基于CTAB改性凹土的细菌基因组DNA提取方法研究

利用HCl和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对凹凸棒土进行改性,增加其表面功能基团,研究改性材料对脱氧核糖核酸(DNA)的吸附与解吸效果。通过X射线衍射(XRD)仪、傅里叶变换红外光谱(FTIR)仪、扫描电子显微镜(SEM)和比表面积测试仪(BET)等对改性前后的凹凸棒土进行表征。以金黄色葡萄球菌为例,考察改性凹凸棒土用于核酸提取的得量、纯度及完整性。结果表明,改性材料对DNA的饱和吸附量可达18.657μg/mg,对金黄色葡萄球菌核酸提取得量为(5.45±0.46)ng/105 CFU,且结构完整、纯度高。

凹凸棒土作为食源性致病菌核酸提取材料的可行性研究

目的研究凹凸棒土作为一种低成本、高效的食源性致病菌核酸提取材料的可行性。方法利用X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)、Zeta电位分析、扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)和比表面积及孔径分析(brunauer-emmett-teller,BET)对凹土样品进行表征,建立凹土样品对DNA吸附和解吸附的方法和体系,并进行条件优化。利用吸附动力学模型和吸附等温模型考察其对DNA的吸附作用,以金黄色葡萄球菌为核酸提取对象,考察核酸提取的得量、纯度与完整性。结果吸附体系中最适pH为5.0,Na+最适浓度为300 mmol/L,准一级动力学模型和Freundlich模型更好地模拟吸附结果,凹凸棒土对DNA饱和吸附量理论值达到18.8972 ng/μg,选取25 mmol/L三聚磷酸钠为解吸剂,解吸率可达95.80%±0.44%。将凹凸棒土应用于金黄色葡萄球菌核酸的提取可获得完整、得量为(4.74±0.20)μg的基因组DNA。结论凹凸棒土对DNA有较强的吸附效果,且选取合适的解吸剂DNA易洗脱。以凹凸棒土为核酸固相提取材料,有望实现食源性致病菌基因组DNA的低成本、高效提取。