宫颈癌组织中Ⅲ型和Ⅴ型胶原蛋白的表达水平研究

目的探讨宫颈癌发生与Ⅲ型、Ⅴ型胶原蛋的关系。方法收集宫颈癌新鲜组织标本36例和对照组织25例,提取总RNA后,利用实时荧光定量PCR方法对COL3A1、COL5A1和COL5A2 mRNA进行定量分析。另选取宫颈癌和对照组组织石蜡包埋切片各30例,通过免疫组化方法检测COL3A1蛋白表达水平。结果与对照组相比,宫颈癌组织中COL3A1 mRNA表达水平下调,差异具有统计学意义(P<0.05),但COL5A1和COL5A2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。COL3A1蛋白在宫颈癌组织中表达下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织中COL3A1基因和蛋白的表达水平下调。

高良姜素对宫颈癌SiHa细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨高良姜素(Galangin)对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡及基因表达的影响。方法从高良姜(Alpinia officinarum Hance)中提取分离高良姜素,(1)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,检测空白对照组、不同浓度高良姜素干预组、顺铂(Cisplatin)组SiHa细胞在24、48、72 h内的细胞存活率、用荧光倒置显微镜观察对细胞形态的影响。(2)采用流式细胞检测法检测高良姜素在24 h内对Siha细胞凋亡的影响。(3)采用荧光定量PCR的方法,分析半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)和CDK4等基因在高良姜素干预前、后的表达水平。结果以高良姜素干预宫颈癌Si Ha细胞后,与空白对照组比较,细胞存活率明显下降并呈剂量和时间依赖性;早期凋亡率明显上升,并呈剂量依赖性;细胞凋亡因子Caspase 3上调表达(P<0.05),呈剂量依赖性,而高良姜素干预前、后细胞周期蛋白激酶CDK4的表达调控无统计学意义(P>0.05)。结论高良姜素能抑制宫颈癌Siha细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机理可能通过提高细胞凋亡执行因子的活性诱导细胞凋亡,从而表现出抗肿瘤活性,但对细胞周期的影响需要进一步研究。

HPV16编码蛋白与宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2表达的关系

目的:研究人乳头瘤病毒16(HPV16)编码蛋白的表达与宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2基因表达水平的关系,探讨依赖于HPV感染的宫颈癌发病机制。方法:设计与合成HPV16编码基因E6和E7序列特异性短发夹RNA(sh RNA)寡聚核苷酸片段,构建表达sh RNA的p RNAi载体,其中携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,以此感染HPV16阳性的Si Ha宫颈癌细胞,采用荧光成像和实时荧光定量PCR(q PCR)分析等方法,评价载体转染效率、抑制效率及候选基因转录表达水平的变化。结果:在激光共聚焦显微镜下,观察到释放绿色荧光的细胞群,转染成功;根据定量q PCR分析,HPV16编码基因E6和E7的m RNA表达水平明显下降,sh RNA表达载体转染产生抑制效率;CDK4和BCL-2 m RNA表达水平明显下降,推测抑制HPV基因转录后,可能抑制宫颈癌细胞生长,引起细胞周期停滞;抑制E7基因表达后,CALCA和TFPI-2 m RNA表达水平明显上升,而抑制E6基因表达后,对上述基因表达水平的影响不明显。结论:HPV16编码蛋白质E7可能引起宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2基因表达下调,此为揭示依赖于HPV感染的宫颈癌发病机制提供了依据。

宫颈癌发生与ApoE、 CLU和RelB表达调控的关系及意义

目的：以往研究显示，宫颈癌发生可能与体内ApoE、 CLU、 RelB和mTOR等血浆蛋白质表达水平变化存在一定的关系。此研究探讨宫颈癌发生与肿瘤组织中上述蛋白质的表达水平的关系，为建立宫颈癌早期预警指标提供依据。方法收集维吾尔族和汉族妇女宫颈鳞癌（ cervical squamous cell carcinoma， CSCC）组织标本36例和正常对照组织25例。设计与合成ApoE、 CLU、 RelB和mTOR的mRNA序列特异性引物，采用定量RT？PCR方法，对宫颈癌和正常对照组织RNA进行mRNA表达水平鉴定。结果肿瘤组织中ApoE、 CLU和RelB 3种基因的转录水平上调，与正常对照组比较有显著差异（P＜0．05），但是mTOR表达水平无统计学差异（P＞0．05），其中ApoE、 CLU和RelB表达水平变化与以往研究报道的血浆水平变化一致。结论宫颈癌的发生与肿瘤组织内ApoE、 CLU和RelB表达水平上调存在密切关系，与血浆水平变化一致，证明这些基因可能成为宫颈癌早期预警的组织和血浆检测指标。