水稻抗旱耐盐蛋白质组学研究进展

抗旱耐盐是水稻抗逆研究的重要方向。水稻抗旱耐盐蛋白质组学研究通过观察水稻在干旱和盐胁迫条件下的蛋白质组表达情况,动态分析水稻的蛋白质组变化,使研究的结果和性状联系更紧密,相对于从基因组水平上研究更具实际意义。简要介绍了水稻蛋白质组研究的基本方法和技术并重点叙述了水稻抗旱耐盐蛋白质组研究取得的成果。

适用于生菜叶片蛋白质双向电泳方法的建立及初步应用

以生菜(Lactuca sativa)叶片为研究材料,参考拟南芥和水稻的双向电泳方法,分析了等点聚焦时间和染色方法等影响双向电泳的关键因素,建立适合生菜叶片总蛋白质分离的双向电泳方法:采用三氯乙酸-丙酮沉淀法进行总蛋白质提取,用24cm固相pH梯度等电聚焦8000V×8h结合12%的SDS-PAGE进行双向电泳分离,银染法和考马斯亮蓝染色法染色都获得了较好的结果。应用Image-Master-Elite软件对考马斯亮蓝染色法染色的图谱进行分析表明:每张凝胶上都检测到超过1000个的蛋白质,不同凝胶之间蛋白质的匹配律达到98%,具有较高的分辨率和重复性。初步分析了生菜叶片蛋白质的等电点、分子量的分布情况,发现生菜叶片蛋白质的等电点以5.0～5.5之间最多而分子量主要集中在20～60kD之间。

SRAP标记与形态学标记在西瓜DUS测试中的比较

以28个西瓜品种为研究对象,分别采用21对SRAP引物标记和54个用于DUS测试的形态学标记对其进行遗传多样性分析,其中SRAP引物在不同品种间的多态信息含量(PIC)在52.5%～89.2%之间,平均值为72.0%,计算得到的各材料间相似系数在0.92至0.99之间,而形态学标记统计得到各材料间相关系数在0.50到0.85之间。采用UPGMA法对所有材料进行聚类分析,SRAP分子标记聚类划分成4类,形态学标记将其划分为5类。对两种标记所得的结果进行相关性分析得出两者的相关系数为0.218,表明形态学标记和SRAP标记在这些材料上表现的相关性不是很高,但在品种鉴定和区别上SRAP标记表现出一定的优势,可以作为DUS测试的一种有益补充。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定血清中145种脂类成分的含量

胆固醇、磷脂和脂肪酸代谢在心血管疾病和炎-癌转化的发病中起着重要作用,在生物体液样本中这3条代谢通路脂质成分的理化性质和浓度水平差别很大,同时定量颇具挑战。基于此,以体积比65∶35的甲醇-二氯甲烷混合液为提取溶剂超声提取血清样本后,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)同时测定3条代谢通路中145种脂类成分的含量。145种脂类成分的测定可在40 min内完成,测定下限为0.03~50.0μg·L^(-1)。以内标磷脂酰甘油(15:0)[PG(15:0)]、1-十七碳酰-甘油-3-磷酰胆碱[LysoPC(17:0)]、7α-羟基-4-胆固醇-3-酮-D7、13C-甘氨胆酸、d8-花生四烯酸为代表研究对象,评估方法的基质效应、精密度和准确度。结果显示,基质效应因子值为76.7%~115%,说明基质效应较弱。加标回收试验中目标物的回收率为71.3%~110%,测定值的相对标准偏差(n=5)均小于10%。方法用于测定30例健康人和30例乙型肝炎(HBV)患者血清中145种脂类成分的含量,并将筛选后的29种差异代谢物进行热图分析和相关性分析。结果表明,与健康人血清相比,HBV患者血清中磷脂(PL)和结合态的胆汁酸(BA)含量均是上升的,溶血磷脂(LPL)和脂肪酸(FA)的含量均是下降的。PL与BA表达呈显著正相关,与LPL呈显著负相关。受试者特征曲线分析(ROC)结果显示溶血磷脂酸(16:0)[LysoPA(16:0)]的ROC分析时曲线下面积(AUC)值等于1.000,具有作为HBV诊断生物标志物的前景。