宁波市2003年以来乙型流感病毒监测结果与HA1序列分析

目的:了解近年来宁波市乙型流行性感冒病毒流行和抗原性的变异情况及种系分布.方法:采用狗肾传代细胞(MDCK)培养分离流感病毒,经血清学鉴定后提取病毒RNA,经聚合酶链式反应扩增目的基因后进行乙型流感病毒的HA1区域基因片段的核苷酸序列测定.结果:2003～2005年6月共分离到乙型流感病毒22株,血清学鉴定结果除2株为Victoria系的毒株以外,其余20株均为Yamagata种系.在时间的分布上2003及2004年都有Yamagata和Victoria系的毒株出现.血凝素基因重链区(HA1)基因片段的核苷酸序列测定结果,两个系列的毒株都有一些小的变异,但Yamagata系的毒株变异更明显些.2005年分离到的Yamagata系乙型流感与Shanghai/01/2000株相比已经有7个氨基酸被替代,它们的同源性只有97.6%.结论:宁波市乙型流感病毒大多以散发存在为主,抗原性有一定的漂移.

2005—2006年宁波市流行性感冒病毒的流行与优势株转换分析

目的：分析2005—2006年宁波市流行性感冒病毒的流行与流感病毒优势株的转换情况。方法：常年监测宁波市流感病毒的流行情况，选取不同时间的各种型别流感毒株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定，并推导出其氨基酸序列进行基因进化特性分析。结果：2005年1—9月份宁波市的甲型流感以H3N2亚型为流行优势株，而乙型流感在2005年初以Yamagata系占优势。到2005年9月份以后至2006年底甲型流感的H1N1亚型替代了H3N2亚型占据优势株地位，乙型流感也以Victoria系成了优势株。结论：在2005年流感病毒甲、乙型的流行株均发生了亚型或种系的优势转换。流行株的基因特征及抗原性发生了明显的变异，并造成了一定规模的暴发流行。

宁波市2002～2004年流行性感冒的检测与HA1序列分析

目的:为了解近年来宁波市流行性感冒的流行情况以及病毒抗原性的变异情况.方法:采用MDCK细胞培养和鸡胚培养法分离流感病毒,交叉血凝抑制法进行抗原分析,对甲3型流感病毒的HA1血凝素基因作了核苷酸序列测定.结果:2002年～2004年共分离到流感病毒330株,其中甲3型324株(98.2%)、甲1型1株(0.3%)、乙型5株(1.5%).甲3型毒株2002年与2003年及2004年的抗原比分别为1.9和2.45,核苷酸序列测定结果2002年～2004年HA1区约以5个氨基酸改变的速度变异.结论:3年来宁波市一直以甲3型流感为主要流行株,甲1型及乙型流感则以散发存在.甲3型流感病毒虽说没有发生重大变异,但其抗原性每年都有一定的漂移.

摇床吸附法微量细胞板短期培养快速检测流感病毒

目的:为在流感样疫情的调查中能够快速准确地查清流感病原,提高公共卫生突发性应急事件的快速反应能力。方法:摇床吸附微量细胞板短期培养法的荧光抗体染色用于快速检测流感病毒并与常规的病毒分离方法作比较。结果:对83份流感疑似病人含漱液的快速检测结果与常规的细胞培养法病毒分离结果相比较,在病毒分离阳性的45份标本中,快速检测法也有34份阳性,阳性符合率为75%,敏感性测定达到了能够检测出0 01个血凝单位浓度的流感病毒。结论:微量细胞板荧光染色法检测流感病毒的敏感性要优于一般市售的快速诊断试剂盒。检测时间约在24h内,达到了快速准确的目的。

宁波市甲3型流感的流行与基因演变连续7年监测分析

目的了解甲3型流感病毒的抗原变异与流感流行的关系。方法用狗肾传代细胞（MDCK）分离流感病毒，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）扩增血凝素基因产物，纯化后进行核苷酸序列测定。结果2002-2008年，宁波市流感流行有春季和夏秋季两个季节性高峰，而病毒抗原性突变大多发生在夏秋季这一季节。2002-2005年在血凝素基因HA1片断的变异较快，且第225～228位之间的氨基酸每年都有突变；而2005-2008年间这一区域却相当稳定。结论同一亚型的流感病毒在春季刚流行后紧接着夏秋季再次引起流行这可能与病毒的变异多数发生在每年的下半年有一定联系。甲3型流感2002-2005年的流行强度较2005～2008年强，可能与前者的血凝素基因HA1片断第225-228位每年都发生改变而后者却相当稳定有关。

2005～2006年宁波市甲1亚型流感病毒的病原学及基因特性分析

目的了解2005～2006年宁波市流行的甲型流行性感冒病毒A(H1N1)亚型的病原学分子生物学特性。方法将2005～2006年分离的流感病毒进行血清学分型,挑选H1N1亚型流感病毒的代表株进行血凝素基因(HA1)片断的核苷酸序列测定,分析抗原变异情况。结果H1N1亚型在2005年3月起在宁波市开始活动加强,同年9月起逐渐形成优势成为主要的流行株。病毒核苷酸序列测定结果,2005年3～4月流行的H1N1与9月以后流行的H1N1氨基酸序列有较大的差异,两者为不同性状的毒株。而且后者的氨基酸序列在2006年又进一步发生了变异,与当前疫苗株A/Newcaledonia/20/1999的抗原性差异进一步加大。同源性降至96.3%。结论H1N1亚型流感病毒重新引起流行并成为优势株与其抗原性的变异及人群中针对这一病毒的免疫力下降有关。

一起流行性感冒疫情相关病原学调查

目的 检测流行性感冒疫情相关病原,为呼吸道感染性疾病爆发疫情中病原体的确定提供实验依据。 方法 采用PCR、免疫荧光及混合细胞培养法,对类似肺炎的呼吸道感染爆发疫情中的患者标本进行多种常见呼吸道病原体检测。 结果 8名患者的含漱液中检出6株肺炎支原体及2株甲3型流感病毒;血清IgM抗体检测,3份肺炎支原体IgM抗体阳性、5份甲型流感IgM抗体阳性。 结论 呼吸道感染性疾病,可能由多病原体引起,在进行病原学分析时应尽可能进行分类检测,以求证病原体的检验证据,为疾病诊治提供依据。

恒河猴及褐家鼠中流感抗体的检测

人类流感病毒在动物中自然感染的调查以往一般以禽畜等动物为多,而在与人类较接近的灵长类动物及与人类接触频繁的家鼠中检测则罕有报告。1988年10月,我们采用微量半加敏法对恒河猴及褐家鼠进行了流感病毒血抑抗体检测。被检的恒河猴血清采白天然猴养殖场,褐家鼠血清采自本市居民区捕获的鼠类。

宁波市人感染H7N9禽流感病例流行病学及临床特征分析

目的了解2014年宁波市人感染H7N9禽流感的流行特征和临床特点。方法采用流行病学个案调查与描述性分析方法。结果 2014年宁波市共确诊H7N9禽流感病例15例,死亡4例;病例发病前均有禽类暴露史;103名密切接触者均未感染;大部分病例有慢性基础性疾病。结论老年男性人群为H7N9禽流感发病的主要人群,加强人群及外环境监测是防控H7N9工作的重点。

一起新生儿病毒性腹泻病原学分析

目的查明引起新生儿病毒性腹泻疫情的病原并对其进行分子生物学特征分析。方法采用金标法检测轮状病毒抗原,采用乳胶凝集法检测腺病毒;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测粪便样品中的轮状病毒核酸;利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠道病毒和扩增轮状病毒VP7基因并测序;利用DNAstar和Blast软件对测序结果进行分析。结果11份样品中,金标法检测到轮状病毒阳性样品9份,阳性率为81.82%;腺病毒和肠道病毒检测均为阴性;PAGE法检测到10份轮状病毒阳性样品,电泳带型为4-2-3-2的样品有8份,阳性率为72.73%,另2份阳性样品的电泳条带特殊;8份带型为4-2-3-2的阳性样品均能通过RT-PCR扩增出VP7基因,选择其中3份样品进行测序,测序结果经过比对发现这3个毒株的核苷酸的同源性为99.90%,氨基酸的同源性为100%,与G1型标准株Wa的核苷酸同源性分别为91.30%～91.50%,氨基酸同源性为94.80%;与泰国流行株Thai-2104亲缘关系最近,与中国以前的流行株处于不同的进化分支上。结论引起此次新生儿病毒性腹泻疫情的病原是A组轮状病毒,PAGE带型主要为4-2-3-2,其血清型为G1型。

沪191株麻疹减毒活疫苗初免后16年的血清流行病效果研究

在象山县高塘岛乡,我们连续16年对273名沪191株麻疹减毒活疫苗初免成功者进行了抗体持久性观察。HI抗体阳性率为83.2%,GMT为3.6,表明该疫苗具有良好的免疫原性。1988车观察基地内发生自然麻疹,34名观察对象接触后,有2名HI抗体<1:2者发生显性感染,32名HI抗体为<1:2～1:8者发生隐性感染,初步说明了抗体水平与感染类型的关系。

宁波地区新生儿轮状病毒VP7基因序列分析

目的研究宁波地区新生儿轮状病毒流行株VP7基因的分子生物学特点以及遗传变异规律。方法通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测新生儿病毒性腹泻便样中的轮状病毒核酸;选择特殊电泳带型样品通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增VP7全基因并测序;测序结果利用DNAstar和Blast软件进行比对。结果通过PAGE发现11份样品中有9份阳性样品,其中带型为4-2-3-2的有7份,带型为3-2-2-2和4-2-1-2的各1份。3种带型各选一株进行VP7基因的扩增并测序,测序结果经分析发现,06NB3和06NB9与G1型标准株Wa的核苷酸同源性为84.4%和91.5%,氨基酸同源性分别为87.4%和94.8%,06NB2与G3型标准株YO的核苷酸同源性为95.3%,氨基酸的同源性为96.6%。结论宁波地区在新生儿中有A组轮状病毒流行,其电泳带型以典型的4-2-3-2为主,也可见特殊带型。06NB3和06NB9的VP7基因片段属G1型,06NB2则属于G3型。06NB3与国内外近几年流行的G1型毒株基因序列有较大差异,06NB9和06NB2则差异较小。

一起甲型病毒性肝炎暴发疫情的病原学诊断与基因分析

目的查明引起2004年宁波局部地区甲型病毒性肝炎(甲肝)暴发疫情的病原并分析其基因特征。方法用酶联免疫吸附试验检测血清中的甲肝病毒IgM抗体(HAV IgM)和戊型肝炎病毒IgM抗体(HEV IgM),利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测粪便样品中的HAV核酸(RNA)并扩增VP1基因,测序结果利用DNA star软件进行比对分析。结果172份血清样品中HAV IgM均为阳性,HEV IgM均为阴性。172份粪便样品中共检测到HAV RNA阳性样品74份,占43.0%。选择5份样品进行HAVVP1基因扩增并测序,测序结果经过比对后发现4株宁波株(NB2004-10、NB2004-11、NB2004-51和NB2004-71)的VP1基因是完全一致的;NB2004-75与以上4株的核苷酸的同源性为99.9%,氨基酸的同源性为99.7%;宁波株与HAV各基因型标准株比较,与IA亚型毒株AH2的核苷酸和氨基酸的同源性最高,分别为98.9%和99.7%～100.0%;与中国其他地区流行株比较,核苷酸和氨基酸的同源性波动于89.4%～96.7%和97.0%～100.0%。结论引起这次肝炎暴发疫情的病原是甲肝病毒,其基因型为IA亚型,与日本株AH2、AH3亲缘关系最近,与中国其他地区流行株处于不同的进化簇上。

宁波市2001～2005年健康人群麻疹抗体水平监测分析

目的了解宁波市健康人群中麻疹抗体水平,为制订消除麻疹策略提供科学依据。方法采用微量血球凝集抑制试验对2～4、6～8、13～15和25～39岁4个年龄组健康人群检测麻疹血凝抑制抗体。结果不同年份之间抗体阳性率、抗体保护率及几何平均倒数滴度(GMRT)均存在显著性差异;4个年龄组抗体保护率及几何平均倒数滴度(GMRT)也均存在显著性差异(P<0.05),但抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论及时掌握人群的免疫水平,进一步提高麻疹疫苗的常规接种率和加强大年龄组人群麻疹疫情的监测是消除麻疹关键所在。

宁波市甲1型流感毒株耐烷胺类药物分子流行病学研究

目的：掌握宁波流感监测网分离到的甲1型流感毒株耐烷胺类药物的突变情况，了解其HA1基因片段的变异状况。方法：利用RT-PCR方法扩增M2和HA1基因片段并测序，将结果与GenBank中代表毒株核苷酸进行比较，用计算机软件分析结果。结果：14株甲1型流感毒株中有10株发生了耐药突变，且都发生在第31位氨基酸上；与疫苗株A／New Caledonia／20／99相比，02年宁波毒株HA1基因同源性片段为99．1％，05年同源性为97．1％～98．3％，06年同源性为97．2％～96．3％。结论：宁波甲1型流感毒株已经发生了较高的耐烷胺类药物突变，同时抗原也发生了一定的变异。

宁波市麻疹病毒血凝素基因的序列分析

目的:探讨现阶段在宁波市流行的麻疹野病毒的基因型别和特征。方法:在2004年和2005年医院住院麻疹病人中采集含漱液分离麻疹病毒,获得8株麻疹野病毒。通过RT-PCR方法扩增其中两株麻疹病毒血凝素(H)基因全序列并对其进行序列测定和分析。比较这两株麻疹病毒和Genbank中麻疹病毒的各基因型代表株的同源性。结果:两株宁波麻疹毒株n ingbo04-2和n ingbo05-2的H基因之间核苷酸同源性为97.7%,与H1基因型代表株Ch ina93-7之间核苷酸同源性分别为98.3%,97.7%。与它们在核苷酸水平上同源性最高的毒株分别是zhejiang05-2,ch ina94-7,其同源性分别达到99.7%,99.4%。n ingbo04-2在氨基酸240位由丝氨酸(S)突变成天冬酰胺(N),造成一个潜在的N型糖基化位点丢失。结论:宁波市麻疹流行株属于H1型,至少存在H1 a,H1b两组。