Aβ_(42)及亚单位疫苗诱导小鼠抗体产生及其中和Aβ_(42)的细胞毒性

目的 :探讨Aβ4 2 及其亚单位肽疫苗接种小鼠后特异性抗Aβ4 2抗体的产生情况。方法 :75只 6wk龄雄性BALB/c小鼠 ,随机分为 5组 :即对照组、Aβ4 2 组 ,Aβ3 6 - 42 组、Aβ1- 15 组和FAβ1- 15组。分别用PBS +MF59佐剂 ,Aβ4 2 +MF59,Aβ36～ 4 2 +七聚赖氨酸 (MAP) +MF59,Aβ1- 15 +MAP +MF59,Aβ1- 15 +MAP +福氏佐剂 ,免疫BALB/c小鼠 4次。用间接ELISA法 ,检测各组免疫小鼠血清和脑组织匀浆上清液中特异性抗体的滴度。将Aβ42 、Aβ3 6 - 42 和Aβ1- 15 与培养的PC12细胞共同培养 7d ,用MTT比色法检测 3种抗原肽对PC12细胞的毒性。将各组免疫小鼠的血清加入到含 2 0mg/LAβ4 2 的培养基中 ,再与培养的PC12细胞一起培养 7d ,用MTT比色法测定PC12细胞的存活率。结果 :第 2次免疫后 ,各实验组小鼠的免疫血清均有抗Aβ42 抗体产生 ,且抗体滴度随接种次数的增多而增高。同时 ,在脑组织匀浆上清液中也可检测出低滴度的抗Aβ4 2 抗体。Aβ42 可降低PC12细胞的存活率 ;而不同浓度的Aβ3 6 - 42 和Aβ1- 15 则对PC12细胞的存活率无显著影响。将 4组疫苗免疫血清和 2 0mg/LAβ42 同时加入培养基中培养PC12细胞时 ,可显著提高其存活率。结论 :Aβ42 及其亚单位疫苗 (Aβ1- 15 及Aβ36～ 4 2 )

铝佐剂Aβ_(42)及其亚单位疫苗可有效诱导大鼠产生特异性抗体

[目的]探讨铝佐剂AB42及其C端亚单位肽Aβ36-42疫苗接种大鼠能否产生特异性抗Aβ42抗体。[方法]24只SD大鼠随机分为Aβ42肽疫苗、Aβ36-42肽疫苗和对照组,每组8只。将Aβ42肽疫苗及Aβ36-42与七聚赖氨酸耦联制成的亚单位疫苗分别接种于SD大鼠,对照组用等体积PBS加铝佐剂。用间接ELISA法检测大鼠血清和脑匀浆上清液中特异性抗体的滴度;用Morris水迷宫测试大鼠的行为学变化;用HE染色观察大鼠的脑、肝、脾和肾组织学变化;用接种后血清与老年性痴呆患者的脑片作免疫组织化学染色。[结果]第3次接种后ABβ42和Aβ36-42组鼠的血清均开始有抗Aβ42抗体产生,抗体滴度随接种次数的增多而增高,第6次接种后两组鼠血清的抗ABβ42抗体滴度均达到1:1 600以上,同时脑匀浆上清液也检测到低滴度的抗Aβ42抗体,血和脑匀浆的抗体滴度与对照组相比,差异有显著性(P<0.01);对照组、Aβ42组和Aβ36-42组鼠逃避潜伏期分别为54.81±17.06、43.18±18.70和52.27±15.13,差异均无显著性(P>0.05);对照组、Aβ42组和Aβ36-42组鼠平台象限游泳距离占总游泳距离百分比分别为59.78±5.68、65.14±4.98和61.34±4.19,各组间差异也无显著性(P>0.05);3组鼠的脑、肝、脾和肾均未出现病理性变化;Aβ42组鼠的血清能结合AD患者脑组织中的老年斑,?

糖尿病大鼠神经系统内脑源性神经生长因子的表达与阴茎勃起功能障碍的关系

目的:观察糖尿病(DM)大鼠神经系统内脑源性神经生长因子(BDNF)阳性神经元或神经纤维的表达,探讨BDNF与糖尿病性阴茎勃起功能障碍(ED)的相关性。方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立DM大鼠模型(DM组),分别于造模1、2、3、4个月注射阿扑吗啡(APO)作阴茎勃起功能试验,然后取糖尿病及相应月龄正常大鼠(对照组)的脑、腰骶段脊髓、胸腰段交感干、阴茎和前列腺,用免疫组织化学法和免疫荧光法显示BDNF阳性神经元和神经纤维。图像分析BDNF阳性细胞数及灰度。结果:糖尿病2个月时,DM大鼠阴茎勃起实验中阴茎勃起次数与对照组相比差异有显著性(P<0.05),3个月和4个月差异有极显著性(P<0.01)。糖尿病1个月时,大脑皮质、腰骶段脊髓、胸腰段交感干、阴茎和前列腺BDNF阳性神经细胞及纤维比对照组明显减少(P<0.05),随着病程延长下降更明显(P<0.01)。结论:糖尿病性早期神经系统内出现BDNF减少,BDNF的减少与糖尿病性ED的发病密切相关。

淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的保护作用(英文)

背景:研究表明,淀粉样β蛋白42疫苗接种可以诱导阿尔茨海默病转基因小鼠产生特异性抗淀粉样β蛋白42抗体,清除其脑内的淀粉样β蛋白沉积,改善其学习记忆能力,在对阿尔茨海默病的防治中具有良好的应用前景。目的:研究淀粉样β蛋白42及其亚单位肽疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的影响。设计:以动物为研究对象,完全随机分组实验。单位:一所大学医学院人体解剖学教研室脑研究室。材料:实验于2003-04/2004-02在中山大学实验动物中心和人体解剖学教研室脑研究室进行。5月龄APPSWE转基因小鼠32只,购自美国Taconiccompany,在本室繁育成功。实验随机分成对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组,每组8只。干预:淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗配伍MF59佐剂,基础接种采用皮下注射,加强接种采用鼻黏膜免疫,共接种8个月。疫苗接种前用Y迷宫作行为学测试,接种后用Morris水迷宫作行为学测试。主要观察指标:空间学习记忆能力,平均逃避潜伏期,穿过平台次数,第一象限游泳距离百分率,20%边缘区游泳距离百分率。结果:疫苗接种前对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组APPSWE转基因小鼠Y迷宫作行为学测试10次中正确反应的次数分别为7.50±0.81,7.06±0.

杜仲叶提取物对体外培养的成骨细胞代谢功能调节研究

目的 :研究杜仲叶提取物对体外培养成骨细胞 (OsteoblastOB)代谢功能的调节作用 ,从而进一步明确杜仲补肾、强筋健骨的作用机理以及筛选杜仲叶防治骨质疏松药效成分。方法 :用杜仲叶三个提取部位(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ )不同浓度对体外培养的成骨细胞作用。由新生SD大鼠头盖骨作原代培养 ,用传代的第一代细胞做药效试验。测定指标 :(1)细胞增殖情况 ,用MTT计数法[1、2 ] ;(2 )碱性磷酸酶 (ALP)活性测定 ,对硝基磷酸盐法。结果 :Ⅱ、Ⅲ提取部位对细胞增殖作用与对照组比较P <0 0 0 1,ALP的活性与对照组比较 ,三个部位均为P <0 0 0 1。结论 :表明Ⅱ、Ⅲ提取部位的 10 -5mg

杜仲叶提取物防治骨质疏松症药效成分及作用研究

目的：探讨杜仲叶防治骨质疏松症（OP）的药效成分及作用机理。方法：从杜仲中提取五个极性不同的部位（极性由低到高为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ）；采用体外成骨细胞培养与在体动物的试验方法，测定培养基中碱性磷酸酶（ALP）活性和四唑氮比法色（MTT）法测定细胞增殖情况（A值）；检测在体动物ALP、酸性磷酸酶（TRAP）和骨密度（BMD）的影响。结果：细胞培养实验，Ⅰ、Ⅱ提取部位与空白对照组比较A值及ALP值均为P＜0．05。在体动物实验，Ⅰ、Ⅱ提取部位与手术对照组比较ALP和TRAP值均为P＜0．01；BMD值P＜0．05。其它部位效果不明显。结论：Ⅰ、Ⅱ提取部位明显促进体外培养的成骨细胞增殖和ALP分泌，增加OP动物的骨密度，减少骨破坏，加强骨稳定。

APPSWE转基因鼠的繁育及子代鉴定的研究

目的 :探讨老年性痴呆 (AD)转基因模型鼠 (TgAPPSWE2 576杂合子鼠 ,Tg2 576)的优化繁育方法 ,鉴定APPSWE基因阳性的子代鼠 ,为下一步AD研究奠定基础。方法 :(1)用 3种不同的交配方式观察子代鼠的存活率及APPSWE基因阳性的比率 ;(2 )从子鼠鼠尾中提取基因组DNA ,用PCR方法扩增APPSWE基因片段 ,电泳后观察结果 ;(3 )PCR产物装入pGEM -Teasy载体中 ,测序证实其基因序列。结果 :雄性和雌性Tg2 576互交 ,所产 4窝子鼠 ,2d内全部死亡。雄性Tg2 576和雌性C57BL交配所产子鼠存活率 81% ,APPSWE基因的阳性率为 43 3 %。雌性Tg2 576和雄性C57BL交配存活率 82 4% ,APPSWE基因的阳性率 2 1 9%。经秩和检验两种繁育方式所产子鼠的存活率无显著差异 (P >0 0 5) ,APPSWE基因的阳性率有显著差异 (P <0 0 5)。琼脂糖电泳显示PCR产物分子量为 42 8bp ,与目的基因片段相对分子质量大小一致 ;DNA序列测定证实PCR产物基因序列和APP片段基因序列一致 ,并存在APPSWE(K670N ,M671L)突变。结论 :雄性Tg2 576和雌性C57BL品系小鼠交配是繁育APPSWE基因阳性子鼠的较好方法 ;本实验所用PCR方法能够精确鉴定APPSWE基因阳性子鼠 。

Aβ亚单位疫苗接种Tg2576鼠对脑内淀粉样斑块沉积和行为学的影响

目的探讨Aβ亚单位疫苗接种对Tg2576鼠淀粉样斑块沉积和行为学损害的影响。方法24只Tg2576鼠随机分为Aβ1-15组、Aβ36-42组、Aβ42组和对照组，9月龄时开始分别接种相应的疫苗，间接ELISA法检测血清和脑匀浆上清液特异性抗体的滴度；免疫组织化学染色观察脑内淀粉样斑块沉积；Morris水迷宫测试行为学变化；组织染色观察脑、肝、脾、肺和肾的组织学变化。结果第2次接种后各实验组即明显有抗Aβ42抗体产生，抗体滴度随接种次数的增加而增加。停止接种，抗体滴度下降。脑匀浆上清液中也检测出低滴度的抗Aβ42抗体；疫苗接种6个月后，Aβ42、Aβ1-15和Aβ36-42组鼠皮层和海马淀粉样斑块沉积量与对照组相比均明显减少（P〈0．01），其认知能力显著高于对照组（P〈0．01）。Aβ1-15组和Aβ42组相比差异无显著性（P〉0．05），但优于Aβ36-42组（P〈0．01）；各组鼠的脑、肝、脾、肺和肾均未发现病理变化。结论邯亚单位疫苗接种能有效阻抑Tg2576鼠淀粉样斑块形成和认知功能退化，未发现不良反应。提示用Aβ1-15疫苗替代其全肽疫苗而用于AD免疫治疗，值得进一步研究。

AD转基因模型Tg2576鼠阳性子鼠的病理和认知行为变化

为探讨老年性痴呆(AD)转基因模型Tg2576(hAPPSWE)鼠阳性子一代鼠的病理和行为学变化,确定其是否具有亲代的性状,为AD研究提供理想的动物模型。本研究随机选取我室繁育并鉴定的子一代hAPPSWE基因阳性鼠(hAPPSWE+)和hAPPSWE基因阴性鼠(hAPPSWE-),分别在4、7、9月龄时经Y迷宫及15月龄时经水迷宫检测其行为学变化和脑内病理变化,并对皮质和海马的淀粉样斑块进行定量研究。结果显示:(1)4月龄和7月龄的子一代hAPPSWE+鼠的空间辨别学习记忆能力与hAPPSWE-鼠相比,差异无显著性(P>0.05),但9月龄时两者之间的差异有高度显著性(P<0.01);(2)在4月龄和7月龄的子一代hAPPSWE+鼠的脑组织切片上免疫组化染色未观察到淀粉样斑块,9月龄时均观察到明显的淀粉样斑块沉积,但hAP-PSWE-鼠无论在任何1个月龄均未观察到淀粉样斑块沉积;(3)定量结果显示9月龄的子一代hAPPSWE+鼠的皮层淀粉样斑块占整个皮层面积的0.21%,海马的淀粉样斑块占海马面积的0.14%,而15月龄时其淀粉样斑块的数量和面积增加明显,占整个皮层面积的4.26%,海马的淀粉样斑块占海马面积的2.51%。上述结果表明子一代hAPPSWE+鼠的行为学变化及脑内淀粉样斑块出现的时间、部位、类型与亲代一致。因此,子一代hAPPSWE+鼠和其亲代一样可用于AD研究,本实验的定量结果也为评价AD的干预治疗效果提供了参考数据。

Aβ_(42)及其亚单位疫苗接种正常成年大鼠的行为学观察

【目的】 探讨Aβ42及其亚单位肽疫苗接种正常成年大鼠后对其认知行为的影响?【方法】 采用固相肽合成法和肽疫苗技术制备Aβ42 N端1～15和C端36～42亚单位片段疫苗和Aβ42全肽疫苗? ①Aβ42及C端亚单位肽疫苗接种:32只SPF级成年雄性SD大鼠随机分为MAP36～42组,牛血清白蛋白组(BSA组),Aβ42组和对照组,每组8只?②Aβ42亚单位片段多联疫苗接种:同样条件的SD大鼠随机分为MAP1～15组,多联疫苗组Ⅰ,多联疫苗组Ⅱ和对照组?应用Morris水迷宫检测免疫接种后大鼠的认知行为能力?【结果】 SD大鼠接种Aβ42及其亚单位疫苗后,其平均逃避潜伏期以及平台象限的游泳距离的百分比,与对照组大鼠的比较,差异均无显著性(P >0.05)? 【结论】 Aβ42及其亚单位肽疫苗接种后对正常成年SD大鼠的认知行为无影响?

腺病毒介导神经营养素-3基因转染施万细胞

【目的】构建神经营养素-3(NT-3)基因转染的施万细胞。【方法】NT-3基因重组腺病毒(AdvNT-3)扩增、纯化和测定后,转染体外培养的施万细胞(SCs)。用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测NT-3基因转染SCs的NT-3表达及培养液中NT-3的含量。【结果】实验中获得的AdvNT-3中外源基因序列与大鼠NT-3的DNA序列完全一致,与未基因转染SCs相比,NT-3基因转染SCs的NT-3阳性增强,培养液中NT-3含量增高。【结论】通过腺病毒介导可以获得NT-3过量表达的基因转染SCs。

成骨样细胞体外培养法筛选杜仲叶防治骨质疏松症的药效成份

目的 探讨杜仲叶提取成份对体外培养的成骨样细胞代谢功能的影响,筛选杜仲叶防治骨质疏松的药效成份。方法 从杜仲叶提取分离出4个化合物,以不同浓度(10-4g/L、10-6g/L、10-8g/L)加入体外培养的MG-63成骨细胞株中,并设空白组和对照组。培养4 d后,MTT比色法测定细胞增殖,对硝基磷酸盐法测定培养基中ALP活性。结果 细胞增殖数量与对照组比较,成份I 10-6g/L浓度组、Ⅱ、Ⅲ10-8g/L浓度组和成份Ⅳ10-4g/L、Ⅲ10-8g/L浓度组显著提高(P<0.05);成份Ⅱ、Ⅲ的10-4g/L、10-6g/L浓度组和成份Ⅳ10-6g/L浓度组极显著提高(P<0.01)。ALP活性与对照组比较,成份I 10-6g/L浓度组、成份Ⅱ10-4g/L、10-8g/L浓度组、成份Ⅲ10-8g/L浓度组和成份Ⅳ的10-4g/L、10-8g/L浓度组有显著性增强;成份Ⅱ10-6g/L浓度组和成份Ⅲ的10-4g/L、10-6g/L浓度组均极显著增强(P<0.01)。结论 4个成份均有一定的促进成骨细胞增殖、调节成骨细胞代谢的作用,以Ⅱ和Ⅲ效果明显。

糖尿病大鼠视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的变化

目的:观察糖尿病不同时期视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体各亚基的表达。方法:采用雄性SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别于4、8、12周灌注,取眼球、冷冻切片;免疫组织化学、原位杂交方法检测NMDA受体NR1、NR2A、NR2B亚基表达的变化;用RS IMAGE软件进行图像分析。结果:NR1、NR2A、NR2B基因及其蛋白表达在糖尿病第4周时开始升高,至12周升高具有统计学意义,特别是NR1的变化更为显著。结论:NMDA受体各亚基的高表达参与了糖尿病视网膜病变。

PBL教学法应用于局部解剖学教学的初探

为适应医学模式的转变,医学教育从多方面进行了改革,教学方法的改进也是医学教育的关键,其中PBL教学法受到了极大的重视。相对于传统教学法,PBL教学法对于培养学生的实践能力、自学能力及开创能力具有积极影响。文中阐述了PBL在局部解剖学教学中的应用设想。

人参治疗老年性痴呆的研究进展

人参是传统的滋补中药,它含有多种化学成分,人参皂苷是其主要有效成分。本文综述了近年有关人参防治老年性痴呆的研究进展情况,揭示了人参皂苷Rb1有促智与抗老年性痴呆的作用。

神经外科内镜解剖实训阶梯式教学模式的探索

神经外科手术的基础在于神经解剖知识的融会贯通,以及手术操作技巧的娴熟运用.随着神经内镜技术的使用逐渐成为趋势,在规范化的专科医师培养过程中存在加强该项技术培训的实际需求.为了确保神经内镜手术的顺利实施,要求专科医师在掌握原有神经解剖知识、显微外科技术的基础上,进一步培训内镜的应用解剖和操作技能.因此,如何通过神经内镜手术教学模式的探索,对于培养合格的神经外科专科医师日显重要.医院近年来作为全国神经外科专科培训基地,针对专科医师培训神经内镜技术的培训采用阶梯式教学模式,在教学实践中却得了初步的效果.

不同表位Aβ亚单位疫苗引起免疫反应类型及疫苗安全性评价

为了研究不同表位Aβ亚单位疫苗接种Tg2576鼠引起的免疫反应类型和疫苗的安全性,本研究选用32只5月龄Tg2576小鼠,并随机分成对照组、Aβ42组、Aβ1-15组和Aβ36-42组,5月龄时开始分别接种相应疫苗,接种7个月,间接ELISA法测定血液及脑匀浆上清液中抗Aβ42的抗体滴度。分别取4组小鼠的脾细胞进行培养,用刀豆蛋白(ConA)和各自抗原刺激,ELISA法检测培养液中IFN-γ,IL-2,IL-4和IL-10的含量,免疫组化法检测脑内小胶质细胞的增生情况,组织化学法检测脑、肝、脾、肺、肾组织有无病理性改变。结果显示:(1)与对照组相比,疫苗免疫组血清和脑组织匀浆上清液中抗Aβ42抗体的滴度明显有所增高(P<0.01);(2)脾细胞培养,经ConA或各自抗原刺激后,3组疫苗免疫组细胞增殖显著高于对照组(P<0.01)。培养液中免疫因子检测显示Aβ42组IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10均较高,Aβ1-15组中IL-4和IL-10较高,Aβ36-42组IFN-γ和IL-2较高。免疫组织化学法显示4组小鼠大脑皮质与海马部位均有大量OX-42阳性小胶质细胞,疫苗免疫组OX-42细胞数量更多,但4组之间无显著性差异(P>0.05);(3)HE及组织特异性染色显示在疫苗接种组鼠的重要器官未见病理性改变。上述结果表明,Aβ42疫苗可引起Th2和Th1免疫反应,Aβ1-15亚单位主要引起Th2免疫反应,Aβ36-42疫苗主要引起Th1免疫反应。3种疫苗均可进一步激活脑内小胶质细胞,增强其Aβ清除能力,未发现疫苗接种引起的毒副作用。因此,本实验结果提示Aβ1-15亚单位疫苗更符合AD免疫治疗的要求。

糖尿病大鼠视网膜突触后致密物蛋白质95的蛋白表达及突触超微结构的改变

目的观察糖尿病不同时期视网膜突触后致密物蛋白质95(PSD95)的蛋白表达水平以及视网膜突触超微结构的变化。方法雄性3月龄SD大鼠56只,随机分为模型组和对照组,分别腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)和0.1mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液,于4、8、12周取眼球,入4%多聚甲醛后固定2h,冷冻切片厚20μm,采用免疫组织化学检测PSD95蛋白表达的变化,显微镜观察视网膜全层并摄片,图像分析;透射电镜观察视网膜突触并摄片。结果 PSD95蛋白表达在糖尿病第8周时开始升高,至12周时升高具有显著意义;视网膜内丛状层的突触结构中的突触间隙增大,突触后致密物厚度变薄,突触活性区长度变长。结论 PSD95的蛋白表达水平以及视网膜突触超微结构的改变可能与糖尿病视网膜病变的发展有关。

Aβ_(1-15)肽疫苗接种改善AD转基因模型Tg2576鼠的学习记忆能力

目的探讨Aβ1-15亚单位疫苗接种对AD转基因模型鼠学习记忆能力的影响。方法将24只AD转基因模型鼠(Tg2576鼠)随机分为Aβ1-15组、Aβ42组和对照组,每组8只。9月龄开始分别皮下接种相应的疫苗,每只鼠共6次(抗原量0.1mg/次),接种时程6个月;对照组皮下注射等量PBS加佐剂。疫苗接种前用Y-迷宫作行为学测试,接种后用Morris水迷宫测作行为学测试。结果疫苗接种前,各组Tg2576鼠的空间学习记忆能力无显著性差异(P>0.05);疫苗接种6个月后,Aβ1-15组,Aβ42组鼠的空间学习记忆能力明显高于对照组鼠(P<0.01);Aβ1-15组鼠与Aβ42组鼠相比差异无显著性(P>0.05)。结论Aβ1-15亚单位疫苗接种和其全肽疫苗一样可以改善Tg2576鼠的学习记忆能力,因而可以替代其全肽疫苗用于AD免疫治疗的进一步研究。