慢性镉中毒小鼠中脑黑质的形态学研究

目的 观察慢性镉中毒中脑黑质形态学变化。方法 进行HE染色、尼氏染色、酪氨酸羟化酶 (TyrosinehydroxylaseTH)免疫组化染色 ,用光镜观察 ;并对TH免疫组化染色阳性反应神经元进行形态计量分析 ;部分小鼠中脑黑质超薄切片 ,经透射电镜观察。结果 中脑黑质受损 ,主要病理变化有 :(1)神经元变化。 (2 )神经元坏死。 (3)多巴胺能神经元数量减少 ,多巴胺合成也减少。 (4)软化灶形成。 (5 )局部区域出现炎症反应。在上述慢性镉中毒致小鼠中脑黑质损伤的病理变化 ,与帕金森病 (Parkinson’sdiseasePD)的主要临床病理改变相类似。

球旁细胞光学显微镜下4种染色法结果观察

目的探讨显示小鼠球旁细胞的适宜染色方法,更好地为教学和科研服务。方法取20只小鼠肾组织做石蜡切片,随机分为4组,分别用HE染色、高碘酸-Schiff氏反应染色、改良结晶紫染色和免疫组织化学染色。结果 HE染色和高碘酸-Schiff氏反应染色不能显示肾球旁细胞;改良结晶紫染色和免疫组织化学均能较好地显示肾球旁细胞(胞质内有特征性的被染色的分泌颗粒)。结论改良结晶紫染色和免疫组织化学染色对球旁细胞有较好的染色效果,但改良的结晶紫染色更为简便、经济、稳定。

水族抗痹症药酒动物急性毒性试验

目的:研究水族抗痹症药酒的急性毒性,确定其安全范围。方法:抗痹症药酒及对照白酒不同浓度小鼠一次灌胃给药,观察7 d内小鼠死亡数,Bliss法测定小鼠的LD_(50)。结果:抗痹症药酒小鼠一次经口给药LD_(50)=29.664ml/kg,LD_(50)的95%可信限为26.452~31.904ml/kg;白酒对照组小鼠一次经口给药LD_(50)=27.222 ml/kg,LD_(50)的95%的可信限=24.194~29.759ml/kg。结论:抗痹症药酒临床建议成人适用量23.4ml/d,服用安全。

ApoE通过影响mir-30a-5p调控BDNF表达

目的研究ApoE基因型是如何影响脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达,以更好的理解AD的发病机制。方法在SH-SY5Y细胞系和大鼠原代神经元中加入Apo E3和Apo E4重组蛋白,用real-time PCR、Western blot和ELISA检测BDNF的表达水平;用luciferase assay、real-time PCR和Western blot证实BDNF是mir-30a-5p的靶基因;用Taq Man技术检测mir-30a-5p的水平。结果与对照组相比,Apo E3增加了BDNF的mRNA、蛋白水平和培养基中的BDNF浓度,而ApoE4减少了BDNF的mRNA、蛋白水平和培养基中的BDNF浓度; hsa-mir-30a-5p抑制BDNF的3’UTR的luciferase活性,mRNA和蛋白水平。ApoE3降低mir-30a-5p的表达,Apo E4增加mir-30a-5p的表达,而过表达mir-30a-5p inhibitor可以逆转ApoE4对BDNF的抑制效果。结论BDNF是mir-30a-5p的靶基因,ApoE是通过影响mir-30a-5p的水平来调控BDNF的表达。

苗药狭叶崖爬藤对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究苗药狭叶崖爬藤对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:选择SD大鼠作为实验动物并随机分为假手术组、模型组以及干预组,建立心肌缺血再灌注损伤模型后给予狭叶崖爬藤进行干预,测定血清中CK、CKMB、LDH含量以及心肌组织中SOD、MDA、GSH-Px、CRP、TNF-α、IL-6的含量,评估心肌梗死范围。结果:模型组大鼠血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量均明显高于假手术组(t=15.507,12.612,18.463,P<0.05);干预组大鼠血清中CK、CK-MB、LDH的含量均明显低于模型组(t=11.074,6.801,13.597,P<0.05);干预组大鼠的心肌梗死面积、梗死区占心肌面积百分比均明显低于模型组(t=7.125,7.090,P<0.05);模型组大鼠心肌组织中丙二醛(MDA)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量明显高于假手术组,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量均明显低于假手术组(t=8.340,15.571,14.777,16.222,5.602,6.790,P<0.05),干预组大鼠心肌组织MDA、CRP、TNF-α、IL-6含量明显低于模型组,超氧化物歧化酶SOD、GSH-Px的含量均明显高于模型组(t=5.806,9.980,9.200,8.902,3.725,4.229,P<0.05)。结论:苗药狭叶崖爬藤对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,能够减轻心肌细胞损伤、缓解氧化应激和炎症反应。

NSE在慢性砷中毒大鼠海马CA3区的表达

目的:利用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化染色,光镜下观察慢性砷中毒对成年大鼠海马CA3区神经元形态学影响,以及慢性砷中毒对成年大鼠脑的神经毒性。方法:取3～4月龄SD大鼠60只,随机分为正常对照组(自由饮用蒸馏水)、低剂量组(As2O3按4mg/l的比例用蒸馏水配制,自由饮用)和高剂量组(As2O3按100mg/l的比例用蒸馏水配制,自由饮用)。每组20只,各组均用普通饲料喂养,连续喂养4月后取大鼠海马组织,常规石蜡切片尼式染色(Nissl),并利用神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体进行SABC法免疫组化染色,观察大鼠海马CA3区神经元的形态学改变,进行细胞形态学计数及测量NSE阳性反应产物的平均光密度。结果:砷中毒组神经元数量减少,细胞形态不规则,可见大量坏死的神经细胞,NSE免疫组化染色阳性细胞减少(P<0.01),阳性反应产物平均光密度降低(P<0.01)。结论:慢性砷中毒可以导致大鼠海马CA3区神经元结构损伤。

大鼠海马CA3区突触素的增龄性变化

目的探讨海马CA3区突触素P38免疫反应产物的分布及增龄性变化的规律。方法SD大鼠分为幼年组（1～2月龄）、青年组（4～5月龄）、中年组（11～12月龄）和老年组（≥24月龄），常规石蜡海马连续冠状切片，尼氏染色、突触素P38免疫组织化学染色，图像分析仪测量其免疫反应阳性产物的光密度值。结果海马EA3区P38免疫反应阳性产物呈板层分布，主要分布在辐射层，其平均光密度（AOD）值以青年组最大，与之比较成年组、老年组均减少，以老年组减少最显著，各组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论大鼠海马CA3区辐射层突触素P38含量随增龄而逐渐减少。

大鼠海马CA3区谷氨酸能、γ-氨基丁酸能神经元的增龄性变化

目的探讨大鼠海马CA3区谷氨酸能、γ-氨基丁酸(GABA)能神经元增龄性变化的规律。方法SD大鼠分为1～2,4～5,11～12和≥24月龄4组,常规石蜡海马连续冠状切片,HE染色和谷氨酸、GABA免疫组织化学染色,图像分析仪测量谷氨酸、GABA免疫反应阳性产物的光密度及其阳性神经元的多种形态学参数。结果大鼠海马CA3区谷氨酸、GABA免疫反应阳性产物的光密度及其阳性神经元多种形态学参数随增龄而减小。结论海马CA3区谷氨酸、GABA能神经元随年龄增长而逐渐出现衰老性变化,为海马衰老病变的研究提供形态学依据。

不同分化阶段的树突状细胞的细胞膜生物物理特性变化

DCs是迄今所知最有效的抗原呈递细胞,在体外可以用CD14+的单核细胞诱导分化而得到。imDCs能够主动地摄取抗原和病原体,产生MHC-抗原肽复合物,并且从抗原获取位点向二级淋巴组织迁移,逐渐分化成mDCs,mDCs与幼稚的T细胞相互作用,从而导致免疫应答或耐受。在这些过程中,DCs必须经历数次变形和转位以通过基底膜和血管壁等屏障,并且在二级淋巴组织内与幼稚的T细胞发生直接的物理性接触。为了更好地理解DCs从外周组织向二级淋巴组织迁移的过程和启动免疫应答的机制,通过研究体外DCs分化过程中细胞膜的生物物理特性,包括细胞膜的粘弹性、表面电荷及其分布和流动性,结果发现DCs细胞膜粘弹性逐渐增加,mDCs的电泳率最大,表面电荷分布出现明显的不对称现象,并且膜流动性也逐渐增加,说明DCs的细胞膜生物物理特性在其行使生理功能的过程中发挥着重要的作用,这对更深入地理解DCs的迁移和与幼稚T细胞相互作用以及免疫应答的启动过程具有非常重要的意义。

肥大细胞甲苯胺蓝-PAS改良染色法

肥大细胞（mast cell）是疏松结缔组织中常见的细胞,位于小血管附近,成行成群分布,胞体较大,呈圆或卵圆形,核小而圆,染色深,居中,其胞质中充满粗大的嗜碱性颗粒,有异染性,颗粒易溶于水,颗粒内含有肝素、组胺和嗜碱性粒细胞趋化因子等[1]。肥大细胞染色方法种类很多[2],常用甲苯胺蓝（tolui-dine blue）染色。

雌二醇对三阴乳腺癌细胞integrin β4水解作用的影响

目的:研究三阴乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞中雌二醇对整合素(integrin)β4水解的促进作用。方法:常规培养MDA-MB-231细胞至指数增长期,分别给予17β-雌二醇、雌激素受体(ER)特异性阻断剂4-羟基他莫西芬(OHT)和G蛋白偶联受体30(GPR30)特异性阻断剂G-15干预30 min,采用蛋白质印迹(Western blot)实验检测钙激活中性蛋白酶2(calpain 2)的表达和integrinβ4水解的情况。结果:17β-estradiol在短时间内可促进MDA-MB-231细胞130和95k D integrinβ4水解片段的产生,促进作用呈浓度依赖方式,而对calpain 2表达没有明显影响;4-OHT不能阻断17β-estradiol对integrinβ4的水解作用,且其本身可促进integrinβ4水解;G-15能阻断17β-estradiol对integrinβ4的水解。结论:在TNBC MDA-MB-231细胞中,17β-estradiol可通过GPR30促进130和95k Dintegrinβ4水解片段的产生。

依达拉奉对帕金森病小鼠黑质GSK-3β表达的影响

目的探讨依达拉奉对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺神经元的保护作用。方法 30只健康雄性C57BL/6小鼠,随机分为正常组、模型组和治疗组。模型组和治疗组给予腹腔注射百草枯和代森锰建立PD模型,建模成功后,治疗组给予依达拉奉腹腔注射2 w。观察3组小鼠行为学的改变、并用免疫组织化学法检测黑质TH、GSK-3β的表达。结果模型组与治疗组比较,爬杆时间明显延长,黑质TH阳性神经元数量显著降低,GSK-3β的表达显著增高。结论依达拉奉治疗可显著改善百草枯和代森锰引起的损伤,有明显的神经保护作用。

SYNⅠ在慢性砷中毒大鼠海马CA3区的表达

目的利用突触蛋白Ⅰ(SynapsinⅠ,SYNⅠ)免疫组化染色,光镜下观察慢性砷中毒对成年大鼠海马CA3区突触蛋白的影响,探讨慢性砷中毒对成年大鼠脑的神经毒性。方法3～4月龄SD大鼠60只,体重(165±15)g,随机分为正常对照组(N,自由饮用蒸馏水)、低剂量组(L,As2O3按0.4mg/kg的比例用蒸馏水配制,自由饮用)和高剂量组(H,As2O3按10mg/kg的比例用蒸馏水配制,自由饮用)。每组20只,各组均用普通饲料喂养,连续喂养4个月后取大鼠海马组织,处死动物前进行血、尿生化指标的检测。常规石蜡切片,利用突触蛋白Ⅰ抗体进行SABC法免疫组化染色,观察大鼠海马CA3区突触蛋白的改变,并用图像分析软件测量NSE阳性反应产物的平均光密度。结果血、尿含砷量明显增高、突触蛋白数量减少,SynapsinⅠ免疫组化染色阳性反应产物平均光密度降低(P<0.05),并随浓度增加损害加重。结论慢性砷中毒可以导致大鼠海马CA3区突触蛋白数量减少,并随浓度增加损害加重。

以问题为基础的学习法在解剖学教学中的应用

目的探讨PBL在解剖学教学中的作用。方法将我院2006级临床专业学生200人随机分为2个组。实验组100人采用PBL教学法+传统教学法;对照组100采用传统教学法,然后对学生的反映及考试成绩进行比较。结果PBL组学生考试成绩明显高于传统教学组,学生反映好。讨论PBL教学法在提高学生分析、解决问题的能力上明显优于传统教学。

组织切片PT和HE、PAS、PASH、PAST染色方法比较

目的:比较组织切片HE、PAS及PT染色方法及镜下特点。方法:取大鼠肝脏,Carnoy氏固定液固定,对肝组织HE、PAS及PT染色,光学显微镜下观察染色效果。结果:PT染色法能清晰显示肝组织的细胞及细胞核轮廓,效果优于HE、PAS法。结论:PT染色方法简单,成本低,细胞及细胞核轮廓更能清楚显示。

水族抗痹证药酒抗类风湿性关节炎的实验研究

目的:观察水族抗痹证药酒对类风湿性关节炎大鼠的影响。方法:将50只SD雌性大鼠随机分组,分为空白组,模型组,抗痹证药酒高、中、低剂量组(5 mL/kg,2.5 mL/kg,1.25 mL/kg),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠于踝关节注射弗氏佐剂建立关节炎模型,建模成功后给予相应剂量的药物灌胃,每天1次,持续2周。测定各组大鼠血清中白介素1-β、白介素6、肿瘤坏死因子-α的含量,镜下观察各组大鼠踝关节组织病理变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中白介素1-β、白介素6、肿瘤坏死因子-α含量均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,抗痹证药酒不同剂量组大鼠血清中白介素1-β、白介素6、肿瘤坏死因子-α含量均有不同程度下降,其中高剂量组血清白介素1-β含量,中剂量组和高剂量组血清白介素6含量,低剂量组、中剂量组、高剂量组血清肿瘤坏死因子-α含量比较具有显著性差异(P<0.05)。与模型组相比,水药抗痹证药酒不同剂量组大鼠关节滑膜充血、水肿情况有不同程度减轻,淋巴细胞、浆细胞等炎细胞浸润相对较轻。结论:水药抗痹证药酒可降低佐剂性关节炎大鼠血清中白介素1-β、白介素6、肿瘤坏死因子-α含量,从而减轻关节滑膜炎症以及关节软骨、骨质破坏,起到抗类风湿性关节炎作用。

虚拟现实技术在局部解剖学教学中的应用

局部解剖学是一门研究正常人体形态、层次结构、毗邻以及临床相关问题的科学．在基础医学中占有极其重要的地位，是沟通基础与临床的桥梁。由于解剖学以复杂的人体形态结构为研究对象,决定了其在教学中必然存在大量的困难。传统的教学手段仅依靠手画简图加挂图，学生难以理解和掌握人体的空间结构，严重影响了教学效果。

新生大鼠海马神经元的原代培养与鉴定

目的：探讨建立简便高效的大鼠海马神经元原代培养的纯化方法。方法：（1）离体培养新生24h内SD乳鼠海马神经元，每天在倒置相差显微镜下进行神经元的形态学观察；（2）MTY法检测培养不同时间段神经元的活力变化，并绘制生长曲线；（3）纯化培养9d神经元利用免疫荧光染色法检测β-微管蛋白Ⅲ（β-tublinⅢ）的表达率。结果：（1）倒置相差显微镜下观察原代培养的海马神经元，刚分离种植时可见神经细胞为圆形，24h大多数细胞贴壁，3d细胞突起增大、增粗，培养5～7d神经元胞体丰满，突起交织成的网络更密集，培养14—16d后，神经元开始退化；（2）生长曲线结果发现海马神经元体外培养经历了4个时期，即生长潜伏期、对数生长期、平台期、生长停滞期；（3）经p—tublinUI鉴定海马神经元纯度为（93．0％±2．5％）。结论：本实验方法步骤简便，可获得纯度较高的海马神经元，为研究与海马神经元相关的疾病提供了实验基础。