长鳍金枪鱼多肽制备及其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用

目的:以长鳍金枪鱼废弃物为原料提取多肽,探究其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用。方法:以H2O2诱导张氏肝细胞损伤建立细胞模型组,以相对增殖率为指标筛选长鳍金枪鱼废弃物最适酶种,通过正交试验确定最佳酶解条件。酶解产物经超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱方法纯化分离得到多肽,用噻唑蓝(MTT)比色法对其每步分离效果进行评价。多肽活性的评价是利用试剂盒方法测定张氏肝细胞上清液中AST、ALT、MDA、ADH和SOD的含量,倒置显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测多肽对H2O2诱导后的张氏肝细胞凋亡的影响。结果:最适酶种为胰蛋白酶,最佳酶解条件为料液比1∶3(g/mL),pH 9,加酶量900 U/g,温度45℃,时间5 h。经一系列纯化后制成多肽,命名为长鳍金枪鱼多肽。其氨基酸序列为Gly-Ala-Pro-Gly-Glu-Arg-Gly-Ser-Lys-Cys-Phe-Lys。经长鳍金枪鱼多肽作用于H2O2诱导的张氏肝细胞后,ALT、AST、ADH和MDA含量下降,SOD含量上升。通过流式细胞仪检测发现晚期凋亡细胞相比于模型组减少明显。结论:利用酶解方法提取的长鳍金枪鱼多肽对H2O2损伤的张氏肝细胞具有一定的保护作用。

长鳍金枪鱼多肽的酶解制备工艺研究

通过酶解法制备具有对H_2O_2诱导的张氏肝细胞保护作用的长鳍金枪鱼多肽。以长鳍金枪鱼下脚料为原料,采用胰蛋白酶进行酶解,以张氏肝细胞的相对增殖率为指标,通过单因素试验和响应面优化试验确定该酶的最佳酶解条件, HE染色观察张氏肝细胞形态变化。结果表明,最佳酶解条件为:料酶解pH 7.28,酶解温度45.29℃,时间5.05 h,所得酶解产物对张氏肝细胞的相对增殖率为53.1%。HE染色显示长鳍金枪鱼多肽对H_2O_2诱导的张氏肝细胞起一定保护作用。该工艺研究为长鳍金枪鱼多肽的分离纯化及开发护肝功能食品提供试验依据。