益气补肾实验方对自然流产模型小鼠母-胎界面和脾脏组织IL-2、IL-4表达的研究

目的:观察益气补肾实验方对自然流产模型小鼠母-胎界面和脾脏组织IL-2、IL-4的表达情况。方法:将雌性CBA/J与雄性DBA/2以2∶1合笼交配,建立自然流产模型。将CBA孕鼠随机分为5组:阴性对照组(生理盐水组)、阳性对照组(环孢素组)、中药组(高、中、低剂量中药组)。孕鼠于妊娠第14 d处死,取脾脏和蜕膜、胎盘组织,用ELISA法测母-胎界面及脾脏IL-2、IL-4蛋白含量。结果 (1)在母-胎界面中,与阴性对照组相比,各治疗组IL-2的表达均降低(P<0.05),IL-4的表达均升高(P<0.05);各治疗组中,高剂量组与环孢素组、中剂量组与低剂量组IL-2、IL-4的表达分别比较均无明显差异(P>0.05),高剂量组、环孢素组IL-2的表达较中剂量组、低剂量组低(P<0.05),IL-4的表达较中剂量组、低剂量组高(P<0.05)。(2)在脾脏组织中,与阴性对照组相比,各治疗组IL-2的表达均降低(P<0.05),IL-4的表达均升高(P<0.05);各治疗组IL-2的表达比较均无明显差异(P>0.05),高剂量组、环孢素组、低剂量组IL-4的表达均无明显差异(P>0.05),三者的表达均较中剂量组高(P<0.05)。结论:益气补肾实验方可以上调自然流产模型小鼠母-胎界面与脾脏组织IL-4的表达及下调IL-2的表达,有助于妊娠时免疫耐受状态的维持。

益气补肾实验方对自然流产模型小鼠foxp3、STAT5、NF-κB mRNA表达的影响

目的观察益气补肾实验方对自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞中foxp3mRNA表达及蜕膜组织foxp3、STAT 5、NF-κB mRNA表达的影响。方法将雌性CBA/J与雄性DBA/2或雄性BALB/c小鼠以2∶1合笼交配,制备自然流产模型。将CBA/J孕鼠分为5组:阴性对照组、阳性对照组、中药高剂量治疗组、中药中剂量治疗组、中药低剂量治疗组,每组10只;阴性对照组于妊娠第0天至处死日每天以10mg/kg的剂量灌服生理盐水1次;阳性对照组于妊娠第4天以10mg/kg的剂量单次灌服环孢素A溶液;中药高、中、低剂量治疗组于妊娠第0天至处死日每日分别按48、24、12g/kg的剂量灌服益气补肾实验方1次。将孕鼠于妊娠第9、14天处死,取新鲜脾脏用于提取Treg细胞,并取孕鼠蜕膜组织-80℃冻存。采用磁珠分选的方法分离和纯化脾脏CD4+CD25+细胞,采用流式细胞术鉴定分选前后CD4+CD25+的纯度,运用RT-PCR分析CD4+CD25+细胞中foxp3mRNA的表达情况;运用RT-PCR分析蜕膜组织中foxp3、STAT 5A、STAT 5B、NF-κB mRNA的表达情况。结果 CD4+CD25+Treg的纯度可达到88%以上,经台盼蓝检测其活性大于95%。纯化分离前CD4+CD25+/CD4+平均为13.20%;纯化分离后CD4+CD25+/CD4+平均为91.43%。与阴性对照组比较,阳性对照组、中药高剂量治疗组Treg细胞中foxp3mRNA表达水平明显升高(P<0.05);中药高剂量治疗组较中、低剂量组小鼠脾脏Treg中foxp3mRNA表达升高(P<0.05)。与阴性对照组比较,阳性对照组、中药高、中剂量组9、14天蜕膜组织foxp3、STAT 5BmRNA表达升高(P<0.05);阳性对照组、中药高剂量组9、14天及中药中剂量组蜕膜组织STAT 5A mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);阳性对照组及中药各剂量组蜕膜组织NF-κB mRNA表达降低(P<0.01)。结论益气补肾实验方可上调自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞foxp3mRNA及蜕膜组织中foxp3、STAT 5mRNA表达,下调母胎界面组织中NF-κB mRNA的表达,促进妊娠免疫耐受状态的维持。