石榴籽油大豆异黄酮软胶囊的制备及质量评价

以石榴籽油和大豆异黄酮的比例、蜂蜡和大豆卵磷脂的百分比为主要考察因素,以沉降比、流动性、切断性、分散性、总异黄酮和大豆苷含量等为指标,优化石榴籽油大豆异黄酮软胶囊的制备工艺和处方。得到最佳处方和工艺条件为石榴籽油92%、大豆卵磷脂1%、蜂蜡2%、大豆异黄酮5%;干燥时间36 h,所得水分含量小于9%,大豆苷含量1.00 mg/粒,总异黄酮含量3.73 mg/粒,装量差异符合规定。结果表明以石榴籽油为分散介质,以大豆卵磷脂为乳化剂、润湿剂,以蜂蜡为助悬剂制备的软胶囊,工艺稳定、质量可控。

酒黄芩微波炮制工艺的优化

目的优化酒黄芩微波炮制工艺。方法以黄芩苷、总黄酮含有量及外观性状评分为评价指标,黄酒量、微波时间、微波功率、闷润时间为影响因素,Box-Behnken响应面法优化炮制工艺。结果最佳条件为饮片与黄酒用量比10∶4,闷润时间40 min,微波时间4 min,微波功率385 W,总黄酮含有量23.07%,黄芩苷含有量13.67%,外观性状评分9.50,综合评分98.24。结论该方法稳定可靠,可用于微波炮制酒黄芩。

铁十字酢浆草不同极性部位的HPLC指纹图谱与抗氧化活性研究

分别采用酒石酸亚铁显色法、亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法、硫酸-苯酚法与DNS法,测定酢浆草(Oxalis corniculata L.)鳞茎外皮和内芯中多酚、黄酮、多糖的含量。以乙腈和0.1%磷酸水溶液作流动相,梯度洗脱,考察铁十字酢浆草醇提液不同极性部位的HPLC指纹图谱;以抗坏血酸为阳性对照,采用1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基清除法、羟基(·OH)自由基清除法测定体外抗氧化活性。鳞茎外皮和内芯中多酚含量分别为5.45、4.73 mg/g,黄酮含量分别为16.62、7.70 mg/g,多糖含量分别为17.00、121.02 mg/g。在280 nm波长下,以21号峰为基准峰标定醇提液外皮共有峰32个,内芯31个。不同极性部位的共有峰为外皮:石油醚相8个,氯仿相22个,乙酸乙酯相22个,正丁醇相26个,水相9个;内芯:石油醚相14个,氯仿相21个,乙酸乙酯相17个,正丁醇相19个,水相10个。在抗氧化活性测定体系中,鳞茎外皮和内芯在不同极性部位均有一定的抗氧化活性。氯仿相、乙酸乙酯相对两种自由基都表现出较好的抗氧化活性。铁十字酢浆草鳞茎中富含多酚、黄酮、多糖等成分,醇提物经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取后,各分离相化学指纹图谱和抗氧化能力均存在差别,可为后期药效物质发现提供参考。

木鳖子-淫羊藿有效部位筛选与其组方抗肺癌作用机制初探

目的:初步确认木鳖子-淫羊藿抗肺癌有效部位,研究其作用机制。方法:在前期研究的基础上,优化木鳖子-淫羊藿的提取方法,并在药效指导下进行有效部位的筛选。通过D101型大孔树脂吸附、洗脱得到木鳖子和淫羊藿不同的乙醇洗脱部位和水部位;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测药物总提物和不同洗脱部位对多种肿瘤细胞株增殖的影响,筛选最佳洗脱部位以及肿瘤敏感株;流式细胞术检测木鳖子-淫羊藿洗脱部位对A549细胞内活性氧(ROS)及凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测A549细胞内凋亡相关蛋白肿瘤蛋白53(p53)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9蛋白的表达水平。结果:木鳖子对A549细胞的增殖抑制效果优于木鳖子仁,半数抑制浓度(IC50)分别为(86.83±2.88)、(95.10±18.13)mg·L^(-1);淫羊藿总提物作用于A549抗增殖的IC50为(4.71±0.81)mg·L^(-1);木鳖子与淫羊藿总提物的大孔树脂40%、60%、80%乙醇和无水乙醇洗脱部位抑制A549增殖的IC50分别为(45.32±4.38)、(14.95±0.73)、(17.07±1.76)、(14.46±2.35)、(51.7±2.26)、(12.37±0.67)、(20.29±0.93)、(3.43±0.91)mg·L^(-1);与正常组比较,木鳖子-淫羊藿1∶1组方抑制A549增殖具有时间依赖性和浓度依赖性;与正常组比较,50 mg·L^(-1)木鳖子-淫羊藿组方药物显著增加A549细胞内ROS表达(P<0.01);与正常组比较,12.5、25、50 mg·L^(-1)木鳖子-淫羊藿组方药物可显著增加A549细胞凋亡(P<0.01);与正常组比较,25、50 mg·L^(-1)木鳖子-淫羊藿组方药物显著增加A549细胞内p53的表达(P<0.01);与正常组比较,12.5、25、50 mg·L^(-1)木鳖子-淫羊藿组方药物可显著增加Bax的表达(P<0.01);与正常组比较,50 mg·L^(-1)木鳖子-淫羊藿组方药物可显著降低Caspase-3、Caspase-9的表达(P<0.01)。结论:木鳖子的抗肿瘤增殖作用较木鳖子仁更强;木鳖子和淫羊藿抗肿瘤活性物质主要集中在60%乙醇~无水乙醇洗脱部位;在配比研究中,木鳖子和淫羊藿1∶1组方对A549细胞抗增值效果较好,其机制可能与增加A549细胞内ROS的生成,进而提高促凋亡蛋白p53、Bax的表达,最终导致Caspase-3和Caspase-9的激活而诱导细胞内源性凋亡有关。

瑞香狼毒提取物抗乳腺癌MCF-7细胞多药耐药的研究

该研究将探索瑞香狼毒提取物(SCE)抗乳腺癌多药耐药的作用及相关机制。以乳腺癌化疗敏感细胞株MCF-7及阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR作为实验对象,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,采用Pi单染法测定细胞周期,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色、流式细胞术检测细胞凋亡情况,单丹磺酰尸胺(MDC)染色以及GFP-LC3B-mcherry腺病毒转染检测自噬流情况,Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3以及自噬蛋白LC3B、p62、Beclin-1的表达水平。实验结果显示,SCE能够显著抑制乳腺癌细胞敏感/耐药株的增殖,耐药因子为0.53,远低于阿霉素的耐药因子59,同时SCE处理后敏感/耐药细胞株的G0/G1期细胞比例均显著增加。另外,SCE给药后的DAPI染色表明,敏感/耐药细胞株均出现核浓缩、染色加深、核碎裂等一系列凋亡现象;流式双染结果表明SCE给药后敏感/耐药细胞株凋亡细胞比例均显著上升;Western blot结果显示SCE给药后敏感/耐药细胞株caspase-3、caspase-9、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低而Bax蛋白的表达水平显著升高。进一步,SCE处理后也能够使乳腺癌耐药株MDC阳性染色以及GFP-LC3B-mcherry转染后的黄色荧光斑点增多,并上调乳腺癌细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、p62以及Beclin-1的表达水平。综上所述,SCE可能通过阻滞乳腺癌耐药细胞的细胞周期,并阻断自噬流,最终通过干预耐药细胞的凋亡抵抗而发挥抗耐药作用。

参莲提取物通过调控Nrf2/Keap1信号通路减轻TNF-α诱导的ECV304损伤

探讨参莲提取物对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞(ECV304)损伤的干预作用及可能的作用机制。以TNF-α诱导ECV304细胞损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;生化法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;通过Western blot法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)、半胱天冬酶3(caspase-3)、半胱天冬酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果显示,与对照组相比,50μg·L^(-1)的TNF-α能够导致ECV304细胞活力显著下降(P<0.01),引起ECV304细胞ROS产生增加,SOD活性降低,MDA、NO、ET-1、IL-1β含量显著增加(P<0.01),Keap1、caspase-9、Bax蛋白表达显著上调,NQO1、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,参莲提取物可以提高ECV304细胞存活率,抑制细胞ROS产生,提高SOD活性,降低MDA、NO、ET-1、IL-1β含量(P<0.01或P<0.05),下调Keap1、caspase-3、caspase-9、Bax蛋白表达水平,提高Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。提示参莲提取物可能通过调控Nrf2/Keap1信号通路降低TNF-α诱导的ECV304细胞氧化应激损伤,减少炎症反应和细胞凋亡。

戊己丸中活性成分在正常大鼠和肠易激综合征大鼠体内药代动力学行为的差异性分析

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定戊己丸中10个活性成分口服给药后不同时间点的血药浓度,比较其在正常大鼠和慢性内脏高敏感肠易激综合征(CVH-IBS)大鼠体内药代动力学特征的差异。方法:采用乳鼠结肠经皮冠状动脉腔内血管成形术(PTCA)球囊刺激法制备CVH-IBS大鼠模型,灌胃给予戊己丸(给药剂量0.245 g·kg^(-1))后于不同时间点从颈静脉采血,采用UPLC-MS/MS同时检测血浆中10个戊己丸活性成分(盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸黄连碱、盐酸药根碱、表小檗碱、二氢小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸内酯、芍药苷、芍药内酯苷)的血药浓度,计算各成分在正常大鼠和CVH-IBS大鼠体内药代动力学参数的差异。结果:建立的UPLC-MS/MS能够灵敏、准确地检测10个戊己丸活性成分在大鼠体内的血药浓度。与正常组比较,CVH-IBS大鼠体内10个戊己丸活性成分的吸收速率均有一定程度的降低,达峰时间(t_(max))延长,其中盐酸小檗碱和盐酸药根碱的t_(max)分别从54 min和39 min均显著延长至90 min(P<0.05,P<0.01);各成分的药-时曲线下面积(AUC_(0-t))均增加,其中吴茱萸碱和芍药苷差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);10个活性成分的清除率(CL/F)均降低,其中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和吴茱萸碱差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:戊己丸中活性成分在正常大鼠和CVH-IBS大鼠体内的药代动力学行为存在明显差异,这可能与IBS病理状态下肠道上皮细胞的微结构被破坏和肝脏酶的活性改变有关。