沉默Ttf1对神经元细胞及雌性大鼠弓状核内Kiss1和Gn RH基因表达的影响

目的·探讨抑制神经元细胞和雌性大鼠下丘脑弓状核中甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1,Ttf1)基因的表达对亲吻素(Kiss1)和促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)基因表达的影响。方法·针对大鼠Ttf1基因的mRNA序列分别设计3对特异性的干扰序列(TTF1-shRNA1、TTF1-shRNA2、TTF1-shRNA3),包装成慢病毒质粒。以神经元细胞ND7-23为体外模型,采用real-time PCR及Western blotting技术筛选干扰效率最高的慢病毒质粒(LV-TTF1-shRNA),转染72 h后检测Kiss1和GnRH基因的表达。将LV-TTF1-shRNA和空载质粒注射到21日龄雌性大鼠的下丘脑弓状核内,分别在幼年期(25日龄)、青春发育早期(35日龄)、成年期(42日龄)检测弓状核内Kiss1和GnRH基因的表达变化并观察雌鼠的阴门开放时间。结果·慢病毒质粒转染ND7-23细胞72 h后,LV-TTF1-shRNA2组、LV-TTF1-shRNA3组的Ttf1 mRNA及蛋白表达均显著减少(均P<0.05),其中LV-TTF1-shRNA3干扰效果最佳。采用LV-TTF1-shRNA3抑制ND7-23细胞中Ttf1表达后,Kiss1和GnRH基因的mRNA表达均显著降低(均P<0.05)。雌鼠弓状核内双侧显微注射LV-TTF1-shRNA3后,25日龄、35日龄、42日龄大鼠弓状核Kiss1和GnRH的mRNA均显著降低(均P<0.05),35日龄和42日龄时KISS1蛋白水平明显降低,且雌鼠阴门开放时间延迟。结论·在细胞水平和雌性大鼠弓状核内抑制Ttf1基因表达均使得Kiss1和GnRH基因表达显著下调,也导致雌鼠阴门开放时间明显延迟。