基于定量指纹图谱技术的经典名方清骨散基准样品量值传递分析

清骨散为第一批《古代经典名方目录》中的第69方,现代临床常用于治疗非感染性发热。但目前关于清骨散基准样品及其量值传递的研究较少,制约了其复方制剂的研发与上市,因此亟须建立一种全面、准确的质量控制方法,阐明关键质量属性。通过制备15批清骨散基准样品,明确干膏率范围,建立基准样品高效液相色谱(HPLC)定量指纹图谱测定方法并进行相似度评价,采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)技术对特征峰进行指认与归属,结合指标成分龙胆苦苷、芒果苷、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅰ和甘草酸的含量范围及转移率范围进行量值传递分析。结果表明,15批清骨散基准样品的干膏率为24.10%~26.88%,指纹图谱相似度均大于0.95,对12个共有峰进行指认,包括6个环烯醚萜类、2个黄酮类、1个生物碱类、1个三萜皂苷类以及2个其他类,其中5个成分来源于胡黄连,3个成分来源于秦艽,2个成分来源于知母,1个成分来源于银柴胡,1个成分来源于甘草;15批基准样品中指标成分的含量范围分别为龙胆苦苷17.92~27.55 mg/g、芒果苷1.83~4.42 mg/g、胡黄连苷Ⅱ23.08~36.44 mg/g、胡黄连苷Ⅰ8.43~15.04 mg/g、甘草酸0.94~2.39 mg/g,从饮片到基准样品的转移率分别为龙胆苦苷47.91%~63.95%、芒果苷22.96%~59.39%、胡黄连苷Ⅱ60.82%~77.82%、胡黄连苷Ⅰ64.25%~99.53%、甘草酸15.30%~39.30%。该研究通过清骨散基准样品定量指纹图谱与质谱定性技术相结合,基本明确其化学组成,进行量值传递研究,阐明关键质量属性,为清骨散复方制剂的质量控制提供依据。

基于UHPLC-Q/Orbitrap HRMS结合分子网络技术的经典名方清骨散基准样品化学成分分析

该研究采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q/Orbitrap HRMS)结合分子网络技术快速分析了经典名方清骨散基准样品中化学成分。首先采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(-1),柱温30℃条件下,在加热电喷雾离子源正、负离子2种模式下采集质谱数据。随后将采集的清骨散基准样品质谱数据上传至全球天然产物社会分子网络(GNPS)平台进行计算分析,并运用Cytoscape 3.8.2软件构建可视化分子网络。在此基础上,根据对照品的裂解规律,结合保留时间、高分辨质谱精确相对分子质量、特征碎片离子、文献报道及数据库匹配等信息鉴定清骨散基准样品中的化学成分。最终从清骨散基准样品中共鉴定和推测出105个化学成分,包括19个环烯醚萜苷类、23个黄酮类、15个苯丙素类、11个三萜皂苷类和37个其他类化合物,其中2个成分为潜在的新化合物。该研究采用的方法不仅实现了清骨散基准样品中化学成分的快速、准确鉴定,为清骨散复方制剂的药效物质研究和质量控制提供科学依据,也为中药复方制剂中化学成分的快速鉴定提供参考。