miR-383-3p靶向PTEN/PI3K/Akt/mTOR信号通路对冠心病大鼠内皮细胞凋亡的影响

目的:探究微小RNA-383-3p(miR-383-3p)靶向调节人第10号染色体缺失的磷酸酶/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PTEN/PI3K/AKT/mTOR)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞凋亡的影响。方法:将SD大鼠分为control组、CHD组、mimic NC组、miR-383-3p mimic组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1-PTEN组,每组15只;除control组外其余组大鼠通过高脂饲料喂养及垂体后叶素注射构建CHD模型,造模前24h,将慢病毒液或质粒载体注射到相应组大鼠中;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测冠状动脉miR-383-3p表达;全自动生化分析仪测定大鼠血脂水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)水平;HE染色及TUNEL法观察冠状动脉组织病理变化及内皮细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-383-3p与PTEN靶向关系;Western blot检测冠状动脉组织Bcl-2、Bax及PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达。结果:与control组相比,CHD组大鼠miR-383-3p、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著减少,三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞凋亡指数(AI)、Bax、PTEN表达显著升高(P<0.05);与CHD组相比,miR-383-3p mimic组miR-383-3p、HDL-C、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著增加,TG、LDL-C、TC、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞AI、Bax、PTEN表达显著减少(P<0.05);过表达PTEN可逆转miR-383-3p高表达对CHD大鼠内皮细胞凋亡及功能损伤的改善作用;PTEN是miR-383-3p的靶向基因。结论:miR-383-3p可通过靶向抑制PTEN表达来激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,与抑制CHD大鼠内皮细胞凋亡密切相关。

miR-323-3p通过靶向TGF-β2/JNK通路影响冠心病大鼠心肌细胞的凋亡

目的:探讨微小RNA-323-3p(miR-323-3p)对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:将SD大鼠分为Control组、Model组、NC agomir组、miR-323-3p agomir组、miR-323-3p agomir+pcDNA组、miR-323-3p agomir+pcDNA-TGF-β2组,每组12只。除Control组外,其它组大鼠均采用高脂饲料喂养以构建冠心病大鼠模型。建模成功后,通过尾静脉注射对应的agomir或pcDNA进行处理,Control组、Model组尾静脉注射等量的生理盐水。2周后,测量大鼠心脏功能指标平均动脉压(MAP)、左室收缩压(LVSP)、心率(HR)的变化;HE染色检测大鼠心肌组织病理变化;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡;qRT-PCR检测大鼠心肌组织中miR-323-3p表达;Western blotting检测大鼠心肌组织中Bax、Bcl-2、转化生长因子β2(TGF-β2)及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-323-3p与TGF-β2的关系。结果:与Control组比较,Model组大鼠心肌细胞肿胀,有大量炎症细胞浸润,心肌纤维断裂,MAP、LVSP、HR、miR-323-3p、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax、TGF-β2、p-JNK蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与Model组、NC agomir组比较,miR-323-3p agomir组大鼠心肌组织病理改变显著减轻,MAP、LVSP、HR、miR-323-3p、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、Bax、TGF-β2、p-JNK蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与miR-323-3p agomir组、miR-323-3p agomir+pcDNA组比较,miR-323-3p agomir+pcDNA-TGF-β2组大鼠心肌组织病理改变显著加重,MAP、LVSP、HR、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax、TGF-β2、p-JNK蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而miR-323-3p水平变化差异无统计学意义(P>0.05);miR-323-3p靶向调控TGF-β2的表达。结论:过表达miR-323-3p可能通过抑制TGF-β2/JNK通路抑制冠心病大鼠细胞凋亡。