外源性shh蛋白对c-kit^+造血祖细胞增殖分化作用研究

目的探讨sonic hedgehog(Shh)信号对小鼠造血祖细胞的扩增分化调控作用。方法取孕14.5天Balb/C小鼠,分离培养小鼠胎肝基质细胞作饲养层。免疫磁珠法分选小鼠骨髓来源c-kit+造血祖细胞,将分选的造血祖细胞在不同实验组培养条件下培养7d(a.对照组;b.Shh组;c.以胎肝基质细胞为饲养层的Transwell共培养组;d.Shh+Transwell共培养组)。通过绘制细胞生长曲线,免疫表型鉴定及功能分析,观察胎肝基质细胞饲养层以及Shh活性肽对细胞增殖、分化、集落形成的调控作用。结果和对照组相比,胎肝基质细胞可以明显促进造血祖细胞增殖(P<0.05);单纯的外源性Shh蛋白可以同时促进造血祖细胞的增殖和分化(P<0.05);在与胎肝基质细胞共培养体系中,外源性Shh蛋白可以明显地促进细胞增殖,经过体外培养7d后,细胞数达80×105,其中c-kit+细胞占(84±9.44)%,集落形成能力亦明显增强。结论 Shh蛋白参与调控造血祖细胞的增殖与分化,在胎肝基质细胞的支持下,Shh蛋白对小鼠c-kit+造血祖细胞的扩增有明显的促进作用,表明Shh蛋白与胎肝基质细胞存在着某种整合作用,这种作用在一定程度上调控着造血祖细胞的增殖与分化。

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞免疫表型特点分析

目的:探讨流式细胞术(FCM)检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞免疫表型在MDS诊断及预后中的价值。方法:用FCM分析44例初诊MDS患者骨髓细胞免疫表型,分析MDS患者免疫表型的表达及分布情况;建立流式积分系统(FCSS)分析其与WHO分型及国际预后积分系统(IPSS)、WHO分型预后积分系统(WPSS)积分的相关性。结果:MDS患者骨髓细胞免疫表型存在多种异常:①骨髓原始细胞表达成熟抗原CD11b、CD15,及淋巴细胞相关抗原CD2、CD5、CD7、CD19或CD56,原始、幼稚细胞比例增高。②成熟粒细胞CD13/CD16、CD11b/CD16关系模式异常,表达CD56,中性粒细胞颗粒性减低。③单核细胞有CD56和CD34异常表达,单核细胞比例增高等。④红系Gly表达减弱,CD71表达减少,有核红细胞比例增高。⑤MDS患者骨髓细胞FCSS积分与WHO分型、IPSS积分、WPSS积分呈正相关。结论:MDS患者骨髓细胞存在多种免疫表型异常,FCM分析MDS患者骨髓细胞免疫表型异常可以为MDS的诊断和预后提供参考。

柴胡皂苷D介导TGF-β/Smad信号通路对高糖诱导的HK-2细胞纤维化调节作用研究

目的研究柴胡皂苷D对高糖诱导的人肾近曲小管上皮细胞HK-2的纤维化调节作用及其机制。方法将人肾近曲小管上皮细胞HK-2细胞分为对照组、模型组(27.5 mmol·L^(-1)的葡萄糖)、柴胡皂苷D组(27.5 mmol·L^(-1)的葡萄糖+1 mg·L^(-1)的柴胡皂苷D)和阳性对照组(27.5 mmol·L^(-1)的葡萄糖+0.2 g·L^(-1)吡非尼酮)。以免疫荧光的方法检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白(collagen I,ColI)、纤连蛋白(fibronectin,FN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。Western blot检测细胞中转化生长因子-1(transforming growth factor-1,TGF-β1)、Smad2、p-Smad2、Smad3和p-Smad3蛋白表达水平。结果和对照组比较,模型组的ColI、α-SMA、FN,TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平均升高(P<0.05);和模型组比较,柴胡皂苷D组和阳性对照组细胞的ColI、α-SMA、FN、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。结论柴胡皂苷D可缓解高糖诱导的HK-2细胞纤维化变化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。

无症状高尿酸血症患者是否合并腹型肥胖综合降尿酸治疗的疗效比较

目的:探讨无症状高尿酸血症患者是否合并腹型肥胖综合降尿酸治疗疗效的差别。方法:选取2015年6月~2016年6月在武汉市第五医院门诊检查确诊为无症状高尿酸血症的患者200例,排除继发性高尿酸血症,男122例,女78例,年龄19岁~84岁,平均年龄(50.9±12.8)岁。根据是否符合腹型肥胖的定义分为无症状高尿酸血症腹型肥胖组和无症状高尿酸血症非腹型肥胖组,其中无症状高尿酸血症腹型肥胖组125例,男83例,女42例;无症状高尿酸血症非腹型肥胖组75例,男42例,女33例。两组患者均给予饮食和生活方式指导,达到用药标准者给予药物降尿酸治疗,3个月后复查两组患者的血尿酸水平,分别计算两组患者血尿酸的下降水平及尿酸控制的达标率,比较两组无症状高尿酸血症患者综合降尿酸治疗疗效的差别。结果:无症状高尿酸血症腹型肥胖组患者男性明显多于女性,与无症状高尿酸血症非腹型肥胖组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。两组给予综合降尿酸治疗后,无症状高尿酸血症腹型肥胖组血尿酸较基线下降(174.83±98.65)μmol,无症状高尿酸血症非腹型肥胖组血尿酸水平较基线下降(223.56±108.14)μmol,两者相比差异有统计学意义(P<0.05);无症状高尿酸血症腹型肥胖组血尿酸控制达标率为44.80%,而无症状高尿酸血症非腹型肥胖组血尿酸控制达标率为77.33%,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:无症状高尿酸血症合并腹型肥胖患者以男性居多,降尿酸的综合治疗疗效欠佳,控制腹型肥胖有助于综合降尿酸治疗。

吡格列酮对5/6肾切除大鼠肾小球硬化与炎性因子表达的影响

目的探讨吡格列酮对5/6肾切除大鼠肾小球硬化与炎性因子表达的影响。方法以180~200 g雄性SD大鼠行5/6肾切除建立慢性肾衰竭模型,分为假手术组、模型组和吡格列酮治疗组。术后12周处死大鼠,留取血、尿及肾组织标本。检测各组大鼠血清尿素氮、肌酐及24 h尿蛋白定量,并取残余肾组织做病理检查,采用免疫组织化学方法测定PPARγ、ICAM-1和MCP-1的表达与变化情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠血清尿素氮、肌酐及24 h尿蛋白定量均显著升高（均P〈0.01）;免疫组化显示模型组MCP-1和ICAM-1的表达明显升高（均P〈0.01）,PPARγ表达明显下降（P〈0.01）;肾小球系膜区显著增生,肾小球阶段性硬化、近曲小管上皮细胞变性肿胀、间质炎症细胞浸润多见;与模型组相比,吡格列酮治疗组上述生化指标均明显降低（均P〈0.05）,免疫组化显示吡咯列酮组MCP-1和ICAM-1的表达降低（P〈0.05）,PPARγ表达上升（P〈0.05）;肾组织病理损害程度减轻。结论吡格列酮对5/6肾切除大鼠的肾脏有保护作用,其机制可能是通过增强PPARγ表达,下调MCP-1和ICAM-1表达,从而减少细胞增殖、胶原合成和基质堆积等实现的。

野外作业大学生心血管疾病事件危险因素的调查与预防

为做好野外作业学生心血管疾病事件的早期干预,选取中国地质大学(武汉)北京周口店实习基地内学生样本共571例,通过采集入选样本的基本信息,测量其血压、体质量、腰围、臀围、血糖、血脂等,对该群体心血管疾病事件的危险因素进行了调查,并提出了相应的预防措施。结果表明:不少大学生存在健康危险行为,如吸烟、饮酒、运动过少、睡眠不足、饮食不均衡、饮水量不足等现象;少数学生出现肥胖、血压或血糖偏高等问题,大多数学生对高血压、糖尿病的认知度偏低;提倡健康膳食、适宜运动、有针对性的健康教育以及长期的动态观察,将有利于预防野外作业学生心血管疾病事件的发生。

Fabry病1例报道并文献复习

Fabry病又称Anderson-Fabry综合征,1898年皮肤科医生Anderson和Johann Fabry各首先报告1例,故名Anderson-Fabry disease,简称Fabry病,是一种X染色体连锁遗传的α-半乳糖苷酶缺乏性疾病[1]。该病临床罕见,容易漏诊,本文报告1例,并结合文献复习如下。患者男性,40岁,因“体检发现尿异常10年,乏力伴手指末端疼痛1年”入院。患者于10余年前体检发现蛋白尿、血尿,曾在多家医院门诊治疗,

造血发育过程中造血祖细胞生物学特性的时空变化

本实验以小鼠胚胎主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-mesonephros,AGM)区、胎肝(fetalliver,FL)以及小鼠骨髓(bonemarrow,BM)为研究对象,研究各阶段造血祖细胞在发育过程中的c-kit的表达变化和部位迁移,以及不同发育阶段、不同造血部位来源c-kit+细胞的生物学特性。用流式细胞术检测小鼠胚胎10.5天(embryonic10.5,E10.5)、E11.5的AGM区,E12.5、E14.5、E16.5、E18的FL以及BM来源的单个核细胞中c-kit+细胞的比例。用磁珠分选法分离E10.5AGM区、E14.5FL以及BM来源c-kit+细胞,贴壁培养法分离小鼠E14.5FL基质细胞。建立体外Transwell共培养体系,比较不同来源的c-kit+细胞增殖、分化、迁移以及集落形成能力。流式细胞术检测发现:相对于BM,E10.5AGM区和E12.5FL中c-kit+细胞比例较高。进行体外培养,AGM区来源c-kit+细胞具有较强的增殖潜能,而FL、BM来源的c-kit+细胞在体外培养中更容易分化;AGM区和FL来源的c-kit+细胞比BM来源的c-kit+细胞在体外培养中具有更强的趋化迁移能力。集落形成能力方面,AGM区来源c-kit+细胞具有较强形成混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;FL、BM来源c-kit+细胞则能形成更多粒单系集落形成单位(CFU-GM)。以上结果表明,和FL、BM来源的c-kit+细胞相比,AGM区来源c-kit+细胞具有更强的体外增殖、多系分化潜能以及趋化迁移能力,在未来可能有着更广阔的应用前景。

Wnt、Notch信号参与造血微环境调控造血机制的研究

目的探讨造血发育过程中Wnt和Notch信号通路参与造血微环境调控造血的机制。方法磁珠分选法分离小鼠骨髓c—kit^＋造血干／祖细胞（HSPC）。贴壁培养法分离小鼠孕10．5d主动脉-中肾-肾上腺（AGM）区，孕12．5d、14．5d、16．5d胎肝以及骨髓来源的基质细胞。通过Transwell共培养以及流式细胞术计数．比较不同来源基质细胞支持HSPC增殖的能力。通过实时定量PCR和免疫荧光动态检测各发育阶段基质细胞中Wnt、Notch mRNA和蛋白的表达。结果体外培养7d，AGM区和胎肝基质细胞培养体系中c-kit^＋细胞数由0．4×10^5／孔分别扩增为（19．2±3．2）×10^5／孔和（26．8±5．4）×10^5／孔．明显高于骨髓基质细胞培养体系的（9．6±2．9）×10^5／孔（P〈0．05）；其中，AGM区和骨髓基质细胞培养体系中c—kit^＋细胞比例分别为（75．2±7．1）％和（74．1±6．2）％，明显高于胎肝基质细胞培养体系的（63．4±5．3）％（P〈0．05）=Wnt、Notch在各阶段基质细胞均有表达，Wnt在ACM区和胎肝基质细胞表达水平较高，Notch在AGM区及骨髓基质细胞表达水平较高（P〈0．05）、结论造血发育过程中，造血微环境通过Wnt与Notch信号通路协作、交替、整合，精密调控HSPC的发育．