红细胞补体受体1分子水平及其基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联研究

目的我国系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发病率居世界首位,治疗属世界难题。SLE的发病机制尚不明确,许多研究表明,SLE患者红细胞补体受体1(complement receptor type 1,CR1)分子水平及功能低下,但未见研究对CR1基因与SLE遗传易感性的关联进行报道。文中旨在探讨红细胞CR1分子水平及其基因单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphisms,SNP)与SLE的关联。方法检测SLE患者(SLE组)及健康人(对照组)红细胞CR1分子水平及5个标签SNP位点基因型,比较对照组CR1基因各SNP位点基因型对应CR1分子水平的差异,以及SLE组和对照组组间红细胞CR1分子水平和CR1基因各SNP位点基因型、等位基因的分布差异,计算比值比(OR)及其95%CI。结果对照组CR1基因rs3818361C>T/TT基因型携带者红细胞CR1水平低于CC、CT基因型者(P<0.05),rs11118167T>C/TC、CC基因型携带者红细胞CR1水平低于TT基因型者(P<0.01),rs9429945C>T/CT、TT基因型携带者红细胞CR1水平低于CC基因型者(P<0.01)。SLE组CR1几何平均荧光强度比值(geometric mean fluorescence intensity ratio,GMFIR)低于对照组(P<0.01);有3个标签SNP位点与SLE发病关联(P<0.01或P<0.05),与非携带者比较,CR1-rs4844600G>A/GG基因型(OR:8.672,95%CI:3.864～19.462)及G等位基因(OR:7.419,95%CI:3.425～16.073)、CR1-rs3818361C>T/CC基因型(OR:1.872,95%CI:1.113～3.149)及C等位基因(OR:1.575,95%CI:1.067～2.325)、CR1-rs11118167T>C/TT基因型(OR:2.083,95%CI:1.065～4.071)及T等位基因(OR:1.941,95%CI:1.050～3.588)携带者患SLE风险增加。结论健康人CR1基因rs3818361C>T/TT基因型、rs11118167T>C/TC、CC基因型和rs9429945C>T/CT、TT基因型携带者红细胞CR1水平低于该SNP位点其他基因型携带者。SLE患者红细胞CR1分子水平降低,CR1基因rs4844600G>A、rs3818361C>T、rs11118167T>C等3个SNP位点与SLE发病关联,其易感基因型CR1-rs4844600G>A/GG、CR1-rs3818361C>T/CC和CR1-rs11118167T>C/TT与SLE患者CR1分子水平低无关。

人肽抗生素hPABβ重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 构建人肽抗生素hPAB β重组质粒 ,并在大肠杆菌中进行表达 ,为大量制备hPAB β奠定基础。方法 通过PCR将hPAB β融合蛋白的CNBr裂解位点改为羟胺裂解 ,将修改的目标片段克隆到pFAST HTa质粒中 ,挑取阳性重组子 ,酶切出目标片段再亚克隆到pQE32 CP中 ,含阳性重组子的工程菌用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE电泳分析 ,进一步以亲和层析纯化融合蛋白 ,用羟胺裂解分析。结果 构建的pFAST hPAB β重组质粒经酶切可得到约 2 30bp的片段 ,与预期大小相符 ,测序结果表明其序列正确 ;构建的pQE32 CP hPAB β重组表达质粒酶切亦可切出 2 30bp的片段 ,测序结果表明序列和阅读框均正确 ;重组表达质粒在大肠杆菌中能表达出Mr约2 7× 10 3 大小的蛋白 ,表达量约占细菌总蛋白的 4 3% ,该融合蛋白以包涵体形式存在 ,通过亲和层析可获得该蛋白 ,纯度为 80 4 % ,该融合蛋白经羟胺裂解 1h即可得到与合成肽大小相符的小肽。结论 本研究成功构建了含hPAB β重组质粒的工程菌 ,为进一步研究和大量制备hPAB β创造了前提。

水面舰艇舰员长航后疲劳状况及其影响因素

目的调查并分析水面舰艇舰员长航后疲劳状况及其影响因素。方法于长航结束后采用《疲劳自觉症状调查表》对舰员疲劳状况及相关因素进行调查,对结果进行统计学分析。结果调查显示,舰员长航后身体、精神和神经感觉3个因子中单个症状发生率分别为14.9%～54.1%、13.8%～50.8%和5.0%～21.5%,3个因子内症状的总发生率分别为80.1%、68.5%和48.6%;"经常或总是如此"的单个症状发生率分别为0～4.4%、0～3.9%和0～1.1%,相应的3个因子内症状的总发生率分别为10.5%、8.3%和3.3%。各种疲劳自觉症状总发生率为85.6%,"经常或总是如此"的症状总发生率为12.7%。舰员的学历水平、战位、年龄、舰龄、身体质量指数(BM I)、吸烟量和饮酒量等特征参数均分别与疲劳评分呈显著正相关(r=0.150～0.316,P<0.05)。单因变量多因素一般线性模型分析表明,影响疲劳评分的主要因素依次为学历水平(P<0.01),战位、饮酒量、BM I和舰龄(均P<0.05)。结论舰员长航后疲劳自觉症状总体程度较轻,但发生率极高,学历水平、战位、饮酒量、BM I和舰龄是影响疲劳评分的主要因素,疲劳评分随着学历水平、饮酒量、BM I和舰龄的升高,以及战位负荷的加重而升高。

直标法流式细胞术测定人红细胞表面CD35水平的方法学研究

为研究直标法流式细胞术测定红细胞表面CD35免疫分子水平的方法,抽取健康献血员静脉血,采用直标法流式细胞术测定红细胞CD35水平,研究测试后数据分析方法的可靠性和测试前抗凝剂、标本放置时间和抗体用量等因素对测定结果的影响。结果显示:M1界值选择对CD35阳性红细胞(CD35+-E)百分率计算结果有很大影响,CD35几何平均荧光强度(CD35-GMFI)随FL2通道电压升高而增加,而CD35相对几何平均荧光强度(CD35-rGMFI)不受电压影响;EDTA-2K、肝素锂、枸橼酸钠三种抗凝剂以及标本放置72h内CD35+-E百分率和CD35-rGMFI结果均无明显差异(P>0.05);取5×105个人红细胞反应时,最适合的鼠抗人CD35单克隆抗体量为7μL。可见,CD35-rGMFI是描述红细胞表面CD35水平的最理想指标,抗凝剂、标本放置时间对测定结果无明显影响,当红细胞数量为5×105时,最佳抗体用量为7μL。

红细胞补体受体1单核苷酸多态性与肝细胞癌发病风险的研究

目的探讨红细胞补体受体1（CR1）单核苷酸多态性（SNP）与肝细胞癌（HCC）发病的关系。方法收集102例HCC患者（HCC组）和98例健康体检者（对照组）的外周血样本,选取CR1的5个标签SNP位点（rs4844600 G〉A、rs17048010 T〉C、rs3818361 C〉T、rs11118167 T〉C和rs9429945 C〉T）进行检测,分析两组的红细胞CR1基因各SNP位点基因型、等位基因及单体型的分布差异及其与HCC患病风险的关系。同时按照性别、年龄相匹配的原则分别从对照组和HCC组中选取52例和53例样本采用流式细胞术检测其红细胞CR1的几何平均荧光强度比值（GMFIR）。结果两组rs4844600 G〉A基因型和等位基因分布的差异有统计学意义（P〈0.01）。CR1基因rs4844600 G〉A/GG基因型携带者患HCC的风险为非携带者的2.458倍（95%CI：1.357～4.451）,GA基因型携带者患病风险是非携带者的0.404倍（95%CI：0.218～0.746）,其等位基因G携带者患病风险为非携带者的1.945倍（95%CI：1.183～3.199）。rs17048010 T〉C、rs3818361 C〉T、rs11118167 T〉C、rs9429945 C〉T这4个SNP位点和rs11118167-rs3818361-rs17048010/TCT、TTC、CCT、TTT这4种单体型与HCC的患病风险无关（P〉0.05）。HCC组CR1的GMFIR水平为3.257±1.191,高于HCC组的2.652±0.789,差异有统计学意义（t=2.644,P=0.008）。结论 HCC患者红细胞免疫功能降低,CR1基因SNP位点rs4844600 G〉A与HCC发病关联。

基因工程技术在肽抗生素制备中的应用进展

肽抗生素是由生物体基因编码的肽类物质 ,广泛存在于自然界中 ,是生物体非特异性免疫的重要组成部分 ,具有抗菌活性强、抗菌谱广、不易产生耐药性等优点。在未来抗感染治疗中有广阔的应用前景。肽抗生素的制备是制约其开发应用的关键环节。作者对肽抗生素工程制备的有关进展进行综述 ,包括酵母、杆状病毒、大肠杆菌等表达技术在肽抗生素制备中的应用 ,以及转基因动。

红细胞免疫及其临床应用研究进展

红细胞免疫学是一门新兴学科,自美国学者Siegel1981年提出"红细胞免疫系统"概念以后的二十多年间得到了长足发展,相继发现了红细胞的多种免疫物质和免疫功能。该文综述了红细胞免疫物质、免疫功能及其临床应用研究进展,分析了红细胞免疫研究的现状和前景。

血清胱蛋白酶抑制剂C对评价狼疮性肾炎患者肾小球病理损害程度的价值

目的:探讨狼疮性肾炎患者血清胱蛋白酶抑制剂C(cystatin C)在评价肾小球病理损害程度中的价值。方法:选择狼疮性肾炎患者93例,入院后测定血清cystatin C,并行肾穿刺活检,对肾小球病理进行评分。分析cystatin C与肾小球病理评分的相关性,比较不同病理分级间cystatin C水平的差异。结果:血清cystatin C与狼疮性肾炎患者肾小球病理评分(r=0.7538,P=0.000)呈正相关,相关性具有统计学意义,肾小球病理1～3级间cystatin C水平的差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论:血清cystatin C水平可以客观地评估狼疮性肾炎患者肾小球病理损害程度,是检测肾小球病理及功能改变的理想血清标志物。

体外循环手术对红细胞CD35、CD59及T淋巴细胞免疫的影响

目的探讨体外循环(extracorporeal circulation,ECC)手术对红细胞CD35、CD59及T淋巴细胞免疫功能的影响。方法选择ECC手术病例18例,于转机前、体温最低点、转机末和术后1 d、3 d、7 d晨采集患者静脉血,测定红细胞CD35、CD59,以及T淋巴细胞CD3、CD4和CD8。结果ECC前至ECC末,CD35+红细胞(CD35+-E)百分率、CD59几何平均荧光强度比值(CD59-GMFIR)和CD35-GMFIR均逐渐降低,前二者在术后1 d至7 d逐渐回升,而CD35-GMFIR未见明显恢复趋势。ECC末、术后1 d时CD35+-E百分率和CD35-GMFIR,以及体温最低点、ECC末和术后1 d时CD59-GMFIR均显著低于ECC前(P<0.01或P<0.05)。至术后7 d时,CD35+-E百分率、CD35-GMFIR和CD59-GMFIR仍未恢复至ECC前水平。从ECC前至术后7 d,CD3+T淋巴细胞(CD3+-T)百分率、CD3+CD4+-T百分率和CD4+-T/CD8+-T比值均呈现先降低后升高的趋势,体温最低点、ECC末、术后1 d和术后3 d的CD3+-T百分率、CD3+CD4+-T百分率均显著低于ECC前(P<0.01或P<0.05),至术后7 d恢复至接近于ECC前水平,而CD4+-T/CD8+-T比值则恢复至超过ECC前水平。结论ECC手术使红细胞CD35、CD59及T淋巴细胞免疫功能下降,后者于术后7 d恢复,前者恢复期长于后者。

4℃条件保存对人悬浮红细胞免疫功能的影响

目的探讨4℃保存对人悬浮红细胞免疫功能的影响。方法采集健康献血者静脉血,制备悬浮红细胞,分别于保存前及4℃条件下保存1、2、3、4、5、7和9周时取样2 ml,采用直标法流式细胞术检测红细胞补体受体1(CR1)、白细胞分化抗原59(CD59)分子水平。结果红细胞CR1-GMFIR随4℃保存时间延长有逐渐增加的趋势,至4周时达最高值,之后逐渐下降,组间差异无统计学意义(P>0.05),与4℃条件保存前相比,除4周时CR1-GMFIR明显升高外,其他时间点的差异无统计学意义;而红细胞CD59-GMFIR呈逐渐下降趋势,组间差异有统计学意义(P<0.01),3~9周时CD59-GMFIR均明显低于4℃条件保存前。结论 4℃条件保存悬浮红细胞损害红细胞免疫功能,对红细胞CR1-GMFIR影响小,对CD59-GM-FIR影响大;保存5周内二指标受影响较小,保存2~3周时受影响最小。

浅低温体外循环手术前后基因表达研究中内参基因的选择

目的筛选浅低温体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)手术前后基因表达变化研究的内参基因。方法通过阅读文献选择基因表达研究中常用的11个管家基因(housekeeping genes,HKGs),采用Beacon Designer软件设计PCR引物;收集4例浅低温CPB辅助手术患者CPB前、体温最低点、CPB末以及术后1d、3d、7d的静脉血24份,提取总RNA,采用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR法检测各样品中11个HKGs的循环阈值;对所得循环阈值进行转换,采用geNorm程序对候选基因的表达稳定性和所需内参基因数量进行分析。结果11个HKGs稳定性排序为:UBC<RPLP0<PGK1<18S-rRNA<PPIA<GAPDH<ACTB<TBP<B2M<EEF1A1/HPRT1;该研究需要的最佳内参基因数量为3个,即EEF1A1、HPRT1和B2M。结论确定了浅低温CPB手术前后11个HKGs中表达稳定性高的EEF1A1、HPRT1和B2M等3个基因为该条件下基因表达研究的内参基因。

抗心磷脂抗体与肾综合征出血热患者肾功能及免疫功能的关系

目的:探讨抗心磷脂抗体(ACA)与肾综合征出血热(HFRS)患者肾功能及免疫功能的关系。方法:采用酶联免疫吸附法测定78例HFRS患者和50例健康人ACA-IgM、ACA-IgG,计算阳性率,比较组间阳性率的差异,同时测定HFRS患者24h尿蛋白量、血清尿素氮、血清肌酐、C3、血红蛋白和血小板等指标,比较ACA阳性患者和阴性患者上述指标差异。结果:对照组ACA-IgM、ACA-IgG阳性率均为0(0/50),78例HFRS患者ACA-IgM阳性率74.36%(58/78)、ACA-IgG阳性率20.51%(16/78)和ACA总阳性率79.49%(62/78)均显著高于对照组(0/50)(均P<0.01)。ACA阳性的HFRS患者(62例)较ACA阴性患者(16例)血红蛋白(P<0.05)、血小板(P<0.05)和C3(P<0.01)明显减少,血清尿素氮(P<0.05)、血清肌酐(P<0.05)和24h尿蛋白量(P<0.01)明显增加。结论:ACA是HFRS患者常见的抗体(62/78),参与HFRS的免疫发病,ACA阳性的HFRS患者较ACA阴性患者存在更为严重的免疫功能紊乱和肾功能损害。

重组人肽抗生素hPAB-β的初步纯化

目的 探索重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,为制备高纯度、高活性的重组hPAB β奠定基础。方法 将构建的含pQE32 CP hPAB β重组质粒的基因工程菌扩大培养 ,诱导表达后所得菌体经溶菌酶法裂解 ,鉴定融合蛋白表达形式 ;以含融合蛋白的溶液作为纯化的初始样品 ,采用Ni NTAresin亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,用CNBr裂解 ,利用SephadexG 5 0、Bio gelP6DG凝胶进行分子筛层析 ,利用Macro PrepHighS进行阳离子交换层析 ,对层析峰行Tris Tricine电泳分析。结果 融合蛋白以包涵体形式存在 ;亲和层析获得了纯度为 82 .6 %的融合蛋白 ,CNBr作用 2 0h可完成融合蛋白的裂解 ;目的肽经纯化后 ,纯度达 95 %以上。结论 已初步建立了重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,并获得了高纯度的肽抗生素hPAB β。

人肽抗生素hPAB-β多拷贝串联基因工程菌的筛选及发酵研究

目的 :对已构建的人肽抗生素hPAB β 1～ 8拷贝串联基因工程菌进行筛选 ,并对其优势菌株进行发酵研究 ,为hPAB β的规模生产奠定基础。 方法 :对 1～ 8拷贝串联基因工程菌的目标蛋白表达率进行比较后 ,选择 2～ 5拷贝菌进行菌产量、目标蛋白表达率、包涵体溶解性、亲和层析效果比较 ,确定最佳多拷贝菌 ;对其摇瓶条件下发酵的培养液、温度、气体条件、IPTG诱导时机、浓度及时间进行研究。 结果 :在相同条件下 ,3拷贝菌产量(3.15 3g/L)最高 ,目标蛋白表达率 (2 7.8% )接近最高水平 ,包涵体能溶解完全 ;利用亲和层析能成功捕获融合蛋白 ,后者经羟胺裂解 ,可获得相对分子质量与合成hPAB β成熟肽大小相符的小肽 ,筛选出的优势菌传代稳定 ,其最佳摇瓶发酵条件为 37℃ ,16 0r/min条件下 ,在改良M 9 CAA培养液中培养至吸光值 (A60 0 )≈ 2 .5时 ,以终浓度为10 0 μmol/L的IPTG诱导表达 5h。 结论 :确定了 3拷贝菌为最佳多拷贝菌 ,并确定了其最佳摇瓶发酵参数。

健康人补体受体1基因单核苷酸多态性位点与其红细胞表面分子水平的相关性

目的探讨健康人补体受体1(complement receptor type 1,CR1)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点与红细胞表面CR1分子水平的相关性。方法采用多重PCR-荧光标记单碱基延伸-标签微阵列杂交基因分型技术,检测215例受试者CR1基因5个标签SNP,并采用流式细胞术测定其中81例样本红细胞CR1分子水平。采用Arlequin3.11软件对各SNP位点基因型频率进行哈温平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE)检验,采用SPSS 13.0软件对健康人CR1基因SNP位点基因型及等位基因分布的性别差异、不同基因型人群红细胞CR1分子水平差异和影响红细胞CR1分子水平的单因素和多因素进行统计学分析。结果健康人CR1基因SNP位点基因型及等位基因分布性别间的差异无统计学意义(P>0.05);健康人红细胞CR1几何平均荧光强度比值(the geometric mean fluorescence intensity ratio of CR1,CR1-GMFIR)为3.36±1.26。rs11118167T>C和rs9429945C>T位点各基因型组对应的红细胞CR1分子水平总体比较,差异具有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05),两两比较时,rs11118167T>C位点TC、CC基因型携带者低于TT基因型者,rs9429945C>T位点CT、TT基因型携带者低于CC基因型者(P值均<0.01)。在年龄、性别、5个标签SNP位点各基因型中,CR1-GMFIR与rs4844600G>A(GG/GA/AA)、rs9429945C>T(CC/CT/TT)、rs11118167T>C(TT/TC/CC)均呈负相关(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.01),影响CR1-GMFIR的最主要因素为rs11118167T>C(P<0.01),其次为rs9429945C>T(P<0.01)。结论 rs11118167T>C和rs9429945C>T是红细胞CR1分子水平的主要影响因素。

不同因素对舰艇官兵细胞免疫功能的影响

目的通过分析年龄、作业环境、电磁波辐射程度、噪声程度、应激紧张程度等因素对舰艇官兵细胞免疫功能的影响,明确导致舰艇官兵细胞免疫功能改变的具体因素。方法用流式细胞仪对247名舰艇官兵进行T、B、NK淋巴细胞亚群包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4/CD8、CD3-CD19+和CD3-CD56+等6项免疫指标的检测,并按上述因素分组,进行统计学相关分析。结果不同年龄的舰艇官兵其细胞免疫功能无显著性差异(P>0.05);不同作业环境对机体CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+淋巴细胞均有一定影响;按电磁辐射程度分组,A组CD3+T淋巴细胞计数显著高于C组(P<0.05);其余各组免疫学指标则无统计学差异。按噪声程度分组,B、C两组CD3+T淋巴细胞低于A组(P<0.05);C组CD3+CD8+T淋巴细胞低于A组(P<0.05);B、C两组分别与A组比较,CD3-CD19+B淋巴细胞计数均显著增加(P<0.01)。按应激紧张程度进行分组,结果显示,与C组比较,B组CD3+T淋巴细胞和CD3-CD19+B淋巴细胞均增加(P<0.05)。结论年龄对舰艇官兵的细胞免疫功能无影响,作业环境、电磁辐射、噪声和应激紧张等因素对舰艇官兵的细胞免疫功能均有影响。

远航对舰艇官兵细胞免疫功能和营养状况的影响

目的探讨远航对舰艇官兵免疫功能和营养状况的影响。方法用流式细胞仪和日立模块式7600全自动血生化分析仪对173名舰艇官兵远航前后T、B、NK淋巴细胞亚群(包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+和CD3-CD56+等6项免疫指标)和血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(Glu)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白A2(ApoA2)、载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白C2(ApoC2)、载脂蛋白C3(ApoC3)、载脂蛋白E(ApoE)、脂蛋白a[LP(a)]及血清铁(Fe2+)、总铁结合力(TIBC)、血红蛋白(Hb)、钾(K+)、钠(Na+)、氯(Cl-)、钙(Ca2+)、镁(Mg2+)等指标进行了检测。结果与航前比较,舰艇官兵CD3+淋巴细胞、CD3+CD4+淋巴细胞、CD4+/CD8+均显著升高(P<0.05),CD3+CD8+淋巴细胞显著降低(P<0.05)。Glu、ApoC2水平显著升高(P<0.01),ApoA2水平升高(P<0.05),TC、LDC-C、ApoB、LP(a)水平显著降低(P<0.01);总铁结合力水平升高(P<0.05),TP、ALB、Hb水平显著降低(P<0.01),血清Fe2+水平降低(P<0.05),Mg2+水平升高(P<0.05),Na+、Ca2+水平显著降低(P<0.01)。结论远航期间舰艇官兵免疫力提高,白蛋白和血清Fe2+、Na+、Ca2+水平降低,应给予及时补充。