菊花不同时期各组织器官石蜡切片制作条件的优化

[目的]根据菊花不同时期各组织器官特性,设计试验对石蜡切片制作条件进行优化,旨在筛选针对特定组织的节省时间和成本且效果最佳的石蜡切片制作条件。[方法]取不同时期菊花根、茎、叶、花等样品,采用常规石蜡切片制作方法并结合试验过程中总结的固绿快速染色法,设计不同的渗蜡时间、切片厚度及染色方法,对各组织器官进行石蜡切片制作,经显微拍照后筛选出各组织最适石蜡切片的制作条件。[结果]经筛选发现,在渗蜡时间方面,渗蜡充分幼根需5 d,老根6 d,幼茎6 d,老茎7 d,叶片4 d,花芽5 d,舌状花4 d。在切片厚度方面,最适切片厚度幼根为16μm,老根20μm,幼茎12μm,老茎12μm,叶片25μm,花芽10μm,舌状花16μm。在染色方法的选择方面,幼根经番红-固绿双重染色后效果最佳,老根则首选番红-固绿双重染色法或番红单染法;幼茎和老茎同样首选番红-固绿双重染色法或番红单染法;叶片、花芽及舌状花以操作最为简单的固绿快速染色法为首选。[结论]试验针对菊花不同时期各组织器官所筛选的最优石蜡切片制作条件,能够最大限度地节省时间和成本,并能达到试验观察所需的最优效果。

百合叶片磷脂酶基因家族转录组学分析

为探究磷脂酶基因家族在百合叶片中的表达情况,利用Illumina测序对百合正常叶片和叶烧病叶片进行转录组测序分析。测序共获得磷脂酶注释基因274个,分为PLA1、PLA2、PLB、PLC和PLD共5类。在KEGG、NR、COG和Swiss-prot等4个蛋白质数据库中都注释为磷脂酶基因的Unigene序列有34条,其中PLA2、PLB、PLC和PLD类磷脂酶基因参与醚脂类代谢、甘油磷脂代谢调控,在百合叶烧病发生过程中,PLA2基因与PLC基因表达量上调,PLB与PLD类既有上调表达基因也有下调表达基因。

百合叶烧病发病过程叶片细胞和差异表达基因分析

【目的】明确百合叶烧病发病过程中百合叶片细胞结构的变化,探究百合叶烧病发病的分子调控机理。【方法】通过扫描电镜和透射电镜观察东方百合Tarrango正常叶片、轻度叶烧叶片和重度叶烧叶片超微结构。并通过比较东方百合Tarrango正常叶片、叶烧叶片、正常叶片喷钙和叶烧叶片喷钙4种处理的转录组测序数据,对差异表达基因进行序列对比和分类分析。【结果】百合叶片近轴面表皮细胞大小随叶烧程度的加深而减小,而液泡失水是导致表皮细胞体积缩小的原因。转录组测序共获得349537条unigenes,平均长度为513.25 bp。124405条unigenes获得注释,占unigenes总数的35.59%。共发现7185个差异表达基因,包括5860个特异差异表达基因和1325个共同差异表达基因。KEGG富集分析显示,“代谢途径”“丙酮酸代谢”“次生代谢产物的生物合成”和“光合作用生物的碳固定作用”的基因在4组试验处理都有富集。百合叶烧病发病过程中显著下调基因有FOLK、PLD1_2、ATPeF1B和KCS、CALM、ENO和pel等;而在叶烧叶片喷钙后,表达量上调的基因有CALM、CPK、EIN2、AUX1、PLD1_2和SORD等。【结论】缺钙是导致百合叶烧病的重要因素,由缺钙引起的液泡失水和细胞皱缩等病害表征可能受脱落酸、乙烯和生长素等激素调控。