对一株耐头孢哌酮的大肠杆菌质粒的研究

从一严重感染、经多种抗生素治疗无效而死亡病人的肺部分离到一株多重耐药物性的大肠杆菌。这株菌对头孢哌酮及其它几种抗生素高度耐药。通过对此菌进行染色体原位电泳、转化实验、限制性内切酶谱分析及ＭＩＣ值的测定．从此菌中分离出四个具有不同分子量及耐药性的质粒。其中三个质粒都对头孢哌酮表现高水平的耐药性；三个质粒对β－内酰胺类抗生素与β－内酰胺酶抑制剂的复合制剂也耐药。提示：此大肠杆菌对多种抗生素的耐药性是由质粒介导的。对其中二个质粒构建了其ＤＮＡ物理图谱。

Ras p21单克隆抗体在人鼻咽癌及宫颈癌中表达的研究

作者采用凝胶电泳ABC染色法,以P21单克隆抗体为探针,在凝胶上直接进行免疫酶联染色,对鼻咽癌、宫颈癌,慢性鼻咽炎、慢性宫颈炎及正常宫颈组织和胎鼻咽组织进行了ras癌基因的产物P21表达的研究。结果表明,鼻咽癌及宫颈癌中P21具有过量表达,其阳性率分别为78.9％和70％。6例慢性鼻咽炎与5例宫颈炎中各有1例阳性,正常宫颈和胎鼻咽组织均为阴性。结果显示,P21在鼻咽癌及宫颈癌中的表达明显增强。

多重耐药大肠杆菌β－内酰胺酶的初步研究

用Ｎｉｔｒｏｃｅｆｉｎ法检测到多重耐药大肠杆菌ＨＸ８８１０８及其４株质粒转化菌内均含有β－内酰胺酶；酶稳定性实验显示大肠杆茵ＨＸ８８１０８的４个质粒所编码的β－内酰胺酶对８种β－内酰胺类抗生素的水解享及对头孢哌酮的水解扫描光谱各不相同；ＰＡＧＥ实验表明大肠杆菌ＨＸ８８１０８内含有几条β－内酰胺酶条带，４个质粒编码的β－内酰胺酶条带在凝胶上的位置互不相同，但都与大肠杆菌ＨＸ８８１０８的１条β－内酰胺酶条带的位置相同。以上结果提示：大肠杆菌ＨＸ８８１０８内的４个质粒编码４种不同的β－内酰胺酶，从而介导大肠杆菌ＨＸ８８１０８对多种β－内酰胺类抗生素耐药。

大肠杆菌耐药质粒的头孢哌酮抗性基因克隆和定位

用鸟枪法从耐药质粒ｐＦＣ上克隆到头孢哌酮抗性基因。快速小规模制备质粒ＤＮＡ进行限制性酶切分析鉴定含重组质粒的克隆株，经多次传代，克隆株抗性表达稳定。多种限制性内切酶谱分析并构建重组质粒的物理图谱与质粒ｐＦＣ物理图谱比较，定位出头孢哌酮抗性基因在ｐＦＣ物理图谱上３２ｋｂ至４８ｋｂ区间内，其分子量约１６ｋｂ。该基因包含有ＥｃｏＲⅠ、ＳｍａⅠ、及ＰｖｕⅡ位点。

医用Ti(C,N)基金属陶瓷刃具的耐蚀性研究

根据外科刃具材料的性能要求 ,设计并制备了用于外科刃具的Ti(C ,N)基金属陶瓷。通过在两种医疗消毒介质中的腐蚀实验 ,评价了该材料的耐蚀性 ,并讨论了其分别在两种消毒介质中的腐蚀机理。结果表明 ,Ti(C ,N)基金属陶瓷具有良好的耐蚀性 ,其在医疗消毒用次氯酸盐溶液中主要为电化学腐蚀 ,而在H2 O2

人血清PAGE-CP谱中与γ区条纹相关的疾病

人血清PAGE—CP谱中,健康人γ区为均匀的蓝色宽带。消化道、呼吸道及别的粘膜炎症患者在γ区均匀的蓝色背景上出现一些紫红色、紫色及蓝色细条纹,条纹的分布形式与发炎的部位相关。经免疫染色证明这些条纹为抗原抗体复合物。多发性骨髓瘤患者血清则在γ区出现较粗的蓝色条纹。这类疾患可利用PAGE-CP作出较准确的诊断和作为治疗监控的手段。

大肠杆菌耐药质粒头孢哌酮抗性基因的研究

目的 通过对头孢哌酮抗性基因 ( CPZΓ)的性质研究 ,进一步探讨 E.coli HX8810 8多质粒共存并介导第三代头孢菌素耐药的分子机理。方法 采用 Nitrocefin法检测 CPZΓ表达产物 ,用紫外线分光光度计测定β-内酰胺酶活性 ,采用试管二倍液体稀释法进行 CPZΓ克隆菌株对 18种抗生素的敏感性测定 ,同时还进行头孢哌酮( CPZ)对 CPZΓ克隆菌株耐药性诱导试验和温度敏感突变试验。结果 CPZΓ 表达产物为 β-内酰胺酶 ,其酶活性强且与耐药质粒 p FC表达产物的活性基本一致。CPZΓ 只编码对氨苄青霉素、第一、第二代头孢菌素和第三代头孢菌素中 CPZ的耐药性 ,而对其他抗生素敏感。实验结果还显示了质粒 p FC经多次传代后介导 CPZ的耐药性显著下降 ,诺氟沙星、氨基糖甙类耐药性消失。CPZΓ 克隆菌株 CPZ耐药性增加为药物诱导所致 ,而非温度敏感突变。结论 耐药基因 CPZΓ 是通过编码 β-内酰胺酶介导产生 CPZ耐药性的 ,在抗生素压力下 ,CPZΓ 克隆菌株对

利用PAGE分析肝癌和肝炎病人血清成份

利用水平聚丙烯酰胺凝胶电泳及考马斯亮蓝——碱性品红染色(PAGE—CP)分析170例肝癌、110例肝炎和部分其他肝脏疾病病人血清,发现肝癌病人和重型乙肝病人血清中编号为PA4(前清蛋白4)的条带下降,且下降的程度和病情的轻重相关。由于健康人血清中PA4的分布和肝癌病人PA4含量的分布无交叉,PA4含量测定可作为肝癌的诊断方法之一。

人血清δ蛋白与血细胞的关系

人血清PAGE—CP图谱中,γ区和β带之间有一条蓝色细带,我们将这条带命名为δ带。健康人这条带含量占血清总蛋白量的1.5～2.0％,白血病人,骨髓增生的献血员,红细胞、白细胞及血小板减少的人员血清中这条蛋白含量很低,当血液中各种细胞恢复至正常时,这条蛋白又恢复至正常值。测定这条带的含量可以诊断这些种类的疾患或是作为这类疾病治疗监控的指标。

水平聚丙烯酰胺凝胶电泳分析中国健康人血清成份

利用新近发明的滤膜电泳槽作水平聚丙烯酰胺凝胶血清电泳及考马斯亮蓝-品红染色(PAGE—CP),在四川及附近省市共采集正常中国人血清千余份,制成彩色电泳图谱,经薄层扫描,对其中的10条主带进行统计,得出各条带的平均数和偏差,以及性别、民族、年龄等各因素对血清成份的影响。此项研究为PAGE—CP技术的临床应用建立了基础的参比数据。

中国葡萄属植物叶绿体DNA的提取、纯化及分子量测定

分离出纯化的叶绿体ＤＮＡ｛ｃｐＤＮＡ），基因组的文库便能建成，特定基因便能分离，其顺序便可进一步测定。然而，我们的研究经验表明，最常用制备纯化ｃｐＤＮＡ的方法很难应用于葡萄属的种类。本文提出了一个分离和提纯葡萄属ｃｐＤＮＡ的方法，这个方法不同于其它方法主要在于：１．偏重亚硫酸钠与巯乙醇和维生素Ｃ一起加在缓冲液中，使与溶液中的氧结合，以防止游离氧氧化单宁和其它次生物质呈显色反应；２．在高盐溶液中使用加热处理，达至８５℃为止，灭活氧化酶类，消除氧化条件。用其它科属的种类，菠菜和油菜作对比，提取和纯化了葡萄属不同类型种的ｃｐＤＮＡ，均取得了较好的结果。将提纯的中国葡萄各种的ｃｐＤＮＡ，用菠菜和油菜作比较，以λＤＮＡ作对照，经限制性酶ＢａｍＨＩ，ＳａｌＩ＋ＸｈｏＩ和ＰｓｔＩ＋ＫｐｎＩ酶解，电泳分离，扫描定量，采用描图法测定了ｃｐＤＮＡ各片段的分子量，总和约１３０ｋｂ，同时测定了菠菜和油菜的ｃｐＤＮＡ分子量。

大肠杆菌头孢哌酮抗性基因亚克隆及序列初步分析

为了确定耐药质粒ｐ Ｆ Ｃ所编码β内酰胺酶衍化类型，用从临床分离出的大肠杆菌耐药质粒 ｐ Ｆ Ｃ头孢哌酮抗性基因，经分段亚克隆，构建重组质粒ｐ Ｆ Ｂ１、ｐ Ｆ Ｂ２、ｐ Ｆ Ｂ３ ，对上述 ３ 个重组质粒分别测序获得的抗性基因序列经 Ｉｎｔｅｒｎｅｔ互联网同源性检索，表明该抗性基因部分序列，与肺炎克雷伯氏菌编码超广谱β内酰胺酶 Ｔ Ｅ Ｍ５２ 的抗性基因序列存在高度同源性（９７％ ），提示ｐ Ｆ Ｃ头孢哌酮抗性基因所编码的 β内酰胺酶可能衍化自 Ｔ Ｅ Ｍ型。

ras癌基因在人乳腺肿瘤中的表达

应用P_(21)蛋白单克隆抗体,对25例人乳腺癌的免疫组织化学检测显示,在乳腺浸润性导管癌组织中,有高水平的P_(21)表达,阳性率高达92％,与Querzoli等报道一致。29伊4乳腺良性病变的检测结果显示,细胞内P_(21)表达水平的高低与细胞增殖状态相关。临床对比分析提示乳腺癌中P_(21)的表达水平与瘤体大小有关但不能反映病人的淋巴结转移状态。上述结果表明,ras癌基因表达产物P_(21)蛋白,是一个与细胞增殖相关,可反映组织增殖状态的细胞生物学因子。

癌症病人的HBV感染率和表达率的检测分析

对９３１名癌症患者及４４名良性肿瘤患者和３３１名非肿瘤患者的普通人群作ＨＢＶ表达的“两对半”检验调查结果表明，癌症患者ＨＢＶ的感染标志率为６７％，明显高于其他人群（３０％）。文献表明等同方法测定的中国人群的ＨＢＶ携带率为５６％左右，本调查说明癌症病人的ＨＢＶ因癌症种类不同其感染标志率从４５．２％到８６．９％都高于良性肿瘤病人群（３１．８％）和普通人群（３０．５％）。本文讨论了癌症病人ＨＢＶ感染率和表达率高的原因。

中国野生葡萄葛蘲叶绿体DNA质粒文库的构建

限制性内切酶ＢａｍＨＩ水解中国野生葡萄葛（ＶｉｔｉｓｆｌｅｘｕｏｓａＴｈｕｎｂ）的叶绿体ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ），电泳分离为３４条带，最大为１１．７ｋｂ，最小为０．２３ｋｂ，分别用ｐＵＣ和ｐＢＲ３２２质粒克隆所得片段，转化大肠杆菌，并从转化菌中提取质粒ＤＮＡ，经酶切电泳分析证明含有葛ｃｐＤＮＡ经ＢａｍＨＩ水解的不同片段，从而构建了葛ｃｐＤＮＡ的ＢａｍＨＩ质粒文库。

脆弱类杆菌染色体DNA部分基因库构建及特异性DNA片断的克隆

厌氧菌感染是一大类临床上常见的疾病,尤其是以脆弱类杆菌为代表的类杆菌属细菌感染涉及到内科、外科、耳鼻喉、妇产科、口腔等临床各科,由于培养困难、阳性率低、常漏诊,漏治。本研究旨在通过构建脆弱类杆菌染色体部分基因库、克隆并筛选到可作为DNA探针的不同特异性的DNA片断,为厌氧菌感染的早期诊断提供新的先进手段提供物质基础。我们抽提纯化了脆弱类杆菌(B.fragilis ATCC25285)染色体DNA。

氟喹诺酮耐药质粒的克隆与分析

随着氟喹诺酮类抗生素在临床上日益广泛的应用,细菌的耐药性问题日趋突出,迫切需要对其耐药机理及防治进行研究。国内外迄今为止对氟喹诺酮类抗生素耐药性研究认为,细菌对这类抗生素的耐药性为染色体介导,尚未发现氟喹诺酮耐药质粒。我们首次从一株临床分离的大肠杆菌(E.coli)多种耐药株中克隆到氟喹喏酮耐药质粒,并对质粒的结构及耐药性进行了进一步的分析。通过对临床分离的多重耐药菌E.coli

耐药大肠杆菌内质粒编码β—内酰胺酶的研究

从临床上分离到一株大肠杆菌HX88108,该菌对头孢哌酮等多种抗生素高度耐药。前期实验表明此菌含有四个不同分子量及耐药性的质粒(PFC、PFT1、PFT2、PFT3),并获得了具有这四个质粒的四株转化菌。本文首先用Nitzocefin法检测到Ecoli HX88108及其四株转化菌都能产生β—内酰胺酶对头孢哌酮等四种头孢菌素的稳定性实验显示四个粒所编码的β—内酰胺酶对四种头孢菌素的水解率及水解扫描光谱各不相同。

肾病病人血清PAGE和ACE比较

在传统的ACE方法分析肾病病人血清时,都是计量白蛋白和β球蛋白在血清中的含量以确定肾病引起的蛋白质丢失情况和肾小球、肾小管受损的情况。我们用PAGE-CP分析肾病病人血清时发现,血清中PA4蛋白的丢失比自蛋白或β蛋白更严重,大多数病例血清在PAGE—CP中PA4的丢失直接可以观察而无需扫描计量,因此PA4和白蛋白、β蛋白一样,可作为肾病病人血清蛋白含量的一个特点,PAGE—CP可作为肾病诊断的一种有效方法。