黑果枸杞总黄酮对HepG-2细胞增殖与凋亡的影响

目的探究黑果枸杞总黄酮抗肝癌作用的可能机制。方法采用噻唑蓝比色法检测不同浓度黑果枸杞总黄酮对LO-2细胞存活率和HepG-2细胞抑制率的影响,确定最佳干预时间和浓度,再以确定的3个质量浓度黑果枸杞总黄酮(25、50和100μg/mL)和20μg/mL顺铂给药48 h,使用细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,通过检测细胞凋亡相关酶的活性,初步考察黑果枸杞总黄酮抗肝癌的作用机制。结果黑果枸杞总黄酮对HepG-2细胞的增殖有一定的抑制作用,抑制率可达98.27%。黑果枸杞总黄酮诱导HepG-2肝癌细胞周期阻滞于S期,使细胞停止分裂和增殖,同时可通过上调Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和半胱氨酸蛋白酶3(cysteine proteinase-3,Casp-3)及下调B细胞淋巴瘤因子2(B-cell leukemia-2,Bcl-2)的表达水平来诱导HepG-2肝癌细胞的凋亡。结论黑果枸杞总黄酮对肝癌细胞具有一定的抑制作用。本研究可为后期进一步研究黑果枸杞抗肝癌作用机制提供依据。

黑果枸杞中总黄酮的降脂活性研究

目的研究黑果枸杞中总黄酮提取物对高脂血症SD大鼠的降血脂作用。方法选取造模成功的SD大鼠60只,随机分为6组(n=10),分别为正常对照组(NC组)、高脂血症模型组(MC组)、辛伐他汀组(3.3 mg/kg,S组)以及黑果枸杞总黄酮粗提物高剂量组(100 mg/kg,HF组)、中剂量组(50 mg/kg,MF组)和低剂量组(25 mg/kg,LF组)。连续灌胃给药4周,正常组喂养普通大鼠饲料,其余组喂养高脂饲料,给药结束后,采用酶标仪检测血清和肝组织液中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的浓度以及SD大鼠试验前后的体重变化率和肝指数等指标。结果黑果枸杞总黄酮中、高剂量组大鼠的血清和肝组织中TG、TC和LDL-C值与模型组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与高脂血症模型组相比,黑果枸杞总黄酮粗提取物中、高剂量组大鼠的血清和肝组织中HDL-C值增高,差异有统计学意义(P<0.05);同辛伐他汀组与高脂血症模型组比较,黑果枸杞总黄酮粗提取物中、高剂量组肝指数显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黑果枸杞总黄酮粗提物对患有高脂血症的SD大鼠有较好的降脂活性。

Box-Behnken设计响应面法优化黑果枸杞总黄酮纯化工艺

目的应用Box-Behnken设计响应面法优化黑果枸杞总黄酮纯化工艺条件及相关参数。方法考察6种大孔吸附树脂静态、动态吸附和解吸性能,用单因素试验分别对上样浓度、上样体积、上样pH、洗脱液浓度、洗脱液体积和洗脱流速进行考察,以黑果枸杞总黄酮纯化后含量为指标,再从6个单因素中选出对解吸附试验影响最显著的3个因素进行三因素三水平Box-Behnken设计响应面实验。结果NKA-9型大孔树脂为纯化黑果枸杞总黄酮的最佳树脂,最佳纯化工艺条件为总黄酮提取液浓度为4 mg/mL,pH为4.0,按5 BV进行上样,再用3 VB的80%乙醇在2 mL/min流速下进行洗脱,黑果枸杞总黄酮含量可以从4.54%提高到43.19%。结论此工艺对黑果枸杞总黄酮的纯化效果较好,工艺简单且稳定性良好,适用于工业化生产。

不同产地黑果枸杞营养成分分析比较及生药鉴定

目的分析不同产地的黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)的营养成分及生药学特征研究。方法分别选择新疆、宁夏、甘肃、青海4种不同产地黑果枸杞,按照国家标准对其水分、灰分、总蛋白、总脂肪、氨基酸及微量元素的含量进行测定、对其粉末进行性状、水试、显微和理化鉴定。结果不同产地黑果枸杞水分、灰分、铅含量无显著性差异(P>0.05),测定的其他金属元素有显著性差异(P<0.05)。新疆产地钙、锌含量最高分别为1758、14.3 mg,宁夏产地铁含量最高为240 mg,青海产地镁含量最高为1790 mg。除丙氨酸以外,其余氨基酸无显著性差异(P>0.05),性状和显微结构有一定的差异,显微结构上差异主要表现在石细胞和果皮表皮细胞上,但其Rf值无显著性差异(P>0.05)。结论4种黑果枸杞在基本组成、金属元素含量和性状都有所不同,为进一步研究黑果枸杞的保健功能提供实验基础和理论依据。

黑果枸杞多糖对H_(2)O_(2)诱导的ARPE-19细胞的保护作用

目的:分离纯化黑果枸杞多糖并进行含量分析,研究其对氧化应激损伤的视网膜色素上皮ARPE-19细胞的保护作用。方法:通过层析分离得到4组黑果枸杞多糖,分别命名为LMP-1-1、LMP-2-1、LMP-3-1、LMP-4-1。采用CCK-8法检测细胞存活率;检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量变化;Hoechst/PI染色观察细胞形态;流式细胞仪双染法考察细胞凋亡情况;Western Blot检测正常情况、H_(2)O_(2)诱导和黑果枸杞多糖干预下细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平。结果:DEAE-52纤维素分离得到4个组分LMP-1、LMP-2、LMP-3、LMP-4;Sephadex G-100层析柱纯化得到组分LMP-1-1、LMP-2-1、LMP-3-1、LMP-4-1;经Sephadex G-100柱纯度鉴定为分子量均匀的单一组分;黑果枸杞多糖浓度增高至500μg/mL时,细胞活性受抑制(P<0.05);H_(2)O_(2)浓度为400μmol/L时,ARPE-19细胞半数存活(P<0.01);黑果枸杞多糖浓度为25~200μg/mL时有保护作用(P<0.01);与模型对照组比较,LMP-2-1组SOD、GSH-Px活力显著升高,MDA含量显著下降(P<0.01);与模型对照组比较,LMP-2-1低、中剂量组ARPE-19的总凋亡率显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,模型对照组NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达显著增加(P<0.01,P<0.05);与模型对照组比较,LMP-2-1低、中剂量组NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达显著下降(P<0.01),LMP-2-1高剂量组NLRP3、IL-1β蛋白表达显著下降(P<0.01,P<0.05)。结论:纯化后的黑果枸杞多糖可提高ARPE-19细胞的抗氧化能力,并且可能通过下调NLRP3、Caspase-1及IL-1β的蛋白表达,抑制ARPE-19细胞焦亡。