应用生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒

为了大规模生产猪传染性胃肠炎病毒抗原,试验采用生物反应器及微载体进行ST细胞的培养,待微载体上的ST细胞长满至单层后接种猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)。共使用生物反应器培养3批TGEV抗原,每批培养过程中分别调节初始细胞密度至2.14×106个/mL、1.83×106个/mL和2.02×106个/mL,微载体浓度为3 g/L、6 g/L和9 g/L。结果表明应用生物反应器及微载体培养得到抗原的病毒含量均达到108.0TCID50/mL,明显高于转瓶培养的病毒含量。

猪流行性腹泻病毒X-6/2021株的分离鉴定及其S1基因序列分析

为了了解四川地区流行的猪流行性腹泻病毒(PEDV)的生物学特征及基因的遗传进化关系,从四川某地采集了发病仔猪小肠,病料处理后在Vero细胞上进行盲传,通过RTPCR、间接免疫荧光鉴定(IFA)验证,成功分离出1株猪流行性腹泻病毒,命名为X-6/2021株。对X-6/2021株S1基因进行RT-PCR扩增,获得的分离株S1序列与国内外PEDV毒株进行序列比对和遗传进化分析。结果显示,PEDV-X-6/2021毒株与Ⅰ型参考毒株的同源性为90.6%~93.2%,与Ⅱ型参考毒株的同源性为97.6%~99.0%。试验成功地从四川省分离鉴定得到1株猪流行性腹泻病毒,为该地区PEDV防控及候选疫苗毒株的筛选提供了物质基础。

猪流行性腹泻病毒SZ株的分离与鉴定

从资阳某猪场发生腹泻症状的猪肠道内容物中分离得到一株病毒,经荧光检测、RT-PCR检测及序列分析鉴定后,证实该分离株为猪流行性腹泻病毒,命名为SZ株。PCR方法克隆S基因的部分片段,序列分析结果表明PCR扩增的部分S基因与其他毒株比对,结果表明与CH/XJUrumqi及韩国AF500215 S1的亲缘关系较近。

支原体PCR检测方法的建立及初步应用

经过对Genebank鸡滑液支原体、猪肺炎支原体、口腔支原体和猪鼻支原体16S rRNA序列比对,设计了一条通用引物,建立支原体PCR检测方法。该方法敏感、特异、经济、快速,在动物疫苗生产中检测细胞、半成品及成品支原体污染具有较大的应用价值。

一株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

本试验采集某养鸡场发病鸡的肾脏和肺组织病料,接种鸡胚盲传,发现从F3代开始出现侏儒胚及发育不良的鸡胚,经病毒血凝性测定、干扰NDV试验、RT-PCR鉴定,判定该病毒为鸡传染性支气管炎病毒,命名为HP-W株。对该分离株的S1基因进行扩增、测序,结果表明该毒株的S1基因长度为1 620 bp,与变异株4/91的核苷酸同源性为98.9%,氨基酸同源性为98.1%,与其他毒株核苷酸及氨基酸序列的同源性均低于80%。

一种精液净化保护剂对公猪精子活率的影响及对精液中5种病毒的杀灭作用研究

本实验检测了一种精液净化保护剂对公猪精子活率的影响,以及对存在于公猪精液中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CFSV)、细小病毒(PPV)和圆环病毒2型(PCV-2)5种猪病病毒的杀灭作用。用不同浓度的精液净化保护剂处理公猪精子,检测精子活率及存活时间。结果表明:当精液净化保护剂的浓度低于1.00%时,精子活率和精液存活时间都优于空白组;用不同浓度的精液净化保护剂处理5种猪病病毒,在非精液环境中,当净化保护剂的浓度分别不低于0.156%(PCV-2)、0.156%(PPV)、0.125%(PRV)、0.125%(PRRSV)、0.156%(CSFV)时,5种相应的病毒都能全部杀灭;在精液环境中,能完全杀灭这5种病毒的净化保护剂浓度分别不低于0.063%(PCV-2)、0.125%(PPV)、0.125%(PRV)、0.125%(PRRSV)、0.250%(CSFV)。实验结果表明,在浓度低于安全使用浓度范围内应用该精液净化保护剂,既能提高公猪精子活率、延长存活时间,又能完全杀灭公猪精液中的5种常见猪病病毒。