重组人Ⅲ型胶原蛋白的分离纯化

利用分泌表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的毕赤酵母发酵液,通过层析条件的优化,建立了重组人Ⅲ型胶原蛋白一步层析纯化工艺。发酵液以硫酸铵(30%饱和度)沉淀胶原蛋白,沉淀用超纯水复溶后超滤转换介质至20 mmol/L磷酸缓冲液(phosphate buffer,PB)(pH 6.0),然后用SP Sepharose HP阳离子交换柱进行纯化,以20mmol/L PB (pH 6.0)-150 mmol/L NaCl洗涤杂蛋白,以20 mmol/L PB (pH 6.0)-250 mmol/L Na Cl洗脱重组人Ⅲ型胶原蛋白。采用该工艺对60 L发酵液进行重组人Ⅲ型胶原蛋白的纯化,产品纯度97.7%,总回收率68.8%,纯化的重组人Ⅲ型胶原蛋白纯度高,热原含量低,可用于医药领域。该研究建立了一步层析法从毕赤酵母发酵液中高效制备重组人Ⅲ型胶原蛋白的纯化工艺,工艺简便、稳定可靠,离子交换层析放大容易,为重组人Ⅲ型胶原蛋白的工业化生产奠定了基础。

甲醇浓度对毕赤酵母发酵表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的影响

目的:探讨不同浓度甲醇对毕赤酵母发酵表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的影响,以寻找最佳甲醇浓度,从而提高毕赤酵母分泌表达人Ⅲ型胶原蛋白的产量。方法:在15升发酵罐中研究了毕赤酵母表达重组人Ⅲ型胶原蛋白时的甲醇浓度。在通气量、搅拌转速最大的情况下,通过控制流加甲醇量,利用甲醇传感器在线检测不同甲醇浓度(0.05%、0.1%、0.2%、0.4%)对毕赤酵母高密度发酵表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的影响。结果:经优化后甲醇浓度维持在0.2%时,胶原蛋白表达量达从3 g·L-1提高到8 g·L-1。结论:控制甲醇恒定的浓度可明显提高胶原蛋白的表达量。