兰州市部分地区鸡马立克病流行病学调查

旨在了解兰州市及其周边地区鸡马立克病的流行情况及流行毒株meq基因的分子特征,对该病的进一步预防及控制提供参考。随机采集集约化养殖场950份羽髓和950份血液样品,进行琼脂免疫扩散试验、PCR检测及meq基因的检测和序列比对。结果表明,马立克的平均抗原阳性率为1.47%,PCR检测阳性率为2.52%,meq基因检测阳性率为1.37%,此位点4株突变株与MDV各参考毒株同源性为98.8%～100.0%。可见,所得突变株都具有强毒株的特征,突变与毒力强弱存在一定相关性。

青贮饲料中优良乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性研究

为筛选优良的青贮饲料添加剂,采用平板分离法从青贮饲料中分离乳酸菌,通过细菌形态学、生理生化特征鉴定和16S rRNA基因序列分析相结合的方法对分离出的细菌进行鉴定。通过产酸性试验和抑菌试验对分离出来的12株乳酸菌进行筛选,并对筛选出的6株乳酸菌进行生物学特性比较。结果显示,5株为戊糖片球菌,4株为植物乳杆菌,1株为发酵乳杆菌,1株为肠系膜明串珠菌肠膜亚种,1株为屎肠球菌;菌株B1-6、B1-7、B2-3、B2-8、B3-1、B5-2的产酸能力和抑菌效果较好;菌株B1-7和B5-2生长最快,8 h后进入稳定期,其余菌株14 h后进入稳定期;菌株B1-7在培养温度高于45℃,培养基pH>10和含盐量>0.08g/mL时不再生长,其余菌株均具有良好的抗逆性具备青贮潜力,可作为秸秆青贮的生物添加剂做进一步研究。

PRNP基因SYBR GreenⅠ双标准曲线法荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立双标准曲线法荧光定量PCR检测方法,以PRNP为目标基因、β-actin为内参基因进行扩增,将扩增产物连入pMD18-T载体,获得阳性标准品进行定量扩增。并将MDV标准毒株MD5、疫苗株CV1988和1株野毒株接种CEF,收集不同日龄病变细胞以提取RNA,用以上方法进行扩增。把结果代入标准曲线公式进行计算,分析PRNP基因表达与MDV致瘤的相关性。结果显示,该方法能检测出的PRNP基因和β-actin基因的最低拷贝数为1×103,特异性和重复性较好。相对于对照组,接种3株毒株的PRNP的表达量都有明显的差异。表明MDV的感染对PRNP的表达量确实存在影响。据此推测PrPC对MDV的感染可能发挥着重要的生理功能。

兰州市及周边地区禽白血病病毒的分子流行病学调查

为了解兰州市及周边地区禽白血病的流行情况及流行毒株的分子特征,从该地区11个鸡场和2个屠宰场采集抗凝鸡血1 294份,应用自建的禽白血病病毒(ALV)A、B、J亚群多重PCR诊断方法检测了A、B、J亚群的感染率与分布,进行了各亚群流行毒株gp85基因的序列分析。从1 294份样品中,共检出外源性ALV 486份,平均检出率为37.56%。其中检出ALV-A亚群16份,感染率为1.24%;ALV-J亚群383份,感染率为29.60%;ALV-A/J亚群68份,感染率为5.26%;ALV-B/J亚群19份,感染率为1.47%。序列分析表明,J亚群流行株gp85基因的核苷酸序列的同源性介于98%～100%,与J亚群英国毒株HPRS-103、美国毒株ADOL-7501、国内分离株SD9902、本实验室保存毒株(JX1、JX2、AH2和GZ1)间的同源性分别为97%～98%、86%～88%、96%～97%、98%～100%。在J亚群流行株中,发现gp85基因有13个核苷酸突变型,在共104个碱基置换中71个为异义突变、33个为同义突变,可区分为8个氨基酸突变型,突变位点主要集中在第200～400bp、第500～600bp范围的核苷酸之内和第120～240aa内。gp85基因进化关系分析表明,本地区J亚群流行株的8个氨基酸突变型均与英国毒株HPRS-103及国内分离株JX1、JX2、AH1和GZ1处于同一进化树分支。调查结果表明,兰州市及周边地区外源性禽白血病病毒感染现象较为严重且以J亚群为主,部分鸡场也可同时检出A、B亚群。