干扰Mtmr 3基因对C2C12细胞增殖与分化的影响

旨在探究肌管相关蛋白3(myotubularin related protein 3,Mtmr 3)对C2C12细胞增殖与分化的调控作用及机制。本试验以小鼠成肌细胞系(C2C12)为试验材料,分别使用qRT-PCR和免疫荧光染色检测Mtmr 3基因在成肌细胞生长期与分化期的mRNA表达水平和分化第6天时的分布形态。合成Mtmr 3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),试验分为siRNA NC对照组和Mtmr 3 siRNA处理组(n=3),利用EdU、CCK-8、qRT-PCR、Western blot技术检测Mtmr 3 siRNA对成肌细胞增殖与分化的影响,并通过信号通路研究调控成肌细胞增殖与分化的机制。结果显示,Mtmr 3在生长期的mRNA水平表达量总体呈下降趋势,而在分化期的表达量呈逐渐上升趋势,Mtmr3免疫荧光染色呈肌管状。干扰Mtmr 3后,细胞内Mtmr 3基因的mRNA和蛋白表达水平均极显著地降低(P<0.01);在增殖试验中,转染细胞Mtmr 3 siRNA后,极显著地增加了EdU阳性细胞占总细胞的比率和细胞活力(P<0.01);干扰Mtmr 3表达后,Pcna和Cdk4的mRNA与蛋白表达水平极显著地升高(P<0.01),Ccnd基因的mRNA表达水平极显著地升高(P<0.01)。在分化试验中,转染Mtmr 3 siRNA后极显著抑制了分化标志基因Myhc蛋白的表达水平(P<0.01),极显著抑制细胞分化第4和6天Mtmr 3、Myog和Myhc基因在mRNA的表达水平(P<0.01)。在增殖期和分化期干扰Mtmr 3表达后,Mtor和P70s6k的磷酸化蛋白表达水平分别极显著升高和极显著降低(P<0.01)。CCK-8的结果表明,与对照组相比,Mtmr 3 siRNA能够抵消部分Mtor通路特异性抑制剂Rapamycin(Rapa)的抑制作用,促进成肌细胞增殖(P<0.01);在细胞分化时加入Rapa处理成肌细胞,细胞内Mtor、P 70s6k、Myog和Myhc基因的mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。综上所述,Mtmr 3在成肌细胞生长期的表达量呈下降趋势,而在分化期的表达量呈逐渐上升趋势,Mtmr3免疫荧光染色呈肌管状。干扰Mtmr 3基因表达,通过激活Mtor通路促进成肌细胞增殖,通过失活Mtor通路抑制成肌细胞分化。

“门神”外公

"我讨厌他!"为什么别人的外公那么慈祥,他却跟门神一样凶!"为什么偏偏他是我的外公?!"明明是他不讲理,为什么我却要听他的?!"讨厌!讨厌!!讨厌!!!"我把一肚子的不满和怨恨尽情地在日记里宣泄出来,每一笔都写得重重的,甚至有几次把纸都划破了。委屈的眼泪一大颗一大颗地往下掉.