基于miR-665/DRAM1信号介导的自噬探讨补阳还五汤延缓血管衰老的作用

目的研究补阳还五汤对血管衰老的延缓作用,探讨其机制是否与microRNA-665(miR-665)/DNA损伤调节自噬调控因子1(DNA damage-regulated autophagy modulator 1,DRAM1)信号介导的自噬有关。方法将自然衰老雄性SD大鼠随机分为衰老组,补阳还五汤低、中、高(9.25、18.5、37.0 g·kg^(-1))剂量组和白藜芦醇组(80 mg·kg^(-1)),同时设立年轻组。分离胸主动脉,ELISA法测定血管组织衰老相关β-半乳糖苷酶(Senescence associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)活性和晚期糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)水平;HE、Masson和EVG染色观察血管组织形态结构;qPCR检测血管组织miR-665表达;生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证miR-665与DRAM1靶向关系;透射电镜观察血管内自噬小体;Western blot法检测血管组织p16、DRAM1蛋白及自噬相关蛋白LC3、Beclin1和p62的表达;免疫组织化学法检测血管组织DRAM1的蛋白表达。结果与年轻组相比,衰老组大鼠血管中SA-β-Gal活性、AGEs水平和p16蛋白表达增加(P<0.01);血管组织排列紊乱,中膜增厚,胶原纤维增加,弹力纤维出现断裂、紊乱;miR-665基因表达上调(P<0.01);自噬小体数量减少,Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低(P<0.01),p62蛋白表达升高(P<0.01);DRAM1蛋白表达降低(P<0.01)。与衰老组相比,补阳还五汤和白藜芦醇干预能够降低衰老大鼠血管中SA-β-Gal活性(P<0.01)、AGEs水平和p16蛋白表达(P<0.05,P<0.01);改善血管形态和弹力纤维结构,降低血管组织胶原纤维含量。高剂量补阳还五汤明显下调miR-665基因表达(P<0.01),增加血管内自噬小体数量;不同剂量补阳还五汤明显上调Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),中剂量和高剂量补阳还五汤显著上调LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达(P<0.01),下调p62蛋白表达(P<0.01);高剂量补阳还五汤明显上调DRAM1蛋白表达(P<0.05)。生物信息学分析显示,miR-665与DRAM1基因序列存在特异性互补结合位点,双荧光素酶报告实验证实miR-665靶向DRAM1基因并负调控DRAM1蛋白表达。结论补阳还五汤可能通过靶向抑制miR-665促进DRAM1蛋白表达,进而促进血管自噬,延缓血管衰老。

中药枳壳化学成分及药理作用研究

枳壳是中医临床上常用的理气药之一,其主要有效成分为黄酮类化合物,挥发油成分,生物碱类化合物等。近年来,中外学者对中药枳壳的化学成分和药理作用的研究层出不穷。本文就近年来关于中药枳壳的化学成分和药理作用进行综述。

鬼针草调节PI3K-Akt信号通路改善急性肺损伤作用的分子机制研究

目的研究鬼针草对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的改善作用及其机制。方法将60只Balb/c小鼠随机分为6组:空白组、模型组、鬼针草(低、中、高剂量)组及阳性药组,腹腔注射LPS诱导ALI模型12 h后进行灌胃给药,建模5 d后处死并分离肺组织,观察组织病理切片及检测相关炎症因子活性,通过网络药理学预测鬼针草改善ALI作用的药效物质基础及潜在的作用机制,采用免疫组织化学方法对相应通路的关键靶点进行验证。结果鬼针草可改善ALI小鼠肺泡间质水肿、肺泡壁增厚等病理损伤,显著抑制肺组织髓过氧化物酶(MPO)及血清TNF-α,IL-1β和IL-6的表达(P<0.05),从而缓解机体的炎症反应。通过网络药理学预测分析,鬼针草治疗ALI的主要活性成分可能为黄酮类化合物中的槲皮素和木犀草素;通过作用于TNF、IL-6、ALB、GAPDH、AKT1、VEGFA、STAT3等靶点,调控PI3K-Akt、TNF、HIF-1等通路来发挥改善ALI的作用。RT-qPCR及免疫组织化学结果显示鬼针草可促进ALI小鼠肺组织Akt的转录及表达(P<0.05)。结论鬼针草对ALI炎症反应具有改善作用,其机制可能为激活PI3K-Akt信号通路来发挥肺保护作用。为鬼针草的进一步开发利用提供了一定的实验基础。

基于分子对接技术探讨刺玫果对急性心肌缺血的保护作用及其有效成分

目的研究刺玫果乙酸乙酯、正丁醇、水3个提取部位对急性心肌缺血小鼠心肌损伤的保护作用,并采用分子对接技术筛选刺玫果中抗急性心肌缺血的活性成分。方法将小鼠随机分为6组,包括空白组、模型组、生脉饮组、乙酸乙酯组、正丁醇组、水组,连续灌胃给药15 d,在第14、15日腹腔注射盐酸异丙肾上腺素(ISO),建立急性心肌缺血模型,考察刺玫果3个部位对小鼠急性心肌缺血时心率与ST段的影响,并检测小鼠血清和心肌组织中相关指标。然后,从相关文献中确定10个刺玫果各组分的化学成分,通过AutoDockTools软件与6个心肌缺血相关靶标进行对接,根据对接情况筛选活性成分。结果刺玫果乙酸乙酯、正丁醇和水部位均可降低模型小鼠心率、减轻ST段下移现象,降低模型小鼠血清心肌酶的活性,同时使心肌中总超氧化物歧化酶(T-SOD)与过氧化氢酶(CAT)活性升高,丙二醛(MDA)含量降低,且乙酸乙酯组与正丁醇组还能纠正乳酸脱氢酶(LDH)水平的升高与还原性谷胱甘肽(GSH)的减少。而刺玫果中的10个成分与心肌缺血相关蛋白都产生较好结合,其中化合物的结合程度高低顺序为齐墩果酸>熊果酸>木犀草素>槲皮素>原花青素B2>没食子酸>金丝桃苷>橙皮苷>银椴苷>芦丁。结论刺玫果对ISO所致急性心肌缺血有保护作用,以刺玫果乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物效果最佳,且初步推断刺玫果抗急性心肌缺血的有效成分为三萜类、黄酮类、多酚类。

不同产地枳壳挥发油成分的气相色谱-质谱分析及抗肿瘤活性研究

目的:提取不同产地及炮制方法的枳壳挥发油成分,对其进行化学成分分析,并筛选枳壳挥发油的抗肿瘤活性。方法:使用麦麸对枳壳进行炮制,采用2010年版《中国药典》附录XD甲法提取枳壳挥发油并通过气相色谱-质谱联用法(GC-MC)分析,用面积归一化法计算各成分的相对百分含量;再分析枳壳炮制品挥发油的主要成分,最后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法研究枳壳挥发油的抗肿瘤活性。结果:共鉴定93个化学成分,其中柠檬烯是枳壳挥发油中的主要成分,且江西樟树产地的含量最多,同时发现炮制后其含量增加。江西樟树的枳壳挥发油对肝癌细胞(BEL-7402)、胃癌细胞(SGC-7901)、肺癌细胞(SPCA-1)具有不同程度的抑制活性,且呈剂量依赖性,同时发现炮制后的枳壳挥发油抑制效果更好。结论:通过GC-MC方法鉴定不同产地的枳壳中挥发油的化学成分,其主要为柠檬烯,炮制品的柠檬烯含量升高。江西樟树的枳壳挥发油对肝癌细胞(BEL-7402)、胃癌细胞(SGC-7901)、肺癌细胞(SPCA-1)的生长具有一定程度的抑制作用,且应用炮制品的效果更好,这为枳壳的开发利用提供了理论依据。

洋金花化学拆分组分的性味药理学评价——化学拆分组分的制备及性味辛温的评价

目的:建立洋金花性味物质基础的拆分方法,阐明洋金花性味辛温的物质基础,进而为"中药一味一性,一药X味Y性(Y≤X)"的中药性味理论新假说的客观性和中药性味的可拆分、可组合性研究方法提供科学依据。方法:根据洋金花的化学成分,组合应用多种色谱法及溶剂法等,建立洋金花性味物质基础的拆分方法;采用与洋金花性味功效相关的止咳、平喘、镇痛、解痉复合药理学指标作为洋金花性味辛温评价系统,对洋金花及其不同化学拆分组分的性味归属进行研究。结果:将洋金花中的化学成分拆分为生物碱组分和非生物碱组分;各给药组同空白对照组比较证明,洋金花水煎液和生物碱组分具有止咳、平喘、镇痛、解痉的作用,非生物碱组分不具有此类作用。结论:本文建立的洋金花性味物质基础拆分方法可行,工艺稳定、重现性好;洋金花性味辛温的物质基础为生物碱组分,即生物碱组分具有辛温的药性;非生物碱组分的性味与洋金花的传统药性不同,其性味的确定有待于进一步研究。

牛膝各拆分组分的抗炎活性研究

目的:研究牛膝各拆分组分的抗炎活性。方法:建立醋酸所致小鼠腹腔炎症渗出模型和角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀模型,考察牛膝各拆分组分的抗炎活性。结果:在醋酸所致小鼠腹腔炎症渗出模型中,牛膝甾酮组分高剂量组和牛膝皂苷组分高、中、低三个剂量组均有不同程度抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的作用,其中皂苷组分三个剂量组的抑制作用呈剂量依赖性;在角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀模型中,牛膝甾酮组分和皂苷组分各剂量在相应时间点上都可以有效降低角叉菜胶所致的大鼠足趾肿胀率,以牛膝甾酮组分高剂量和皂苷组分高、中剂量组的抑制效果最佳。结论:牛膝甾酮组分和皂苷组分都具有一定的抗炎作用,是牛膝药材发挥抗炎作用的药效物质基础。

复方灵芝降糖胶囊对2型糖尿病大鼠骨骼肌GluT-4及脂肪组织胰岛素受体mRNA基因表达的影响

目的:观察复方灵芝降糖胶囊对2型糖尿病大鼠骨骼肌GluT-4及脂肪组织胰岛素受体mRNA基因表达的影响。方法:给予实验动物STZ,破坏一部分胰岛β细胞功能,同时饲以高脂肪饲料造成外周组织对胰岛素不敏感,两者结合诱导出接近人类2型糖尿病的动物模型,并给予不同剂量治疗4周。处死后分别测定骨骼肌、脂肪组织胰岛素受体mRNA基因表达。结果:复方灵芝降糖胶囊对骨骼肌GluT-4及脂肪组织胰岛素受体mRNA基因的表达均有提升。结论:复方灵芝降糖胶囊治疗2型糖尿病可能与其提高骨骼肌GluT-4及脂肪组织胰岛素受体mRNA基因表达从而改善胰岛素的信号传导有关。

安神补脑液过膜前与过膜后对记忆障碍和方向辨别障碍的影响

目的:比较过膜前、过膜后的安神补脑液在改善小鼠记忆障碍和方向辨别障碍方面的不同作用效果。方法:利用乙醇致小鼠记忆再现障碍模型,通过跳台法记录小鼠错误次数,比较过膜后各样品对记忆功能的改善作用;利用腹腔注射戊巴比妥钠致小鼠方向辨别障碍模型,通过水迷宫实验,观察各样品的对小鼠的益智作用。结果:过膜前高剂量组和过膜后高、低剂量组的安神补脑液能够改善乙醇致小鼠记忆再现障碍;过膜前、过膜后的安神补脑液都能显著改善小鼠的方向辨别障碍,尤其是过膜后效果更佳。结论:过膜后的安神补脑液保留了过膜前的记忆改善作用,并提高了其在方向辨别方面的保护作用。

风轮菜总黄酮不同极性部位的抗氧化作用研究

目的:探讨风轮菜总黄酮的不同极性部位对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法:建立缺氧/复氧H9c2心肌细胞损伤模型,对风轮菜总黄酮10%甲醇部位(2#)、20%甲醇部位(3#)、30%甲醇部位(5#)进行药物浓度筛选,采用MTT法测定细胞存活率。收集培养细胞及其上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量。结果:与正常对照组比,模型组H9c2心肌细胞经过缺氧4h复氧24h造模后,细胞活力显著降低。与模型组比较,2#、3#、5#给药组显著增加H9c2心肌细胞活力。与正常对照组比较,模型组的SOD、GSH-Px及CAT的活性均显著降低,而LDH活性、MDA含量均升高,2#、3#、5#给药组可呈浓度依赖性显著增加SOD、GSH-Px及CAT活性,降低LDH活性及MDA含量。结论:2#、3#、5#对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,其与增强细胞清除氧自由基能力、降低脂质过氧化物的产生有关。

三参颗粒对小鼠耐缺氧及抗疲劳能力的影响

目的:研究三参颗粒对小鼠耐缺氧及抗疲劳能力的影响。方法:将小鼠随机分为空白对照组,阳性对照组(复方丹参滴丸0.15 g/kg),三参颗粒低、高剂量组(2.07 g/kg、4.14 g/kg)。采用常压耐缺氧实验,观察三参颗粒对小鼠耐缺氧能力的影响;采用爬杆实验、小鼠负重游泳实验及检测小鼠负重游泳实验后血清尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化,观察三参颗粒低对小鼠抗疲劳作用的影响。结果:与空白对照组比较,三参颗粒能明显增加小鼠常压耐缺氧存活时间;明显增加小鼠爬杆、负重游泳时间;对小鼠负重游泳后血清LDH活力明显增强,血清BUN含量明显减少。结论:三参颗粒能显著提高小鼠的耐缺氧能力和抗疲劳能力。

糖槭叶抗氧化活性研究

目的:研究糖槭叶的抗氧化活性,为开发新的药用资源提供理论基础和科学依据。方法:通过ESR测定DPPH抑制率、SOD Assay Kit-WST法测定SOD活性、Griess法测定NO的消去作用对糖槭叶多糖体外抗氧化活性进行考察;通过测定小鼠血清中SOD活性和MDA含量对糖槭叶进行体内抗氧化活性研究。结果:测定糖槭叶多糖对DPPH的抑制率为(12.2±6.74)%,SOD活性为(0.27±0.003)U/mg,对NO的消去率为(53.0±2.1)%;空白组、模型组、小剂量组、大剂量组的小鼠血清中SOD活性分别为(16.20±3.00)U/ml、(9.72±0.69)U/ml、(39.70±8.57)U/ml、(22.56±3.08)U/ml,MDA含量分别为(27.43±2.28)nmol/ml、(35.96±5.08)nmol/ml、(15.29±4.02)nmol/ml、(17.70±8.14)nmol/ml。结论:糖槭叶具有显著的抗氧化活性。

三参颗粒对异丙肾上腺素致大鼠心肌缺血的保护作用

目的研究三参颗粒对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠心肌缺血的保护作用。方法筛选心电图正常Wistar大鼠50只,随机分为5组,即空白对照组,模型组,复方丹参滴丸组(0.15 g·kg-1),三参颗粒低、高剂量组(2.07,4.14 g·kg-1),每组10只。皮下多点注射ISO,建立造成大鼠急性心肌缺血损伤模型。观测大鼠心电图(ECG)改变,检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量变化,并观察大鼠心肌组织病理改变。结果与模型组比较,三参颗粒组能降低急性心肌缺血大鼠ECG的S-T段抬高,提高大鼠血清中SOD的活力,降低MDA、CK、LDH的含量。结论三参颗粒对ISO致大鼠心肌组织缺血具有良好的保护作用。

菌培养及药物敏感试验在前列腺炎介入治疗过程中的意义(附884例分析)

目的:探讨药物选择在介入治疗前列腺炎过程中的意义。方法:回顾分析884例采用TRUS引导定位经会阴介入治疗慢性前列腺炎患者的临床效果及介入用药的选择。结果:术后1周经直肠超声(TRUS)检查其渗出及水肿区域有明显吸收和缩小,且前列腺液WBC计数均降至15/HP以下,卵磷酯小体计数上升至70%以上,细菌培养转阴。按国际前列腺症状指数评分平均下降13.5分。葡萄球菌为主要致病菌,多肽类抗生素较为敏感。结论:精细菌培养及药敏选择介入治疗前列腺炎的效果明显,避免了全身大量抗生素治疗对肝肾功能的损害。治疗前的药物选择是影响介入治疗效果的关键因素之一。

车前子、牛膝配伍治疗膜性肾病的网络药理学研究

目的研究车前子、牛膝配伍治疗膜性肾病可能的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索筛选出车前子、牛膝有效活性成分与作用靶点;利用OMIM、GeneCards数据库搜索膜性肾病的相关靶点;采用R语言对成分靶点和疾病靶点进行映射,将交集靶点上传至在线STRING数据库,构建蛋白相互作用(PPI)网络,采用Cytoscape 3.7.1软件绘制成分-靶点-疾病网络图和PPI网络图;运用分子对接软件对活性成分及关键靶点进行分子对接,验证网络分析结果;利用DAVID数据库进行基因功能GO分析和KEGG通路富集分析。结果去重后共得到27个有效成分,包括槲皮素(Quercetin)、山奈酚(Kaempferol)、小檗碱(Berberine)等;关键靶点12个,涉及转录因子AP-1(JUN)、肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、白细胞介素6(IL-6)等;GO功能富集分析得到GO条目106个,KEGG通路富集得到99条信号通路,主要涉及MAPK信号通路、IL-17信号通路、PI3K-Akt信号通路和相关疾病通路等。结论初步揭示了车前子、牛膝配伍治疗膜性肾病具有多成分、多靶点、多途径的特点。通过调控MAPK等信号通路来影响炎性因子的表达及肾小球系膜细胞的增生,达到治疗膜性肾病的作用。

枳壳多糖对辐射损伤小鼠的防护作用研究

目的探讨枳壳多糖(Citrus aurantium L.polysaccharides-B,CALB)对^(60)Coγ-射线诱导小鼠辐射的保护作用。方法将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、辐射模型组、CALB给药组(高、中、低剂量)、阳性对照组(黑木耳多糖,HP),连续灌胃给药30 d,末次给药3 h后,检测空白对照组及经^(60)Coγ-射线一次性全身照射(7 Gy)后,小鼠d 2、14的存活率。另检测空白对照组及经^(60)Coγ-射线一次性全身照射(3 Gy)后小鼠骨髓细胞DNA含量、骨髓细胞微核含量,小鼠脑组织、血清及肝脏中SOD、GSH-Px活性和MDA含量,以及脑组织中TCh E含量、小鼠脾、胸腺指数。结果 CALB各剂量组均能明显提高辐射小鼠的存活率,并提高小鼠骨髓细胞中DNA含量,降低骨髓细胞微核数。此外,CALB还可增加胸腺、脾指数,提高辐射小鼠血清、脑和肝组织中SOD、GSH-Px水平,同时降低MDA含量。结论 CALB对辐射损伤具有一定的保护作用,可用于枳壳的进一步开发与利用。

枳壳中黄酮类化合物对活化的小胶质细胞抑制作用的构效关系研究

目的从枳壳黄酮组分中分离纯化得到7种化合物,并探讨这7种化合物抑制脂多糖(LPS)诱导的原代小胶质细胞激活的构效关系。方法采用乙醇回流提取法提取及现代色谱技术获得橙皮素、红橘素、川陈皮素、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷。采用MTT分析法检测小胶质细胞的细胞存活率,ELISA法检测LPS激活的小胶质细胞TNF-α释放的变化。结果在1~200μM浓度范围内,7种黄酮类化合物对小胶质细胞存活率无显著影响;预处理4 h后4种黄酮苷元具有明显抑制活化的小胶质细胞分泌TNF-α的作用,其作用顺序为川陈皮素=红橘素>橙皮素>柚皮素,而3种黄酮苷却未表现出明显的抑制作用;预处理24 h后4种黄酮苷元的生物活性变化不大,而3种黄酮苷的生物活性明显增加,其作用顺序为新橙皮苷>橙皮苷>柚皮苷。结论 7种黄酮类化合物均有不同程度的抑制作用。其中,黄酮类化合物的抑制活性强于二氢黄酮类,黄酮苷元的活性强于黄酮苷,极性低的黄酮苷元又强于极性较大的黄酮苷元。推测黄酮类化合物母核结构中C-2,3共轭双键可能是对抑制小胶质细胞激活作用的关键因素,其次是母核分子的取代类型,黄酮苷需要一定的反应时间才可能发挥生物活性。

响应面法优化地黄多糖的提取工艺及抗氧化活性分析

目的通过响应面法优化地黄多糖的提取工艺并考察其抗氧化活性。方法使用水提醇沉法提取地黄多糖,在单因素试验的基础上,以提取时间、料液比和提取温度为自变量,以地黄多糖提取率为响应值,采用响应面法优化地黄多糖的提取工艺。对比Sevage法与三氯乙酸法脱蛋白的效果,并通过测定地黄多糖对DPPH自由基、羟基自由基的清除作用及Fe3+还原力评估其体外抗氧化活性。结果地黄多糖的最佳提取工艺条件为:提取时间100 min,料液比1∶60(g∶mL),温度70℃;在最佳条件下地黄多糖提取率可达7.09%,相对误差为0.29%。脱蛋白结果表明,三氯乙酸法较Sevage法更适于地黄多糖脱蛋白。多糖的抗氧化试验结果显示,在多糖质量浓度为1.0 mg/mL时,DPPH自由基、羟基自由基的最大清除率分别为72.44%、72.97%,还原能力评估吸光度值为0.5904。结论优化了地黄多糖的提取工艺,地黄多糖有较好的体外抗氧化活性,为地黄多糖的进一步开发利用提供了理论支持。