棉花MYB转录因子基因GbMYB5的克隆及表达分析

在对陆地棉Maxxa BAC文库所获得的一个BAC克隆进行测序分析过程中,发现一个新的MYB类转录因子,为探明其在棉花中的表达模式,采用RT-PCR技术从海岛棉品种H7124中克隆出该基因,命名为GbMYB5(GenBank登录号为:JF820389)。GbMYB5基因全长1 105 bp,编码277个氨基酸。RT-PCR结果表明GbMYB5基因在棉花的茎、叶、蕾、絮和未成熟的种子中均有表达,尤以叶片中的表达水平最高。重金属胁迫可短暂抑制GbMYB5基因表达,但表达量在处理48 h后回升到正常水平。PEG、脱落酸和赤霉酸诱导均可增强GbMYB5基因的表达。另外,构建了含有GbMYB5基因全长的植物过量表达载体,转化烟草。经PCR检测获得目的基因正常表达的转基因烟草9株,为研究该基因的抗逆作用奠定了基础。

海岛棉MYB转录因子GbMYB5基因启动子的克隆及其在拟南芥中的表达特性分析

海岛棉GbMYB5基因属于MYB家族转录因子,该家族基因可能参与调控与生物或非生物逆境相关的一系列基因表达。为了进一步研究该基因的功能,利用PCR技术从棉花基因组DNA中分离到GbMYB5基因上游2.2 kb的启动子序列。软件分析和预测结果表明,该序列具有典型的启动子结构,并含有多种光响应元件、脱落酸和赤霉素等激素响应顺式作用元件、干旱等逆境胁迫响应顺式作用元件以及水杨酸响应顺式作用元件。将克隆到的启动子序列置换PBI101中的CaMV35S启动子,驱动其下游的GUS基因,构建植物表达载体pGbMYB5-GUS,通过花序浸染法转化拟南芥,获得转基因植株。组织化学染色结果表明,在GbMYB5启动子的驱动下,报告基因GUS在拟南芥的根部、叶尖部及生长点均有表达,因此该启动子可能是一个组织特异性启动子。

CYP6CM1基因RNA干扰载体的构建及转基因烟草对烟粉虱抗药性的影响

烟粉虱的抗药性与体内细胞色素P450单加氧酶基因的过量表达有关。根据Q型烟粉虱一个P450基因(CYP6CM1基因)的特异区域构建RNAi载体,通过农杆菌介导法转化烟草,PCR检测获得6个独立转基因株系;以非转基因烟草和T1代转基因烟草饲喂烟粉虱5 d后,荧光定量PCR结果显示取食转基因烟草的烟粉虱体内CYP6CM1基因相对表达量仅为取食非转基因烟草烟粉虱的13%～27%,表明CYP6CM1基因RNAi表达框架可以干扰烟粉虱CYP6CM1基因的表达。

饲喂CYP6CM1和Coe1 RNAi双价转基因烟草对Q型烟粉虱抗药性的影响

细胞色素P450酶系和羧酸酯酶在昆虫代谢抗药性中起重要作用,通过RNAi沉默昆虫这两种酶的基因,研究其对Q型烟粉虱抗药性的影响.根据Q型烟粉虱的一个P450基因（CYP6CM1）和一个羧酸酯酶基因（Coe1）的特异区域构建双价RNAi载体,农杆菌介导转化烟草,PCR检测获得5个单独的To代转基因株系.饲喂烟粉虱T1代转基因烟草,荧光定量PCR检测发现取食转基因烟草的烟粉虱体内CYP6CM1基因和Coe1基因表达量仅为取食非转基因烟草烟粉虱的18％ ～24％和17％～33％;通过琼脂保湿浸叶法和单株活体法研究取食T1代转基因烟草的烟粉虱对杀虫剂的效应,结果发现在接触1 g/L阿维·吡虫啉72 h后,2种方法中取食转基因烟草的烟粉虱死亡率分别比取食非转基因烟草的烟粉虱死亡率升高14.77％～16.46％和16.01％～18.51％;同样,接触稀释1 000倍的40％辛硫磷（体积比）72 h后,2种方法中烟粉虱死亡率升高22.94％ ～ 23.58％和17.4％～18.76％.以上结果表明,转CYP6CM1-Coe1 RNAi基因烟草可以显著降低烟粉虱CYP6CM1基因和Coe1基因的表达,降低烟粉虱对烟碱类杀虫剂阿维·吡虫啉和有机磷类杀虫剂辛硫磷的抗药性,显著提高杀虫剂的防治效果.

诚信与三个文明

2001年中共中央公布的《公民道德建设实施纲要》把“明礼诚信”概括为公民基本道德规范之一，突出了“诚信”的重要地位；党的十六大报告又对道德建设作了“要以诚实守信为重点”的新概括；党的十六届三中全会也提出要“增强全社会的信用意识，政府、企事业单位和个人都要把诚实守信作为基本行为准则”。这是在新形势下对道德建设提出的一个新要求。

高级会计监督管理机制建设与完善对策探析

本文主要陈述高级会计监督管理机制建设中存在的问题,并且根据实际情况提出高级会计监督管理机制建设与完善对策,旨在为高级会计监督管理机制于企业经营运转中,发挥应有约束、指导作用,促使企业长效发展,提供部分参考价值。

关于学习和借鉴人类政治文明的有益成果的思考

一 改革开放20多年来,中国社会发生了翻天覆地的变化,取得了举世瞩目的巨大成就.我国的改革开放过程不仅是社会经济文化的进步过程,也是一个政治变革和政治进步的过程.改革开放后我国的政治文明建设取得了许多重要的成就.我国的政治生活发生了重大的变化,我国的政治始终处于进步之中.特别是近13年来的伟大发展,更是要求政治建设和政治体制改革与时俱进,不断进步.江泽民同志顺应时代要求,立足中国国情,提出了"借鉴人类政治文明的有益成果"的新思想、新要求.

CYP6CM1转基因烟草对Q型烟粉虱抗药性的影响

细胞色素P450酶系对杀虫剂的代谢作用是大多数昆虫产生抗药性的主要机制，沉默P450基因能否对烟粉虱抗药性产生影响需要进一步研究。本论文将含O型烟粉虱细胞色素P450基因CYP6CMlRNAi表达框架的转基因烟草饲喂烟粉虱，荧光定量PCR检测发现烟粉虱取食转基因烟草后体内CYP6CMl基因表达量显著下降，仅为取食非转基因烟草烟粉虱的19％～38％；通过琼脂保湿浸叶法和单株活体法研究取食转基因烟草烟粉虱对阿维·吡虫啉抗药性的影响，结果发现在接触1g门L阿维·吡虫啉24～72h后，取食转基因烟草的烟粉虱死亡率分别比取食非转基因烟草的烟粉虱死亡率显著升高20％～30％和15％-20％。本研究结果表明，饲喂烟粉虱转CYP6CMlRNAi基因烟草可以显著降低烟粉虱细胞色素P450CYP6CMl基因的表达，并降低烟粉虱对烟碱类杀虫剂阿维·吡虫啉的抗药性，显著提高了杀虫剂防治效果。