生后小鼠肾脏髓质发育中Bcl-2和Bax基因表达与凋亡的关系

目的:观察小鼠出生后肾脏髓质发育中Bcl-2和Bax基因表达与细胞凋亡的关系。方法:实验于2004-03/2005-03在锦州医学院组织与胚胎学教研室完成。取成年健康昆明系小白鼠24只,体质量25～30g,雌雄(3∶1)同窝饲养。见雌鼠阴道栓出现计为胚龄0天。对孕鼠饲养2周后,每日早8时、晚5时观察生产情况,以观察到仔鼠出生的最早时间计为生后0天,分别取生后1,3,7,14,21,28,70d的仔鼠各4只。经乙醚麻醉后,取出肾脏,制成切片5μm。每个标本分别选取经肾门的薄片做连续切片,根据切片的多少等间隔选取4张切片,每张切片系统随机选取5个视野,采用原位末端标记法光镜下观察阳性细胞所占的百分比。细胞凋亡指数=凋亡阳性细胞数/细胞总数×100%。同时免疫组织化学方法,对生后小鼠肾脏髓质发育中的Bcl-2和Bax基因蛋白表达进行观察。结果:纳入小白鼠24只,均进入结果分析。①在小鼠出生后肾脏髓质发育的过程中,TUNEL阳性细胞均有不同程度的表达。小鼠出生后第1天,细胞凋亡指数为(32.46±3.69)%,于生后第7天达到高峰,细胞凋亡指数为(45.36±4.35)%,以后随着日龄增加凋亡细胞逐渐减少;在70d成年小鼠肾脏中,TUNEL阳性细胞少见。②小鼠出生后第1天,Bcl-2/Bax比值较高,两者的比值为(1.15±0.23)%;从第3天开始Bcl-2/Bax比值有所减少,于第7天降到最低,为(0.27±0.08)%。以后两者的比值又逐渐回升,并达到最高值(2.87±0.35)%。结论:Bcl-2/Bax比值的降低可能是肾脏髓质发育过程中细胞凋亡指数逐渐升高的机制之一。

14-3-3ζ与β连接素在人T_1期非小细胞肺癌中的表达及意义

目的观察14-3-3ζ和β连接素(β-catenin)在人T1期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨两者与非小细胞肺癌发展、侵袭和转移的关系。方法采用免疫组织化学、免疫荧光双标、激光扫描共焦显微技术和Western blotting,检测NSCLC及正常肺组织中14-3-3ζ和β-catenin蛋白的表达。结果与正常肺组织相比,14-3-3ζ在NSCLC中的表达显著增强,且表达与肺癌的分化程度和淋巴结转移有关,而与病理学分型无关。β-catenin在NSCLC中的表达与正常肺组织相比减弱,且其表达与肺癌的分化程度呈正相关,与淋巴结转移呈负相关,而与肺癌病理学分型无关。结论14-3-3ζ和β-catenin与T1期NSCLC发展、侵袭和转移密切相关。14-3-3ζ高表达可能促进了NSCLC的发展与转移,因此14-3-3ζ可以作为非小细胞肺癌又一个有效的治疗靶点。

大鼠和小鼠胚胎后肾移植的形态学研究

目的观察不同胚龄的大鼠和小鼠的后肾植入同种异体远交系成年宿主体内后的生长变化,探讨胚胎后肾移植的最佳胚龄及血管起源。方法应用光、电镜及免疫组织化学技术观察不同胚龄的后肾移植后,肾脏各部的发育情况及后肾内CD31+阳性细胞的分布。结果离体后肾移植10天后成熟的肾小体形成,胚龄16天的大鼠和胚龄13天的小鼠后肾移植10天后,排斥反应轻微;胚龄20天的大鼠后肾和胚龄14、16天的小鼠后肾移植10天后,出现明显排斥反应,且随着胚龄的增长排斥反应逐渐加重。CD31+阳性细胞分布在肾小体毛细血管内皮及部分皮质中的间质细胞。结论胚龄16天的大鼠和胚龄13天的小鼠后肾中均无成熟肾小体出现,是移植的最佳时间;后肾移植物内的毛细血管袢是由移植物的间质细胞分化而来的。

14-3-3zeta与p-Bad在T1期非小细胞肺癌中的表达及意义

目的观察14-3-3zeta和p-Bad在T1期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨两者在非小细胞肺癌发展中的作用及相互关系。方法取110例非小细胞肺癌及癌旁正常肺组织存档蜡块和50例新鲜NSCLC及癌旁正常肺组织标本,采用免疫组织化学和免疫印迹法(Western blotting)检测14-3-3zeta和p-Bad蛋白的表达。结果与正常肺组织相比,14-3-3zeta在NSCLC中的表达显著增强,与肺癌的分化程度和淋巴结转移有关,而与患者的年龄、性别及病理学分型无关。p-Bad在正常肺组织中轻微表达,而在NSCLC中表达显著增强。且其表达与患者的年龄、性别及病理学分型无关,但与癌组织分化程度、淋巴结转移相关。结论 14-3-3zeta蛋白与p-Bad与T1期NSCLC发展、侵袭和转移密切相关。

血管紧张素Ⅱ受体1和受体2在小鼠肾脏输尿管芽中的表达

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体1和受体2在小鼠肾脏发育早期输尿管芽的表达及其与肾脏发育的关系。方法:实验于2005-05/2006-05在锦州医学院组织与胚胎学教研室完成。①取成年健康昆明系小白鼠24只,体质量25～30g,雌、雄(1∶1)同窝饲养,见雌鼠阴道栓出现计为胚龄0d。取胚龄12,14,15,16日胎鼠,各龄小鼠每组4只。剖腹取出肾脏,40g/L甲醛固定,制成切片5μm。②常规苏木精-伊红染色光镜下观察小鼠肾组织发育早期形态学变化。③采用免疫组织化学方法检测胚龄12,14,15,16d小鼠肾脏发育早期输尿管芽分支中血管紧张素Ⅱ受体1和受体2的含量。④体视学测量:每个动物的肾脏系统随机选取5张切片,按“S”形等间隔选取视野,采用方格测试系统,交点计数法测算血管紧张素Ⅱ受体1和受体2在输尿管芽阳性表达的体积密度。结果:①小鼠肾组织发育早期形态学观察:胚龄12d小鼠肾脏中可见输尿管芽及其分支。胚龄15d,输尿管芽周围出现了逗号小体、S小体,但未见成熟肾小体。胚龄16d的肾脏中可见出现了成熟肾小体、近曲小管和远曲小管。②小鼠肾脏组织免疫组织化学染色结果:在胚龄12d,血管紧张素Ⅱ受体1和受体2在输尿管芽中均有少量表达,胚龄15d,血管紧张素Ⅱ受体1达到高峰,胚龄16d血管紧张素Ⅱ受体1仅有微量表达;胚龄14d,血管紧张素Ⅱ受体2达到高峰,以后逐渐降低。结论:输尿管芽在小鼠后肾发生中有血管紧张素Ⅱ受体1和血管紧张素Ⅱ受体2表达,且血管紧张素Ⅱ受体1与诱导输尿管芽分支不断延长有关。

小鼠胚胎后肾移植的胚龄选择

目的:观察小鼠不同胚龄的后肾植入同种异体远交系成年宿主体内后的生长变化,分析小鼠胚胎后肾移植的胚龄选择、血管起源。方法:实验于2003-06/2004-06在锦州医学院组织与胚胎学教研室完成。实验选用普通级昆明系小白鼠24只,同笼饲养。以观察到阴道栓脱落的最早时间计为胚龄0d,以观察到仔鼠出生的最早时间计为生后0d。以随机数字表法取胚龄13,14,16d的胎鼠及生后1d的仔鼠,即胚龄13d组、胚龄14d组、胚龄16d组、生后1d组,每组8只。受体动物选择普通级体质量20g～25g的成年健康雄性小白鼠32只。对胚龄13d的小鼠胚胎离体后肾4只进行组织培养,观察10d后肾小体的发育情况。选择胚龄13,14,16d及生后1d的小鼠后肾植入同种远交系成年宿主大网膜内10d后,采用光镜及电镜技术观察后肾脏各部(特别是肾小体)的发育情况。结果:各组进行实验的后肾及宿主小白鼠32只均进入结果分析。①胚龄13d的小鼠肾脏中无成熟的肾小体,此胚龄的离体后肾经组织培养和移植后均可以生长和分化,产生成熟的肾小体。②胚龄14,16d及生后1d的小鼠肾脏中,已出现了成熟肾小体,后肾移植后则出现了排斥反应,间质水肿、出血区及淋巴细胞浸润,肾小体萎缩,甚至完全被纤维组织所取代;且排斥反应强弱与胚龄有关,胚龄越大,排斥反应越强。③培养前的后肾结构与移植前胚龄13d小鼠胚胎的后肾结构相同;培养10d后,可见出现了发育中各个阶段肾小体,电镜下可见血管球结构完整。结论:在供体后肾肾小体出现之前移植,其排斥反应轻微,生长发育良好,表明血管球形成之前是移植的最佳时间。

T_1期非小细胞肺癌中14-3-3ζ与上皮型钙黏素的表达及临床意义

目的观察14-3-3ζ和上皮型钙黏素(E-cadherin)在T1期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨两者与NSCLC发展、侵袭和转移的关系。方法采用免疫组织化学和免疫印迹法(Western blotting)检测110例NSCLC及正常肺组织中14-3-3ζ和E-cadherin蛋白的表达。结果与正常肺组织相比,14-3-3ζ在NSCLC中的表达显著增强,且表达与肺癌的分化程度和淋巴结转移显著相关,并与患者的性别、年龄和病理学分型无关。与正常肺组织相比,E-cadherin在NSCLC中的表达减弱,且其表达也与肺癌的分化程度和淋巴结转移明显相关,而与性别、年龄和肺癌病理学分型无关。结论 14-3-3ζ高表达可能促进了NSCLC的发展与转移,14-3-3ζ和E-cadherin与T1期NSCLC发展、侵袭和转移密切相关。

大鼠胚胎后肾移植的形态学研究

目的观察不同胚龄的大鼠后肾植入同种异体远交系成年宿主体内后的生长变化,探讨大鼠胚胎后肾移植的胚龄选择及血管起源。方法采用光、电镜技术观察胚龄16、20天的大鼠后肾植入同种异体远交系成年宿主体内后肾脏各部的发育情况;应用免疫组织化学的方法观察胚龄20天大鼠后肾内CD31+细胞的分布。结果离体后肾移植后可以生长和分化,产生成熟的肾小体;后肾移植后排斥反应强弱与胚龄有关;胚龄20天大鼠后肾内CD31+细胞分布在肾小球毛细血管内皮及部分皮质中的间质细胞。结论供体后肾肾小体出现之前是移植的最佳时间;后肾移植物内的毛细血管袢是由其自身的间质细胞分化而来的。

14-3-3ζ和p-Akt在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨14-3-3ζ和p-Akt蛋白异常表达与食管癌之间的关系。方法应用免疫组织化学技术检测50例食管鳞癌组织及癌旁组织中14-3-3ζ和p-Akt蛋白的表达。结果 14-3-3ζ和p-Akt蛋白在食管鳞癌中阳性表达率均大于癌旁正常食管组织;且与组织分化程度和淋巴结转移密切相关,而与患者的年龄和肿瘤浸润深度无相关性。经Spearman相关性分析,食管鳞癌中14-3-3ζ与p-Akt阳性表达呈显著相关。结论 14-3-3ζ和p-Akt参与了食管癌的发生和发展过程。

小鼠出生后肾脏发育过程中的细胞增殖与凋亡

目的：观察小鼠出生后肾脏发育过程中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及细胞凋亡的特征,探讨出生后小鼠肾脏发育过程中细胞增殖与凋亡的规律及其关系。方法：应用免疫组织化学技术和原位末端标记法(TUNEL法)分别检测小鼠出生后1～70d肾脏中PCNA阳性的细胞和凋亡细胞。结果：小鼠出生后1～70d,皮质中的肾小体、肾小管、髓放线以及髓质中的肾小管和集合管的细胞,早期增殖活跃,随着肾脏发育成熟而表达逐渐减弱。同时,也存在着细胞凋亡现象,且凋亡高峰一般出现在增殖高峰之后。结论：细胞增殖与凋亡在小鼠生后肾脏发育的整个过程中普遍存在,生后1～7d细胞增殖旺盛,增殖高峰之后出现凋亡高峰,生后28～70d两者活动均减弱。

OCT4和P27^(kip1)蛋白在肾透明细胞癌中的表达及其相关性

目的研究OCT4和P27^(kip1)蛋白在肾透明细胞癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学方法对24例肾透明细胞癌标本OCT4和P27^(kip1)的表达进行检测。观察OCT4和P27^(kip1)在肾癌组织中的阳性表达百分比及细胞分布情况。考察OCT4和P27^(kip1)在性别、年龄(<60岁和≥60岁)及癌细胞有无转移间的表达水平差异。对两者进行相关性分析。结果肾透明细胞癌标本OCT4和P27^(kip1)蛋白阳性表达分别为16例(66.7%)和18例(75%),OCT4蛋白高、中及低表达分别为8例(33.3%)、5例(20.5%)及3例(12.5%),主要在细胞质和细胞核中表达,另有少部分在胞膜中表达。P27^(kip1)高、中及低表达分别为3例(12.5%)、6例(25%)、9例(37.5%),阳性着色在胞浆和胞膜,少部分细胞核可表达。OCT4和P27^(kip1)的表达水平在年龄、性别间差异无统计学意义,在肿瘤有无转移间差异有统计学意义(P<0.05)。OCT4和P27^(kip1)在肾癌中的表达呈负相关(r_s=-0.408,P<0.05)。结论 OCT4和P27^(kip1)呈负相关,采用抑制OCT4表达或P27^(kip1)的降解,尤其是降低胞质中P27^(kip1)的表达,可作为基因治疗肾癌的一个新的的作用靶点。

吡咯烷二硫代氨基甲酸对脂多糖致急性肺损伤大鼠NF-κBP65蛋白表达的影响

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠NF-κB P65蛋白表达的影响。方法雄性大鼠54只,随机分三组。对照组(N组)6只,腹腔注射生理盐水3 ml/kg。ALI组(L组)24只,腹腔注射LPS 3 mg/kg。PDTC干预组(P+L组)24只,先腹腔注射PDTC 120 mg/kg,0.5 h后再腹腔注射LPS 3 mg/kg。后两组分别于腹腔注射LPS后1、2、4、8 h作为观测时间点。观察肺组织胞质及胞核中NF-κB P65蛋白表达强度的变化。结果 ALI组各时相肺组织胞质中P65蛋白的表达强度较对照组显著降低(P<0.01),而胞核中P65蛋白表达强度较对照组显著升高(P<0.01),但PDTC干预组P65蛋白与ALT组比较,肺组织胞质中P65蛋白的表达强度较ALT组升高(P<0.05),而胞核中P65蛋白表达强度较ALT组降低(P<0.05)。结论 LPS引起肺组织NF-κB P65蛋白由胞质向胞核转移而活化,NF-κB参与炎症的调控,在ALI中发挥重要作用。而PDTC可抑制炎性介质的表达和释放,可有效地减轻LPS所致大鼠ALI。

细胞增殖与凋亡在小鼠生后肾脏髓质发育过程中的意义

观察小鼠出生后肾脏髓质发育过程中增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达及细胞凋亡的特征,探讨出生后小鼠肾脏髓质发育过程中细胞增殖与凋亡的规律及其关系。应用免疫组织化学技术和原位末端标记法(TUNEL法)分别检测小鼠出生后1、3、7、14、21、28和70天肾脏髓质中的增殖细胞及凋亡细胞。结果显示,(1)小鼠出生后肾脏髓质发育中PCNA阳性细胞的表达具有一定的规律,早期PCNA阳性表达丰富,随着肾脏发育逐渐成熟而表达减弱;(2)在细胞增殖的同时也存在着细胞凋亡现象,细胞凋亡指数于生后第7天达到高峰,以后表达逐渐减弱。细胞增殖与凋亡在小鼠生后肾脏髓质发育的整个过程中普遍存在,早期细胞增殖旺盛,增殖高峰之后出现凋亡高峰,晚期两者活动均减弱。

食管癌、贲门癌术后心律失常的防治

1993年1月—2003年10月我院行食管癌、贲门癌切除术425例，其中95例发生术后心律失常。现报告如下。

细胞凋亡与增殖细胞核抗原在小鼠生后肾脏皮质发育中的表达

目的观察小鼠出生后肾脏皮质发育过程中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear anti-gen,PCNA)的表达及细胞凋亡的特征,探讨出生后小鼠肾脏皮质发育过程中细胞增殖与凋亡的规律及其关系。方法应用免疫组织化学技术和原位末端标记法(TUNEL法)分别检测出生后1、3、7、14、21、28和70天小鼠肾脏皮质中PCNA阳性的细胞和凋亡细胞。结果(1)小鼠生后肾脏皮质发育中PCNA的表达有一定的规律,早期PCNA阳性表达丰富,随着肾脏发育成熟表达逐渐减弱直至成年基本消失。(2)小鼠出生后肾脏皮质发育中也存在着大量细胞凋亡现象,且凋亡高峰一般出现在增殖高峰之后。结论细胞增殖与凋亡在小鼠生后肾脏皮质发育的整个过程中普遍存在,早期细胞增殖旺盛,增殖高峰之后出现凋亡高峰,晚期两者活动均减弱。

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养与pEGFP/Ang-1转染方法的建立

目的探讨培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞株、表型鉴定及利用重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染大鼠BMSCs细胞株的实验方法。方法采用贴壁筛选法和密度梯度离心法获取BMSCs,纯化大鼠BMSCs后,以重组质粒pEGFP/Ang-1转染,G 418筛挑阳性克隆,倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白的表达,检测Ang-1表达量的时间变化。结果采用贴壁筛选法和密度梯度离心法成功获取BMSCs细胞株,成功将血管生成素-1重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染大鼠BMSCs,3 d可稳定表达Ang-1,7 d以后开始减弱。结论成功运用贴壁筛选法和密度梯度离心法分离培养的大鼠BMSCs,并重组质粒pEGFP/Ang-1转染大鼠BMSCs可有效表达。

外源性NGF对家兔急性全脑缺血再灌注期间兴奋性氨基酸释放的影响

目的 观察外源性神经生长因子 (NGF)对家兔急性全脑缺血再灌注期间兴奋性氨基酸释放及家兔生存情况的影响 ,以探讨NGF对脑神经细胞的保护机制。方法 用反相高效液相色谱 (HPLC)荧光检测方法 ,测量急性全脑缺血再灌注损伤模型动物脑脊液中的氨基酸 ,特别是兴奋性氨基酸含量 ,并观察实验动物生存情况。结果 脑缺血再灌注期间 ,脑脊液中兴奋性氨基酸 (EAA)明显增加 (P <0 0 1) ;而外源性NGF可使上述指标明显下降 ,与对照组有明显差异 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 外源性NGF可通过血脑屏障 ,抑制脑内EAA过度释放 ,改善缺血再灌注对脑的损害 ,保护脑细胞 ,提高动物生存率 。

高脂饮食诱导的C57BL/6J幼鼠肾足细胞中Synaptopodin的表达及意义

目的探讨足细胞骨架蛋白Synaptopodin在高脂饮食所致肾发育期足细胞损伤中的表达及意义。方法 32只3周龄雄性C57BL/6J幼鼠随机分为正常饮食组和高脂饮食组,分别给予标准饲料与高脂饲料喂养4周。检测葡萄糖耐量水平、尿微量白蛋白与尿肌酐;观察小鼠肾的病理形态学改变,应用免疫组织化学和免疫印迹技术检测小鼠肾足细胞中Synaptopodin的表达变化。结果与正常饮食组相比,高脂饮食组小鼠体质量显著增加,葡萄糖调节受损,尿微量白蛋白与尿肌酐比率增高。镜下可见肾小球肥大,肾小囊腔内渗出,系膜基质轻度增生等病理改变。同时足细胞Synaptopodin的表达明显降低。结论 Synaptopodin在高脂饮食诱导的C57BL/6J幼鼠肾足细胞中表达显著降低,并出现蛋白尿。

Shh蛋白及其下游转录因子Gli-1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的观察非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)及癌旁组织中Shh和Gli-1蛋白的表达,探讨Shh和Gli-1异常表达与NSCLC之间的关系。方法应用免疫组织化学技术检测NSCLC及癌旁组织中Shh和Gli-1蛋白的表达。结果 Shh和Gli-1在癌旁组织中低表达,但在NSCLC中表达明显增强。Shh、Gli-1蛋白的表达与癌组织分化程度和淋巴结转移密切相关,分化程度低、淋巴结转移阳性者,表达增强明显。但与组织学分型无关。结论 Shh和Gli-1蛋白的异常表明Hedgehog信号通路可能参与了NSCLC的发生、发展过程。

Hedgehog信号通路中Gli-1蛋白在食管鳞癌中的表达及意义

目的观察食管鳞癌(esophageal squamous carcinoma,ESC)及癌旁组织中Gli-1的表达,探讨Gli-1异常表达与ESC之间的关系。方法采用免疫组化技术检测ESC及癌旁组织中Gli-1的表达。结果 Gli-1在癌旁组织中低表达,但在ESC中表达明显增强。Gli-1在ESC中的高表达与癌组织分化程度和TNM分期密切相关,但与患者的年龄、病变部位无关。结论 Hh信号传导通路的异常激活可能对ESC发生、发展具有重要作用。