的重要酶类；Fe^3+和Zn^2+等可在体外活化ADAMs的降解，看来，体内降解加工ADAMs的酶属依赖于Fe^3+或Zn^2+的蛋白水解酶。根据研究结果推测，体内许多不同性能的蛋白水解酶，如丝氨酸蛋白水解酶，半胱氨酸蛋白水解酶，天冬氨酸蛋白水解酶和金属蛋白水解酶等参与ADAMs的降解加工。

小麦三叶期前后过氧化物酶同工酶的动态研究

利用复性电泳技术 ,对小麦品种三叶期前后过氧化物酶 ( POD)酶谱进行分析 ,结果表明 :小麦三叶期前后 POD的分子量均在 35k D以上 (含 35k D) ;三叶期以前叶片中的 POD活性比三叶期以后的弱 ;小麦三叶期前后绿叶中始终含有 30 0 k D、52 k D、4 7k D、39k D、37k D5条活性较强的酶带 ;在不同的生育阶段绿叶中 POD的种类和活性均有显著变化 .

五种黄精属植物的蛋白水解酶谱研究

用蛋白水解酶复性电泳方法 (G- PAGE)分析了 5种黄精属植物根状茎和叶的蛋白水解酶的种类和活性。结果表明 :(1)它们的根状茎均含有 85k D和 55k D的蛋白水解酶 ;叶均含有 82 k D的蛋白水解酶 ;(2 )根状茎和叶的蛋白水解酶种类和活性有很大差异 ,叶的蛋白水解酶活性为根状茎的 10倍 ,它们的活性均受 p H影响 ,其最适 p H为 7;(3)每种植物都含有自己特有蛋白水解酶 ;(4 )

大鼠连续部分肝切除模型的建立及应用研究

分析在肝细胞去分化时期 (部分肝切除后恢复 4 h)和再分化时期 (部分肝切除后恢复 3 6h)依次切除大鼠肝的左叶 (第 1次 )、中叶 (第 2次 )、右叶 (第 3次 )和尾叶 (第 4次 )对大鼠生存的影响 ,并建立了 4种连续部分肝切除模型 ,用这些模型分析了肝再生过程中肝细胞组织结构、细胞核数、有丝分裂指数、核仁大小和数目、磷酸酶、蛋白水解酶、热休克蛋白、增殖细胞核抗原变化发现 ,损伤刺激引发的细胞去分化、增殖和再分化 ,是从激活细胞膜上的碱性磷酸酶 ( AKP)开始的 。

影响SPH大鼠肝蛋白水解酶活性因素分析

用蛋白水解酶复性电泳技术分析了 4 3 6 3 6连续部分肝切除 ( 4 3 6 3 6successivepartialhepatectomy ,4 3 6 3 6SPH)中影响大鼠肝中性蛋白水解酶活性的因素。发现连续部分肝切除 (successivepartialhepatectomy ,SPH)的时间、SPH中营养条件、取材时间、制样条件和样品的后处理均可对大鼠中性蛋白水解酶活性产生不同程度的影响。

不同基因型小麦籽粒生育期蛋白质的动态变化

本文运用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳技术，比较分析了３个小麦品种籽粒生育过程中叶片和籽粒各种蛋白质的动态变化，结果表明，（１）小麦籽粒生育过程中叶片和籽粒中蛋白质的种类和数量有较大变化；（２）叶片和籽粒蛋白质动态变化存在负相关性；（３）叶片中５２和４７ｋＤａ蛋白质起初最多，后期很少，籽粒中６３和５８ｋＤａ蛋白质前期很少，后期最多，变化幅度较大；（４）叶片蛋白质含量最后阶段骤然下降，籽粒蛋白质含量显著上升，这些变化对不同品种有一定差异．

5种黄精属植物的蛋白指纹分析

本文用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）技术分析了５种黄精属植物根状茎和叶的蛋白指纹．结果表明：（１）它们的根状茎均含有３８．５、２８、１８．６ｋＤ蛋白质；（２）根状茎和叶的蛋白质种类有很大差异；（３）５种黄精属植物各含有自己特有的蛋白质，它们在本属植物物种鉴定中一定参考价值．

hASIP基因在乳腺癌中的表达及其意义

目的:检测hASIP基因在人乳腺癌中的表达并分析其与临床病理指标的相关性,进一步探讨hASIP与乳腺癌的关系。方法:以RT-PCR法检测人乳腺癌及癌旁组织中hASIP的表达情况,并与临床及病理常用指标作对照分析。结果:hASIP-a在癌组织中的表达率为92.5%(49/53),在癌旁组织中的表达率为75.5%(40/53),两者之间有统计学差异(P<0.05)。hASIP-b在癌组织中的表达率为54.7%(29/53),在癌旁组织中的表达率为43.4%(23/53),两者之间无统计学差异(P>0.05)。以癌旁组织为参照,hASIP-a在癌组织中表达上调的占64.2%(34/53);hASIP-b在癌组织中表达上调的占32.1%(17/53)。两者之间有显著统计学差异(P<0.01)。hASIP-a高表达与乳腺癌病人年龄>50岁、肿瘤分期早、ER阳性、病理为除浸润性导管癌外的其它浸润性癌相关(P<0.05)。结论:hASIP-a在人乳腺癌中存在高表达。乳腺癌病人年龄>50岁、肿瘤分期早、ER阳性、病理为除浸润性导管癌外的其它浸润性癌,可能是hASIP-a高表达的相关因素。

热休克对大鼠体内肝细胞ACP和AKP活性的影响

观察了热休克反应大鼠其肝细胞酸性磷酸酶（ Ａ Ｃ Ｐ）和碱性磷酸酶（ Ａ Ｋ Ｐ）的活性变化。组织化学方法显示 Ａ Ｃ Ｐ和 Ａ Ｋ Ｐ活性的最适酶—底物作用时间分别为４０ｍ ｉｎ 和２．５ｈ；以不同温度（４２、４４ 和４６℃）处理大鼠 ３０ｍ ｉｎ，室温恢复（２５℃）２４ｈ 时，４２℃处理组的肝细胞 Ａ Ｃ Ｐ和 Ａ Ｋ Ｐ活性最强；４６℃热休克 ３０ｍ ｉｎ 后，室温恢复１～１２０ｈ，在恢复至４８ｈ时， Ａ Ｃ Ｐ和 Ａ Ｋ

用SDS-PAGE分析小麦灌浆期叶片、籽粒蛋白质变化及其与产量关系的初步研究

运用SDS－PAGE电泳枝术，比较分析了三个小麦品种籽粒发育过程中叶片和籽粒各种蛋白质的动态变化及其与产量关系进行研究，结果表明：（1）小麦籽粒发育过程中叶片和籽粒中蛋白质的种类和数量有较大变化；（2）叶片和籽粒蛋白质动态变化存在负相关性；（3）叶片中52和47kDa蛋白质起初最多，后期很少。籽粒中63和58kDa蛋白质前期很少，后期最多，变化幅度较大；（4）叶片蛋白质含量最后阶段骤然下降，籽粒蛋白质含量显著上升，这些变化在不同品种中有一定差异；（5）灌浆末期，叶片衰老时，蛋白质的降解速率与产量正相关。

萝卜贮藏期间蛋白水解酶及磷酸酶同工酶谱研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离在不同贮藏期三个品种的萝卜块根的蛋白水解酶及磷酸酶后 ,用特异染色方法检测酶活性及同工酶谱变化 ,实验结果表明 :在不同贮藏期的同一品种萝卜及同一贮藏期的不同品种萝卜之间蛋白水解酶同工酶谱变化较大 ,最适pH均为 7.0 ;酸性磷酸酶同工酶谱也有较大变化 ,碱性磷酸酶谱缺失。萝卜贮藏期存在活跃的蛋白水解酶及磷酸酶的活动。

热休克蛋白、蛋白水解酶和磷酸酶在大鼠肝再生中的含量和活性变化

本文以2／3肝切除（partialhepatectomy，PH）大鼠为模型，探讨了PH后酸性和碱性磷酸酶（acidandalkalinephosphatases，ACP和AKP）、构成性热休克蛋白70／诱导性热休克蛋白68（HSC70／HSP68）、酸性和中性蛋白水解酶在肝再生期间（0～144h）的动态变化。结果显示，在肝切除后的肝再生期间：（1）ACP和AKP均出现两个活性高峰（4和48h、16和96h），在每个活性高峰之后，ACP和AKP活性均有显著下降；（2）HSC70/HSP68在16和96h时出现两个含量高峰，第二个高峰后的最低点（接近于对照）比第一个高峰后的最低点低许多；（3）在2／3肝切除后2－6h时，诱导出一个90kD的中性蛋白水解酶；36h时，诱导出一个27kD的酸性蛋白水解酶。结果提示，ACP和90kD中性蛋白水解酶可能参与激活G0期肝细胞进入G1期；AKP和HSC70／HSP68可能主要在DNA合成、细胞代谢和增殖方面起作用；27kD酸性蛋白水解酶可能在肝细胞再分化和肝组织重建中有一定作用。

ADAMs的结构和功能

ADAMs是近几年发现的一类锚定于细胞膜的跨膜糖蛋白,含多个结构域并具有多种功能,它们的结构域包括信号肽区、前调控区、金属蛋白水解酶区、解联蛋白区、富半胱氨酸区、上皮生长因子区、跨膜区和胞内区等;它们的功能包括蛋白水解、分子修饰、分子释放、细胞与细胞和细胞与基质相互作用、细胞识别、细胞内信号传导、细胞间通讯等,简要总结了ADAMs一级结构、高级结构、理化性质、结构区组成、各结构区功能以及ADAMs在肝再生过程中的变化等方面的研究进展。

在热休克反应中大白鼠肝脏HSP70表达的免疫组织化学研究

用免疫组织化学方法研究了大白鼠肝脏在４６℃热休克３０ｍｉｎ后恢复期（２．５～７２ｈｒ）内ＨＳＰ７０的表达定位和动态变化及不同温度（４２、４４和４６℃）处理３０ｍｉｎ、恢复１２ｈｒ后ＨＳＰ７０的表达。结果表明：（１）ＨＳＰ７０主要定位于肝细胞的细胞质中；（２）在肝小叶中，阳性细胞多集中于中央静脉周围；（３）４６℃处理３０ｍｉｎ、恢复８～１２ｈｒ，ＨＳＰ７０表达量最多；（４）不同温度热休克处理３０ｍｉｎ、恢复１２ｈｒ表明，４６℃处理组诱导大白鼠肝细胞表达ＨＳＰ７０最多。用体视学方法对实验组的ＨＳＰ７０表达进行了定量组织学分析。